Para empezar, establecer los esferoides multicelulares tridimensionales o MCS a partir de adenocarcinoma de pulmón humano o células A549 iRFP. Siembre las células en una microplaca de esferoide de fondo redondo de fijación ultra baja de 96 pocillos utilizando 100 microlitros de medio de crecimiento completo suplementado con 0.3% de colágeno. Centrifugar las microplacas a 300 g durante siete minutos a cuatro grados centígrados para facilitar la formación de MCS.
Después de la centrifugación, examine la morfología del esferoide bajo un microscopio para asegurar la agregación celular. Reemplace 100 microlitros de medio de crecimiento en cada pocillo con medio de crecimiento completo nuevo cada dos días. Mientras observa bajo un microscopio, elija esferoides con una forma redonda y bordes lisos en general, pero con cinco a 10 brotes ásperos y un diámetro apropiado.
Mida la fluorescencia iRFP para seleccionar el MCS con señales fluorescentes dentro de una desviación estándar del promedio.
