Para comenzar, obtenga corazones de ratón electrooperados extraídos de ratones CD1 de tipo salvaje, de 12 a 12,5 días después del cruce. Transfiera un corazón a un tubo que contiene un mililitro de medio de digestión helado. Con una jeringa, aplique una presión suave sobre el corazón unas cuantas veces para picarlo.
Incubar el tejido picado en una placa caliente a 37 grados centígrados durante 45 minutos a 600 rotaciones por minuto. Luego filtre la mezcla de digestión a través de un colador de celdas de 70 micrómetros en un nuevo tubo. A continuación, vuelva a filtrar el volumen de paso con un filtro de células de 40 micrómetros en un nuevo tubo de 50 mililitros.
Pipetear 500 microlitros del FBS en el filtrado. Compensar el volumen hasta 30 mililitros con DMEM frío. Centrifugar la suspensión a 240 g durante 10 minutos a temperatura ambiente.
Deseche el sobrenadante. A continuación, coloque el tubo boca abajo sobre una toalla de papel para que se seque por completo. Para la clasificación de células, vuelva a suspender las células en 300 microlitros de tampón de clasificación.
Por último, añade 0,3 microlitros de DAPI y realiza la clasificación de las células. Los corazones latían y parecían estar en buenas condiciones 24 horas después de la electroporación. El miocardio y el epicardio no mostraron signos de apoptosis.
El análisis de la actividad de fluorescencia mostró una señal de GFP en mosaico en casi todas las cuatro cámaras del corazón.
