Para empezar, con unas tijeras y unas pinzas romas, levanta y corta la piel de un ratón anestesiado sobre la vena yugular derecha. Corta una ventana redonda en la piel lo suficientemente grande como para exponer la vena yugular y parte del tejido circundante. Empuje suavemente a un lado el tejido adiposo, los ganglios linfáticos y el tejido conectivo mediante la técnica de disección roma.
A continuación, llene una jeringa de 20 mililitros con solución salina normal calentada a 37 grados centígrados. Cargue la jeringa en la bomba de infusión de jeringa. A continuación, conecte una aguja de mariposa de calibre 27 y el tubo asociado a la jeringa.
Ajuste la bomba de jeringa a un caudal de 0,5 mililitros por minuto para eliminar la sangre de la vena o arteria perforada. Coloque el chorro de solución salina unos pocos mililitros a un lado del sitio de la punción y no directamente sobre él. Una vez que se haya limpiado la vena yugular, inicie el temporizador.
Obtenga agujas hipodérmicas de calibre 30 y 33 para la vena yugular y la arteria femoral respectivamente. Gire el bisel hacia arriba. A continuación, coloque la aguja en un ángulo de 25 grados sobre la vena yugular o la arteria femoral.
Después de anotar la hora, perfore rápidamente la parte superior de la embarcación. Fíjate en el tiempo que tarda el sangrado en detenerse por completo. Esperar a que se forme un trombo antes de iniciar la fijación de la perfusión.
Una vez finalizada la perfusión, diseccionar la parte de la vena yugular con el sitio de punción y el trombo. Use un par de tijeras afiladas para hacer un corte diagonal a través del extremo distal del segmento del vaso y haga un corte recto a través del extremo proximal del segmento del vaso. A continuación, coloque el tejido fijo a cuatro grados centígrados durante 24 horas.
Al día siguiente, vierta la solución tampón de cacodilato de sodio en una placa de cultivo de 35 milímetros que contenga una estera de silicona de cinco milímetros de grosor. Transfiera con cuidado el tejido al tampón, asegurándose de que esté sumergido en el tampón. Con clavos de acero inoxidable y un par de pinzas finas, sujete con cuidado cada extremo del recipiente a la estera.
Limpie cuidadosamente la vena yugular. Con un par de microtijeras, corte longitudinalmente la pared del vaso frente al lugar de la punción. Abra suavemente el recipiente y, a continuación, sujételo a la alfombrilla de silicona con el lado intraluminal hacia arriba.
Retire la solución tampón del plato. Luego agregue 1% de paraformaldehído para sumergir el recipiente. Coloque inmediatamente la tapa en el plato para evitar que se seque.
