Comenzar el procedimiento quirúrgico en el ratón debidamente anestesiado inyectando clorhidrato de buprenorfina por vía subcutánea para reducir el dolor. Aplique ungüento oftálmico en los ojos para prevenir la sequedad. Coloque al ratón en una postura dorsal y asegure las extremidades en una posición de estiramiento con cintas.
Desinfecte la piel de la espalda con hisopos alternos de yodo y alcohol, al menos tres veces cada uno. A continuación, con unas tijeras quirúrgicas, haga una incisión de 0,5 a un centímetro en la parte trasera izquierda del animal. Use fórceps con cuidado para separar los tejidos musculares y grasos hasta que la pared torácica y el movimiento pulmonar sean visibles.
Con una pipeta, transfiera un esteroide multicelular seleccionado, o MCS, de una microplaca a una placa de Petri de vidrio que contenga PBS helado. Conecte una aguja de calibre 20 a una jeringa de vidrio de 100 microlitros y enfríelas previamente con hielo. A continuación, extraiga 20 microlitros de una mezcla preenfriada de PBS y Matrigel.
Utilice la jeringa para aspirar rápidamente un MCS de la placa de Petri en un volumen mínimo de mezcla de PBS-Matrigel y manteniendo el esferoide en la parte metálica de la aguja. Inserte suavemente la aguja verticalmente entre dos costillas a una profundidad de aproximadamente tres milímetros e inyecte lentamente los 20 microlitros de la mezcla que contiene el MCS aspirado. A continuación, retire la aguja con cuidado.
Aplique una pomada antibiótica triple en la herida. Selle la incisión con clips quirúrgicos que se retirarán después de dos semanas. Coloque al animal sobre una almohadilla térmica infrarroja y cúbrala con toallitas de laboratorio para mantener la temperatura corporal.
Vigile al animal durante al menos 30 a 60 minutos hasta que se despierte y se mueva correctamente. Utilizando un sistema de imágenes de animales pequeños en un canal de 700 nanómetros, mida la señal fluorescente IRFP del xenoinjerto tumoral del ratón anestesiado cada tres o cuatro días. Mida la fluorescencia en cuatro posturas, izquierda, derecha, dorsal y ventral.
La intensidad neta de la fluorescencia tanto del lado izquierdo como del ventral mostró una tendencia similar de progresión tumoral, con una fluorescencia del lado ventral ligeramente más lenta que la fluorescencia del lado izquierdo.
