Después de la decapitación, esterilizar el cuerpo del ratón neonato anestesiado con etanol al 70%. Con fórceps y tijeras quirúrgicas de punta fina, haga una incisión entre el abdomen y las patas traseras. A continuación, retira la piel tirando de ella hacia el pie de las extremidades traseras.
Raspe el tejido conectivo y el músculo unido a los huesos con pinzas afiladas. Corta la tibia y el fémur con unas tijeras. Use fórceps para colocar la tibia y el fémur en un tubo de medio de cultivo MEM sobre hielo.
Transfiera los huesos a un colador de 40 micras con un tubo de recolección. Triture los huesos con un émbolo de jeringa de tres mililitros contra el colador para liberar la médula. Centrifugar la suspensión celular a 350 G durante cinco minutos a cuatro grados centígrados.
Aspire el sobrenadante y vuelva a suspender suavemente las células en cloruro de sodio al 0,2% para hacer una solución hipotónica para la lisis de los eritrocitos. Agregue inmediatamente un volumen igual de cloruro de sodio al 1,6% para hacer que la solución sea isotónica. Centrifugar el sobrenadante y retirar la solución de lisis.
Vuelva a suspender las células en DMEM completo y cuente las células en un contador de células automatizado.
