Para la preparación de la placa donante, transfiera 500.000 células de pez cebra CG1 de tipo salvaje a un tubo cónico de 15 mililitros. Agregue cinco mililitros de medio de pescado para diluir el stock de células a 100 células por microlitro. Dispense 50 microlitros de la suspensión celular en cada pocillo de la placa de 96 pocillos y coloque la placa a cuatro grados centígrados hasta la clasificación.
Prepare controles sin manchas y de un solo color para la configuración del experimento de clasificación. Pase la suspensión celular de los controles y las muestras a través de una tapa de filtro de 35 micras a un tubo de fax con hielo. Centrifugar la placa de 96 pocillos a 2.500 G a cuatro grados centígrados.
Retire con cuidado 45 microlitros del sobrenadante de cada pocillo, dejando cinco microlitros de líquido. Vuelva a suspender las células con una pipeta de 20 microlitros y, utilizando la microjeringa Hamilton, inyecte las suspensiones celulares en el número deseado de pez cebra CG1. Después de trasplantar pez cebra CG1 con células clasificadas para el análisis de dilución limitante, las células altas de CT-FR tuvieron una frecuencia de células madre leucémicas cuatro veces mayor en comparación con las células bajas de CT-FR.
Las imágenes representativas del pez cebra a los 28 días después del trasplante mostraron que el 89% de los peces cebra con CT-FR alto desarrollan leucemia en comparación con el 20% en el grupo con CT-FR bajo. El pez cebra CT-FR tuvo una latencia significativamente más corta para la leucemia. El pez cebra alto CT-FR tuvo una supervivencia general significativamente menor en comparación con el pez cebra bajo CT-FR.
