Para empezar, recupere de la incubadora la placa que contiene los insertos de cultivo celular con monocapas 2D derivadas de organoides. Retire los medios de cultivo monocapa de las cámaras apical y basolateral de los insertos de cultivo celular que se van a evaluar. Lave suavemente las cámaras apical y basal dos veces con 200 y 500 microlitros de PBS precalentado.
Retire la solución de lavado de la cámara apical y aplique 200 microlitros de 0,5 miligramos por mililitro de cuatro kilodalton de trazador FITC-dextrano en PBS a la cámara apical del inserto de cultivo celular. Incubar la placa en una incubadora humidificada a 37 grados centígrados y 5% de dióxido de carbono durante 20 minutos. A continuación, tome muestras de 50 microlitros de la cámara basolateral de la placa incubada de 24 pocillos y transfiéralas a una placa de 96 pocillos compatible con un lector de microplacas.
Reemplace 50 microlitros de PBS fresco en la cámara basolateral del pocillo muestreado. Utilizando un lector de microplacas precalibrado, mida inmediatamente la intensidad de fluorescencia a una longitud de onda de excitación de 495 nanómetros y una longitud de onda de emisión de 535 nanómetros.
