Electroporación del músculo esquelético del elevador auris longus in vivo para estudiar la regeneración de NMJ en ratones

Para comenzar, asegúrese de que todas las herramientas de disección y el espacio de trabajo se hayan esterilizado en autoclave y estén limpios. Coloque un ratón CF-1 anestesiado en la mesa quirúrgica. Use una jeringa Hamilton para inyectar por vía subcutánea 20 microlitros de 2 miligramos por mililitro de hialuronidasa en PBS.

Pesar al ratón para determinar la dosis aproximada de meloxicam y colocar al animal en una jaula vacía para una recuperación de 30 minutos. Después de volver a anestesiar al ratón, haga una incisión de 8 milímetros sobre la sutura sagital del cráneo. Con unas tijeras y fórceps, retire suavemente la grasa y el tejido conectivo debajo de la piel para exponer el músculo elevador del auris largo o LAL.

Con una jeringa Hamilton, inyecte 10 microlitros de ADN de origen comercial en la fascia del músculo. Coloque dos electrodos de aguja de oro a 5 milímetros de distancia en alineación paralela sobre las fibras musculares, cubriendo toda la longitud del músculo LAL. Ahora, use un operador eléctrico para aplicar cinco pulsos eléctricos a 100 voltios por centímetro durante 20 milisegundos cada uno con una frecuencia de 1 hercio.

El examen microscópico mostró que una alta proporción de fibras musculares de la porción LAL rostral fueron positivas para la expresión de tomate dímero en tándem, lo que confirma la transferencia génica eficiente mediada por electroporación in vivo de los músculos LAL.