Para comenzar, descongele el pasaje, un preadipocito subcutáneo blanco humano, y agregue las células en un matraz T75 que contenga de 12 a 15 mililitros de medio de crecimiento de preadipocitos calientes-2. Después de que las células alcancen el 90% de confluencia, lávelas con PBS e incube con un mililitro de solución de tripsina-EDTA al 0,25% durante dos minutos. Con un microscopio óptico, confirme el desprendimiento celular y agregue 23 mililitros de medio de crecimiento de preadipocitos-2 a las células.
Dispense un mililitro de suspensión celular en cada pocillo de una placa complementaria de cocultivo de 24 pocillos e incube la placa para lograr la confluencia celular. A continuación, sustituya el medio por un mililitro de medio de diferenciación de preadipocitos e incube a 37 grados centígrados con un 5% de dióxido de carbono durante 10 días. En el sexto día de diferenciación, siembre cinco veces 10 a la potencia de cuatro MVECs SAT humanos en 500 microlitros de medios de crecimiento MVEC completos en un inserto transwell.
Coloque el inserto en un pocillo que contenga 500 microlitros de medios de crecimiento MVEC completos e incube a 37 grados centígrados con 5% de dióxido de carbono. En el día 10, cuando los adipocitos estén completamente diferenciados, retire la mitad del medio de cada pocillo y transfiera los insertos transpocillos que contienen MVEV SAT de confluencia a cada pocillo. Incubar la placa durante 24 horas para obtener un co-cultivo.
A medida que los preadipocitos blancos subcutáneos humanos se diferencian, se puede notar el desarrollo de vacuolas lipídicas.
