24 horas después de la inyección de nanopartícula magnética, anti-microRNA 10b, pesar el ratón y calcular el volumen de d-luciferina a administrar para una dosis de 150 miligramos por kilogramo. Prepare una jeringa de calibre 28 con el volumen protegiendo la solución de la luz directa. Una vez anestesiado, frote suavemente el ratón para evitar lesionar más el sitio quirúrgico e inyecte la dosis de d-luciferina por vía intraperitoneal.
Deje que el mouse se recupere y espere 10 minutos antes de tomar imágenes. Después de preparar un sistema de imágenes in vivo, o un escáner IVIS, coloque la alfombra negra de baja fluorescencia en la platina de imágenes y configure el conjunto de conos de la nariz para la obtención de imágenes. En el software, haga clic en Asistente de imágenes.
A continuación, seleccione imágenes de bioluminiscencia, seguido de filtro abierto. En la siguiente pantalla, seleccione el sujeto de la imagen y el campo de visión. Coloque el ratón anestesiado en posición prona en el escáner IVIS.
Haga clic en la secuencia de adquisición y, mediante la configuración de exposición automática con un umbral de señal mínimo de 3000 recuentos, capture una imagen para la localización de células de glioblastoma U-251 marcadas con luciferasa. A continuación, en el asistente de imágenes, seleccione fluorescencia, seguido de par filtrado con iluminación epi. En la siguiente pantalla, seleccione la sonda, Cy5.5.
Seleccione el sujeto de la imagen y el campo de visión. Utilizando la configuración de exposición automática con un umbral de señal mínimo de 6.000 recuentos, capture una imagen para la localización de nanopartículas magnéticas, anti-microRNA 10b. Coloque al ratón anestesiado boca abajo en la cama de resonancia magnética.
Inmovilice y coloque la cabeza para escanear con una barra de mordida y barras para los oídos. Instale la sonda de temperatura rectal lubricada y asegúrese de que el monitoreo de la respiración y la temperatura funcione. Coloque la bobina cerebral del ratón sobre la cabeza colocando las clavijas de la cama del ratón en los orificios de la bobina y pegue la bobina en su lugar para reducir el movimiento durante el escaneo.
Coloque una pequeña almohadilla de circulación de agua tibia sobre la parte superior del mouse para mantener la temperatura corporal. Mueva el ratón y la base de imágenes a su posición para el escaneo. En el software de adquisición, inicie el paso de configuración de bamboleo para ajustar y hacer coincidir las bobinas de resonancia magnética.
Asegúrese de que el seguimiento esté centrado y sea lo más profundo posible. Adquirir una exploración localizadora de tres planos del cerebro. Con los siguientes parámetros, adquiera exploraciones bidimensionales ponderadas en T2 para detectar el tumor.
Adquiera un mapa b0 de todo el cerebro para calcular una cuña localizada utilizando la utilidad de corrección de compatibilidad de mapa. Utilice imágenes tridimensionales T2 ponderadas en estrella para visualizar las nanopartículas. Con los siguientes parámetros, adquiera un mapa estelar T2 para obtener más imágenes de nanopartículas utilizando la imagen bidimensional ponderada en T2 como referencia para posicionar la exploración sobre el tumor.
Adquiera 10 imágenes de eco positivas con cinco milisegundos de espaciado de tiempo de eco. En el punto final experimental, pesa el ratón y calcula el volumen de d-luciferina a administrar para una dosis de 150 miligramos por kilogramo. Realice imágenes de bioluminiscencia en vivo 10 minutos después de la inyección, como se describió anteriormente.
Coloque la placa de Petri con el cerebro extirpado del ratón sacrificado en el escáner IVIS. Obtener imágenes del cerebro con las modalidades de bioluminiscencia y fluorescencia utilizando los mismos ajustes de adquisición que las imágenes in vivo. Las señales de fluorescencia y bioluminiscencia Cy5.5 en ratones inyectados con anti-microRNA 10b con nanopartículas magnéticas mostraron una clara colocalización, lo que indica la entrega de las nanopartículas al tumor, mientras que los ratones de control no mostraron señal de fluorescencia.
Las imágenes de fluorescencia ex vivo mostraron la localización de las nanopartículas en los principales órganos de eliminación, como el hígado y los riñones. Una disminución característica en la señal de resonancia magnética ponderada en T2 demuestra el potencial de las nanopartículas magnéticas, anti-microARN 10b como agente de contraste de resonancia magnética para atravesar la barrera hematoencefálica y su acumulación en la región tumoral.
