Para empezar, extrae el ADN de las muestras de moscas utilizando un kit de extracción de ADN. A continuación, utilice un lector de microplacas para determinar los valores de OD260 y OD280 para comparar la pureza del ADN y la concentración de ácidos nucleicos. A continuación, prepare soluciones estándar de fluorímetro añadiendo 190 microlitros de solución de trabajo a dos tubos de centrífuga de 0,5 mililitros.
A continuación, añada 10 microlitros de cada uno de los dos y 10 microlitros a las soluciones de trabajo. Mantenga los tubos alejados de la luz durante al menos 15 minutos. Mezcle dos microlitros de ADN de prueba con 198 microlitros de solución de trabajo en un tubo de centrífuga de 0,5 mililitros y mantenga la mezcla en la oscuridad durante al menos 15 minutos.
Después de 15 minutos, encienda el fluorómetro y seleccione la medición de la concentración de dsDNA, configuración de largo alcance. Pruebe el estándar uno y el estándar dos para obtener la curva estándar. A continuación, coloque las muestras que se van a analizar en los pocillos de ensayo.
Ajuste el volumen de aumento de ADN a dos microlitros y realice la medición. Para visualizar el ADN, primero se configuraron 20 microlitros de la reacción de amplificación por PCR. Coloque los tubos en un termociclador y ejecute los ciclos de PCR.
Después de la PCR, someter los productos a electroforesis en gel de agarosa al 2%. A continuación, coloque el gel en un sistema de imágenes de gel para el fotoanálisis. La evaluación de la pureza del ADN extraído mediante un lector de microplacas mostró que todas las muestras frescas y la muestra antigua tenían proporciones de OD260 a OD280 superiores a dos.
Por el contrario, la muestra anterior dos mostró una proporción más baja. La concentración de ADN derivada de las lecturas de OD260 fue más alta en las muestras frescas, seguida de la muestra antigua uno y la más baja en la muestra antigua dos. El análisis electroforético reveló bandas en el rango de 250 a 400 pares de bases, que eran más pronunciadas en las muestras frescas, en comparación con las antiguas.
