Para comenzar, inicie el software de análisis de datos en una computadora de escritorio. Haga clic en archivo, seguido del navegador y elija seleccionar carpeta para abrir la carpeta que contiene los datos de imagen adquiridos. Seleccione varias filas relacionadas con las imágenes elegidas, incluidos los controles no infectados y excluyendo las imágenes sobresaturadas.
Anote el ID de la imagen en un cuaderno de laboratorio junto con la información registrada durante una segunda sesión de imágenes. Haga clic en cargar como grupo para ensamblar las imágenes seleccionadas. Ahora haga clic en el icono de guardar para guardar la nueva imagen de secuencia en una nueva carpeta para volver a analizar los datos sin procesar si es necesario.
A continuación, haga clic en opciones seguidas de visualización y seleccione el factor de agrupación para identificar la agrupación utilizada para cada imagen. El factor de agrupación adquirido se mostrará en la parte superior de cada imagen de la secuencia. Para corregir todos los factores de agrupación al mismo valor, primero, haga doble clic en la imagen que se va a ajustar.
En la ventana del amigo de herramientas, haga clic en la opción de ajuste de imagen, luego elija el factor de agrupación apropiado. Haga doble clic en la imagen de ratones no infectados, luego seleccione la opción recuentos en el campo de unidad. Ajuste la escala de colores a un valor mínimo de 600.
Elija las opciones de radiación en el campo unidades para ver la radiación de la imagen resultante. Con la ventana de secuencia activa, elija la opción resplandor en el campo de unidades. Desactive el cuadro individual en el área de límites de la escala de colores para ajustar la escala de colores y la tabla de colores en la paleta de herramientas.
Marque la escala logarítmica y las casillas manuales y, a continuación, establezca los números máximos de escala según el control no infectado y el área con la señal más alta como el máximo. Después de establecer la misma escala para todas las imágenes, haga doble clic en cada imagen, maximice la ventana y use la opción de exportación de gráficos para exportar la vista de imagen en un formato de imagen. Asigne un nombre a los archivos por tratamiento, seguido del ID de los ratones y el punto de tiempo.
Haga doble clic en la imagen de la secuencia. En la ventana de la paleta de herramientas, haga clic en la sección de la herramienta ROI y, a continuación, pulse el icono cuadrado. Dibuja un rectángulo sobre todo el ratón.
Haga clic en el borde del ROI creado y copie y pegue el mismo ROI para cada mouse. A continuación, asigne un nombre a los ROI que se van a registrar. A continuación, haga clic en el icono de guardar en la sección de la herramienta ROI.
Seleccione la casilla Aplicar a la secuencia. A continuación, aplique los ROI guardados para todas las imágenes haciendo clic en cargar. Ajuste la posición del ROI de cada ratón para que se ajuste mejor a ellos en el área de medición.
Cuando todos los ratones hayan sido etiquetados, haga clic en la opción medir el retorno de la inversión. Debería aparecer la tabla de mediciones de ROI. Establezca los tipos de medición en radiancia, los atributos de la imagen en todos los valores posibles y las dimensiones del ROI en centímetros.
A continuación, haga clic en la opción seleccionar todo seguida de copiar. Pegue los datos directamente en el software de análisis de tablas. Organice las columnas de datos para ordenar los grupos correctamente.
A continuación, codifique por colores los datos por grupos en la hoja de cálculo. Organice los valores de flujo total para que coincidan con los valores de flujo total ventral y dorsal del mismo ratón. A continuación, súmalos para obtener la bioluminiscencia de todo el cuerpo de cada ratón.
Calcule la media y la desviación estándar de los valores sumados para cada grupo. Trace los datos en un software estadístico para generar gráficos. Por último, crea un panel con imágenes bioluminiscentes.
Coloque cada ratón en columnas y los puntos de tiempo en filas para construir una matriz de eficacia del medicamento. Cuando se aplica el método de bioluminiscencia para evaluar agentes antiparasitarios, se construye una matriz de eficacia del fármaco para comparar los compuestos de prueba, ejemplificados aquí por el posaconazol, con el tratamiento farmacológico estándar utilizado para la enfermedad de Chagas, el benznidazol a 100 miligramos por kilogramo administrado una vez al día. En este estudio longitudinal, el curso del tiempo de infección se ilustra comparando un grupo no tratado con otros tratados.
Los resultados demuestran una reducción de la carga parasitaria, como indica la reducción de la bioluminiscencia, o una recaída mostrada por el aumento de la carga parasitaria y la consiguiente detección de luz, lo que sugiere un compuesto o régimen de tratamiento ineficaz. La luz cuantificada está representada por la suma del flujo total ventral y dorsal en fotones por segundo en función del tiempo de infección.
