Análisis no sesgado de los cambios microvasculares en los lóbulos pulmonares murinos teñidos con isolectina B4 mediante ImageJ

Para comenzar, obtenga isolectina B4 o IB4 y secciones de tejido pulmonar de ratón teñidas con DAPI. Adquiera imágenes bajo un microscopio de fluorescencia con un objetivo 10x. Importe las imágenes al software ImageJ y selecciónelas.

Divida los canales en consecuencia y cargue el archivo en formato ND2 para los canales DAPI e IB4. Vaya a Analizar, Establecer escala. Configure los parámetros de la imagen y, a continuación, seleccione Global, seguido de OK.To establecer el mismo rango de visualización, vaya a Imagen, ajuste el contraste de brillo y haga clic en Establecer.

Establezca el rango de visualización para IB4 de cero a 10.000 y el de DAPI de cero a 20.000. Para eliminar el fondo, haga clic en Procesar, seguido de matemáticas. Reste la señal de fondo en función de los valores detectados por la herramienta de varita mágica en el fondo.

Para seleccionar el mejor valor de umbral, vaya a Imagen y haga clic en Duplicar. Seleccione el tipo de imagen original y duplicada a 8 bits. A continuación, en la pestaña Imagen, seleccione Ajustar seguido de Umbral y Entrar en los modos.

Después de elegir el umbral más realista, seleccione Fondo oscuro y aplíquelo. Con la herramienta de varita mágica, seleccione vasos sanguíneos más grandes en comparación con la imagen duplicada y, a continuación, haga clic en Eliminar para eliminar las señales positivas de IB4 de las arterias y venas grandes. Para contar el número de señales objetivo, haga clic en Analizar, seguido de Establecer mediciones, y marque Área, Límite al umbral y Etiqueta de visualización.

A continuación, seleccione Analizar partículas y modifique Tamaño de cero a infinito, Circularidad de cero a uno y Mostrar como máscaras de superposición. Marque Resumir y haga clic en Aceptar. Por último, elija Resumen. Haga clic en Archivo y guarde los resultados.

El porcentaje de focos positivos para IB4 en los lóbulos craneal, medio, caudal, accesorio y del pulmón izquierdo se pudo distinguir entre los ratones jóvenes y los de mediana edad mediante el análisis de ImageJ.