Reconocemos Kevin Macleod para el uso creativo de su música con licencia commons en el video asociado, incluyendo (en orden de aparición) su &quot;sala del aeropuerto,&quot; pistas &quot;Fondo de pantalla&quot; y &quot;Melodrama tarde&quot;. También queremos agradecer a Ndubisi Okeke y Torstrick Federico por su ayuda en el video la cirugía.

1. RSS Spinotrapezius Ligadura Arteria Cirugía <ol><li> Se anestesia el ratón por inyección intraperitoneal. En una jeringa de 0,5 ml, formular: 0,06 ml de 100 mg / ml de ketamina 0,03 ml de 20,0 mg / ml de xilazina 0,01 ml de 0,4 mg / ml de atropina 0,30 ml de solución salina 0,9%. Dosis: 0,01 * ml por gramo de peso corporal, ip </li></ol> * Variable en dosis cepa de ratón y de valores, los ajustes necesarios para la recuperación del ratón está dentro de una hora de inducción. <ol start="2"><li> Aplique ungüento oftálmico estándar para evitar la desecación corneal. </li><li> Eliminar el pelo de la parte posterior usando las podadoras recorte, seguido de breve aplicación de la crema depilatoria. </li><li> Desinfectar el campo quirúrgico con clorhexidina o povidona yodada. Alternate povidona-yodo con etanol tres veces, terminando con povidona-yodo. </li><li> Transferir el ratón hacia la superficie de trabajo previamente preparado quirúrgica, con el cojín de calefacción y campo estérilen su lugar. </li><li> Crear una incisión lineal (3-5 mm) a través de la piel dorsal de aproximadamente 5 mm caudal a la prominencia ósea de la escápula con unas tijeras y pinzas iris patrón estándar (por ejemplo, FST, 11271-30) por tenting el tejido y corte paralelo a la columna vertebral. El sitio de la incisión de destino pueden ser identificadas por visualización transdérmica de la almohadilla de grasa dorsal si lo permite la pigmentación de la piel; cortado en el borde caudal de la almohadilla de grasa. Expandir la incisión, según sea necesario, y se extienden a través de capas de la piel secundarias utilizando tijeras resorte. <ol><li> Nota anatómica - El músculo spinotrapezius encuentra dorsalmente y se extiende desde T4 a L3 a lo largo de cada lado de la columna vertebral. El borde anterior se extiende lateralmente hasta aproximadamente el omóplato. El músculo se estrecha en la dirección caudal de modo que el borde más posterior se encuentra medial al borde anterior, y puede poner al ras con la columna vertebral. Dos almohadillas de grasa son también importante tener en cuenta, por el que se directamente dorsal y ventral de los spinotrapeziusmúsculo hacia la mitad del cráneo. </li><li> La inflamación debida a la incisión se ha demostrado no tener ningún efecto sobre la respuesta de la remodelación vascular, como la ligadura de cirugía simulada no mostraron ningún cambio en la remodelación de la vasculatura spinotrapezius. Dos factores espaciales contribuyen a este resultado. En primer lugar de la incisión se elimina por 5 mm en la dirección craneal de la región de interés en la que típicamente la respuesta vascular en el músculo examinado. Además, el sitio de la incisión en la piel dorsal se separa del sitio de ligadura de los vasos por una almohadilla ventral grasa que se encuentra en la parte superior de la tercera craneal del músculo spinotrapezius. </li></ol></li><li> Lavar la herida con solución de Ringer caliente para evitar la desecación del músculo. Aplicación de los vasodilatadores tales como la papaverina ayudará en la visualización de la arteria diana para la ligación. </li><li> Bajo un microscopio de disección, utilice pinzas para mitigar diseccionar y separar (pero no eliminar) el dorsal blanca almohadilla de grasa de la musc subyacenteular tejido con el fin de visualizar la vasculatura a medida que entra y sale de la spinotrapezius en su borde lateral. </li><li> Localizar la arteria objetivo, que junto con uno o dos pares de venas, pasa a través de la almohadilla de grasa que es ventral al spinotrapezius en su camino en el borde lateral del músculo. Esta arteria alimenta una parte sustancial de la mitad caudal del músculo, que se puede confirmar mediante la reflexión y reemplazando el músculo para observar el trayecto de la arteria dentro del músculo. La ubicación de destino para la ligadura es el segmento de la arteria que sale de la almohadilla de grasa ventral y entrar en el músculo, y es bastante accesible en esta región. El par arteria-vena puede necesitar ser suavemente separadas de la almohadilla de grasa ventral en esta región. Tenga en cuenta que la spinotrapezius es alimentado por múltiples pares de vena arteria, incluyendo los vasos que atraviesan tanto las almohadillas de grasa dorsal y ventral. Tenga cuidado de no alterar estos vasos. <ol><li> Indicadores múltiples pueden ser utilizados para distinguir la arteriade la vena. Uno de los mejores métodos es suavemente obstruir el flujo de sangre con la microsonda y moverse aguas arriba lejos del músculo; flujo no se reanudará en la arteria hasta que la obstrucción se libera. El color también se puede utilizar, como paredes de las venas contienen una vaina blanquecina de tejido conectivo que carecen de las arterias. Además, se puede considerar el diámetro antes de la aplicación de vasodilatador como venas son típicamente más grandes en tamaño. </li></ol></li><li> La arteria se encuentra típicamente en las proximidades de su vena emparejado, el uso de una disección roma con una microsonda y # 5 fórceps para aislar un segmento de aproximadamente 5 mm, haciendo pasar la microsonda detrás de la arteria, y con la punta para hacer un hueco más amplio en el natural hendidura entre la arteria y la vena. Este es el espacio a través del cual se realizará la sutura enhebrada. </li><li> Uso de 10-0 sutura de un solo hilo y aguja lugar titular de una ligadura alrededor de la arteria de alimentación (~ 70 m de diámetro) hacia el extremo proximal del segmento de disección usando un nudo de cirujano. Place una ligadura adicional hacia el extremo distal del segmento de arteria disecada, con una separación suficiente entre las ligaduras para permitir la sección de la arteria. <ol><li> La pequeña escala asociada a la arteria de alimentación spinotrapezius conduce a una mayor dificultad quirúrgica, en comparación con la ligadura de un vaso más grande tal como la arteria femoral. Cirujanos sin experiencia en particular que tienen altas tasas de avulsión, hemorragia accidental, y otras complicaciones quirúrgicas. De especial preocupación es la dificultad de identificar y cortando la arteria incoloro después de flujo ha sido impedida justo antes de cortar. Por estas razones, colocando ligaduras 2 se recomienda para quienes no están acostumbrados al procedimiento, ya que el cirujano tiene una guía visual en la localización donde para seccionar la arteria, así como una confirmación del corte con la separación fácilmente observable de los 2 ligaduras. Sin embargo, un cirujano más experimentado puede encontrar una ligadura sola suficiente, siempre y cuando sean capaces de claridadidentificar y cortar las arterias corriente abajo de la ligadura. Mientras que esta técnica reduce el riesgo de mellar involuntariamente un vaso cercano con la ligadura de sutura fuerte, no está exento de inconvenientes, incluyendo la dificultad mayor en la confirmación de la arteria se cortó transversalmente. </li></ol></li><li> Verificar la ligadura mediante la observación de la disminución de flujo de sangre (obstruida columna RBC) aguas abajo del sitio de la ligadura (es decir, hacia el músculo). </li><li> Utilizando unas tijeras de disección seccionar la arteria ligado, entre las dos ligaduras. Si sólo uno de ligadura se colocó (11a), se cortó con cuidado extremo en la dirección de aguas abajo. </li><li> Cargado con fármaco llanura de película (1 mm) se puede colocar aguas abajo (caudalmente) como parte del procedimiento experimental. </li><li> Cambiar la posición de la fascia y el tejido adiposo desplazada a su orientación original. </li><li> Cierre la incisión de la piel con 8-0 suturas no reabsorbibles. A continuación, coloque el ratón en una jaula de recuperación climatizada preparada bajo observación y administrar un apapropiados analgésico tal como bupivacaína, 0.02-0.05 ml 0,25% infiltración local. </li></ol> 2. Microscopía intravital Spinotrapezius, in situ <ol><li> Se anestesia el ratón en una cámara de inducción con isoflurano 3-4% vaporizado en 100% de oxígeno a una velocidad de flujo de 3-4 L · min -1. <ol><li> El uso de anestesia inhalante es preferible para las mediciones funcionales porque hay una menor depresión cardiovascular que con anestésicos inyectables. Si la anestesia inhalante en no disponibles, de acción prolongada anestésicos inyectables, tales como sodio pentobarbital se prefieren para evitar repetir las inyecciones una vez que el animal ha sido colocado. </li></ol></li><li> Una vez anestesiadas, continuamente entregar isoflurano a través de una mascarilla de anestesia (cono de nariz aka) en concentraciones de mantenimiento (generalmente ~ 2%) y la tasa de flujo de 0,5-1 L -1 · min. <ol><li> Ratones predominantemente ventilar a través de sus fosas nasales, por lo que es necsario para cubrir su nariz con el diafragma máscara de anestesia. </li></ol></li><li> Si es necesario, quitar el pelo de la parte posterior usando las podadoras recorte y la crema depilatoria. </li><li> Transportar el animal a la almohadilla de calor. <ol><li> Es importante mantener los ratones en un estado euthermic para evitar la vasoconstricción inducida por frío; esto se puede lograr a través de las lámparas, de circulación de agua almohadillas de calor, apto para microondas calienta almohadillas, etc </li></ol></li><li> Insertar la sonda de temperatura rectal y establecer termo-controlador a 35 ° C. </li><li> Hacer una incisión en la piel en el extremo caudal de los spinotrapezius utilizando tijeras iris y pinzas estándar del patrón. </li><li> Extienda la incisión cranealmente a la almohadilla de grasa, la creación de una incisión de herradura, y cubrir el colgajo de piel con una envoltura de plástico para evitar la desecación. </li><li> Blunt disecar el tejido conectivo subcutáneo con pinzas y tijeras de primavera para maximizar la visibilidad. </li><li> Coloque los electrodos estimulantes como toge cercather como sea posible, para minimizar el tamaño de la corriente de campo, y la posición en el extremo caudal del músculo expuesto justo lateral a la columna vertebral. </li><li> Lleve a cabo una estimulación de prueba para confirmar la colocación de electrodos utilizando un sistema de adquisición de datos electrodo, aislador de estímulo del electrodo, y el controlador de ordenador, con ondas cuadradas de 200 microsegundos de duración, 2 mA amplitud, entregada a 1 Hz. </li><li> Coloque una envoltura de plástico sobre el músculo expuesto para evitar la desecación. </li><li> Empezar a cronometrar un periodo de 30 minutos durante el cual diámetros de los vasos se equilibre. </li><li> Coloque el microscopio intravital sobre el músculo spinotrapezius para ver la arquitectura vascular. <ol><li> Si se utiliza un lente de inmersión, coloque una gota de PBS entre el objetivo y la envoltura de plástico. </li></ol></li><li> Comenzando por encima de la arteriola principal (el recipiente más grande visible), la etapa de manipular en el plano XY para localizar el vaso de interés. <ol><li> Visualización pequeña arterioles con microscopía de luz reflejada requiere mayor contraste que proporciona la columna de glóbulos rojos. Usamos principalmente una corriente lateral de campo oscuro microscopio de imagen para mejorar el contraste microvascular, pero el contraste también se puede mejorar con un microscopio de luz reflejada fluorescente después de la inyección intravenosa de un alto peso molecular fluorescente dextrano. </li></ol></li><li> Después de la equilibración 30-min, capturar una imagen / vídeo del vaso de interés. </li><li> Estimular el músculo con ondas cuadradas de 200 microsegundos duración, amplitud 2 mA, entregado en 8 Hz, durante 90 segundos, como se describe anteriormente. </li><li> Capturar otra estimulación imagen / vídeo inmediatamente después y continuar para capturar cada minuto hasta buque ha vuelto al diámetro de reposo, ~ 10 min. </li><li> Repetir los pasos 6-18 utilizando el músculo contralateral. </li><li> El análisis de datos se puede realizar en tiempo real con pinzas de vídeo o fuera de línea con el software de análisis de imagen. </li><li> Sacrificar al ratón seguirING IACUC protocolo. </li></ol> 3. Cosecha de tejidos Spinotrapezius y fijación <ol><li> Anestesiar los ratones por inyección intraperitoneal, la formulación como en la etapa de ligación Spinotrapezius RSS Arteria 1. </li><li> Hacer una incisión de varios milímetros craneales a la prominencia ósea del omóplato del ratón usando tijeras iris y pinzas estándar del patrón. Expandir la incisión lateralmente y luego caudalmente en ambos lados. </li><li> Suelte la piel dorsal del torso suavemente reflejando la piel y cortar la fascia superficial. </li><li> Use disección roma para eliminar el tejido adiposo dorsal usando fórceps estándar y, a continuación reflejan el músculo y de manera similar diseccionar tejido adiposo ventral. </li><li> Retire la placa que cubre el músculo utilizando pinzas y tijeras de primavera. Este paso puede ser difícil y consumir mucho tiempo, pero es importante para mejorar la tinción de inmunofluorescencia y de imagen. Manteniendo el tejido hidratado puede facilitar la extracción de la fascia. </li><li> Localizarel borde lateral del músculo, y el uso de una disección roma para separar el músculo spinotrapezius de la almohadilla de grasa que se encuentra ventral a la misma. </li><li> Continuar la disección roma en una dirección craneal a caudal. Tenga en cuenta que varios vasos sanguíneos entrar y salir de esta superficie ventral del músculo; perfusión si es necesario, se debe realizar antes de seccionar estos vasos. Tenga en cuenta también que en la mitad caudal del músculo, sus insertos borde lateral en el músculo acostado ventral a la misma. Algunos de corte puede ser requerido a lo largo de esta frontera para definir completamente y liberar el borde. </li><li> Impuestos Especiales del músculo spinotrapezius. Para hacer esto: <ol><li> Libre el borde lateral del músculo como se ha descrito anteriormente. </li><li> Cortar transversalmente a través de medida más craneal del músculo. </li><li> Corte a lo largo del borde medial (a lo largo de la columna vertebral), en el plano sagital. </li></ol></li><li> Repita los pasos del procedimiento de 4-9 sobre el músculo contralateral, y luego sacrificar al mouse por un método aprobado IACUC. </li><li> Fijar los tejidos sobre portaobjetos de vidrio recubiertos de gelatina por inmersión en metanol frío (4 ° C) o en un 4% de paraformaldehído / solución de agua desionizada a temperatura ambiente durante 20 min. <ol><li> Alternativamente, la fijación de la perfusión puede ser empleado. Antes del paso 2, realizar una toracotomía, hacer una incisión en la aurícula derecha, y la vasculatura perfundir con 5 ml de 1 × Tris-solución salina tamponada con 0,1 mM CaCl 2 y 2% de heparina a través del ventrículo izquierdo, seguido por 5 ml de 4 % de paraformaldehído para la fijación recipiente, y, finalmente, 5 ml de 1 × Tris-solución salina tamponada con 0,1 mM de CaCl 2 7. </li></ol></li><li> Inmediatamente posterior a la fijación, se lava la muestra cuatro veces durante 20 minutos cada uno. 0,01 M usando tampón fosfato salino (PBS) con 0,1% de saponina </li></ol>

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Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto financieros.

El modelo murino spinotrapezius ligadura aquí se presenta es un modelo efectivo de pequeños animales para estudiar las adaptaciones funcionales y estructurales que resultan de una oclusión arterial. Este modelo es complementario al modelo de isquemia ampliamente utilizado miembro posterior 4, en que proporciona una vista de músculo entero de redes microvasculares intactas con alta resolución espacial. Además, dado que este músculo se encuentra justo debajo de la piel dorsal, que es accesible para formación de imágenes en serie con microscopía intravital, y para administración local de fármacos a través de superfusión o implantación de película delgada 2. Estas características lo convierten en un modelo atractivo de pequeños animales para estudiar los efectos de las nuevas dianas terapéuticas en el remodelado vascular y vasodilatación funcional después de la oclusión arterial. Tenga en cuenta que se debe tener precaución cuando se comparan los datos obtenidos en el modelo de la ligadura spinotrapezius a los datos adquiridos en el modelo de la ligadura patas traseras debido a varios d claveL as diferencias. En primer lugar, los músculos spinotrapezius se están estabilizando los músculos, y se diferencian de los músculos de las piernas en términos de función y distribución del tipo de fibra. Nuestro grupo ha demostrado que la ligadura arteriolar en el músculo spinotrapezius crea hipoxia menor o insignificante en cepas con bien desarrolladas redes colaterales arteriolares, en comparación con la hipoxia observada en la pata trasera después de la ligadura de la arteria femoral en el modelo de extremidades traseras 1,8 - 10. También hemos demostrado que el modelo de ligadura spinotrapezius produce una respuesta diferente remodelación en ratones Balb / c en comparación con ratones C57BL / 6, con ratones Balb / c remodelación redes por colateralización capilar y remodelación C57bl / 6 por la ampliación de las actuales conexiones arteriolares 3. Hay un paralelo interesante entre estas observaciones y las realizadas en modelos de ligadura del miembro posterior, en el que ratones Balb / c experimentar una recuperación de la perfusión prolongada después de la ligadura en comparación con ratones C57BL / 6 9,11,12 &lt;/ Sup&gt;. En otros modelos de isquemia tisular, la edad del ratón género 13 14 y la presencia de la enfermedad 15 también afectar las respuestas de los tejidos a la oclusión arteriolar, aunque todavía no hemos probado estos predictores en el modelo de la ligadura spinotrapezius. En segundo lugar, el tamaño de la arteria que se ligó en el modelo spinotrapezius es sustancialmente menor que la arteria femoral, y por lo tanto, la ligadura impacta un volumen de tejido más pequeño que es más aguas abajo, es decir, a un nivel inferior del árbol circulatorio, en el spinotrapezius en comparación con la pata trasera 3. Por lo tanto, la diferencia anatómica en la ubicación de la ligadura en estos dos modelos se debe considerar cuando se comparan las respectivas respuestas fisiológicas (por ejemplo, la remodelación vascular) para esta intervención. En tercer lugar, la delgadez de las spinotrapezius puede permitir que el oxígeno alcance la porción unperfused del tejido de la vecinatejido, en comparación con la isquemia y la hipoxia combinada en el modelo de extremidades posteriores como se señaló anteriormente 3. En cuarto lugar, la recuperación del flujo a la porción de aguas abajo spinotrapezius de la ligadura es más rápido que en la ligadura de las extremidades traseras. El modelo de ligadura spinotrapezius es un modelo crónico único y no debe ser confundido con otros modelos de oclusión arterial transitoria o modelos de lesión por isquemia reperfusión. Consideramos que es posible la adaptación de este modelo para acomodar estos tipos de condiciones, pero esto está fuera del ámbito de aplicación de trabajo que se presenta en este documento. Por último, advertimos en contra de relación directa con las observaciones preclínicas en este modelo a las manifestaciones clínicas de la enfermedad isquémica en los seres humanos, especialmente cuando se utilizan joven y por lo demás ratones sanos y debido a las limitaciones inherentes fisiológicos como la frecuencia cardíaca superior 5. No obstante, consideramos que este nuevo modelo como una herramienta valiosa para el descubrimiento de los mecanismos básicos de las respuestas tisulares a la ligadura y la identificación del potencialpéuticas objetivos en un entorno en vivo. Además de las notas quirúrgicos proporcionados en el procedimiento de ligadura de la arteria de alimentación spinotrapezius (nota anatómica (6a), distinguiendo la arteria de la vena (9a), y el uso de una ligadura única (11a)), algunos otros aspectos de la prestación procedimiento desde discusión. En primer lugar, la incisión inicial realizada por la frontera almohadilla grasa dorsal (o varios mm caudal de la escápula, si la visualización transdérmico no es posible) está muy bien hecho tan pequeño como el cirujano se sienta cómodo, y se expandió durante el procedimiento si es necesario. Este método minimiza la sutura necesaria para cerrar la incisión, lo cual es conveniente para el cirujano, reduce el tiempo de procedimiento, y es también menos irritante para el animal durante la recuperación. Alternativamente, una incisión en la piel más grande puede ser apropiado de acuerdo con las preferencias del cirujano, ya que el músculo puede ser más fácil de localizar con un campo expandido. En este caso, la incisión puedebeneficiarse de una forma de herradura con una cara medial abierta para permitir el plegado hacia la columna. Al hacer la incisión en la piel y que se extiende a través de las capas de la piel secundarias, si un buque de superficie está dañado y causa hemorragia, aplicar una ligera presión con una gasa estéril y proporcionar tiempo para la hemostasia. También de la nota, es importante para manejar el tejido con un mínimo de fuerza, y siempre que sea posible mantener con fórceps más cerca de borde lateral del músculo y lejos de la zona isquémica previsto. Esta práctica ayuda a evitar la lesión por aplastamiento, que puede conducir a otras respuestas tisulares inflamatorias mediadas que pueden confundir la respuesta de remodelado vascular provocada por la ligadura arterial. En conclusión, hemos demostrado el uso de la spinotrapezius músculo murino como un modelo quirúrgico para examinar las respuestas vasculares y el tejido de la ligadura de las arteriolas. Este modelo es adecuado para la evaluación intravital de cambios vasculares (porejemplo, la vasodilatación funcional), y para la evaluación ex vivo de los cambios vasculares (por ejemplo, formación de imágenes de inmunofluorescencia y la cuantificación de las redes vasculares). Ambos estudios preclínicos y clínicos han demostrado que la respuesta de un individuo a la obstrucción arteriolar (por ejemplo, a través de la ligadura en los ratones o de placas ateroscleróticas en los seres humanos) depende de su edad la presencia o ausencia de la enfermedad (por ejemplo, diabetes mellitus) el diámetro de la arteria obstruida , la composición genética del individuo, y la demanda metabólica del tejido 11-15. Los modelos murinos, como la que se presenta aquí, aprovechar el investigador de las diferencias cepa específica anatómicos y genéticos y fenotipos específicos de la enfermedad, lo que facilita la investigación en estas complejas relaciones.

Los modelos animales de isquemia crónica son herramientas valiosas para la investigación de la fisiopatología de las enfermedades isquémicas, tales como enfermedad arterial periférica, enfermedad de la arteria coronaria y enfermedad cerebrovascular. En los roedores, como en los seres humanos, la oclusión arterial conduce a la remodelación estructural de la red vascular, incluyendo la arteriogénesis y la angiogénesis. En pacientes sanos y jóvenes, esta remodelación puede ser suficiente para rescatar el tejido de la isquemia inducida por la lesión, pero comorbilidades tales como la diabetes puede comprometer gravemente la remodelación y la recuperación. La comprensión de los mecanismos subyacentes a los eventos vasculares remodelación es esencial para el desarrollo de terapias que estimulan estos procesos endógenos de revascularización. Actualmente, la ligadura de la arteria femoral o la resección en la extremidad posterior es la técnica estándar para el estudio crónica inducida por isquemia remodelación vascular en animales pequeños 4,5. Análisis del diámetro, la conectividad y la reactividad de loslos microvasos que forman aguas abajo de la red vascular de la arteria femoral ligada es difícil, sin embargo, debido al grosor de los músculos. Hemos desarrollado un modelo de ligadura arteriolar en el músculo de ratón spinotrapezius: ligadura unilateral de la arteria de alimentación lateral en este músculo dorsal estabilizador 1. Los spinotrapezius relativamente delgadas (60-200 micras) es susceptible de inmunotinción en face para la evaluación de la topología de toda la red con una sola célula de resolución, lo que permite un examen detallado de los acontecimientos de remodelación vascular a través de todo el tejido. El spinotrapezius es también superficial y accesible, y por lo tanto sus buques son fácilmente observables por microscopía intravital, para la caracterización eficiente de los efectos de la remodelación y la ligadura arteriolar en la reactividad vascular. En este reporte se describe en detalle y demostrar el ratón spinotrapezius modelo ligadura arteriolar. Tanto in vivo y ex vivo methods de la cirugía de evaluación siguiente se describen, incluyendo la medición de la vasodilatación funcional, que se ha demostrado que se deteriora bajo condiciones isquémicas 6, y las imágenes de inmunofluorescencia de redes microvasculares de músculo entero. También incluimos los resultados de dos estudios piloto por separado para demostrar la utilidad del modelo. En primer lugar, se utilizó el modelo de ligadura arterial para inducir un aumento estadísticamente significativo en la tortuosidad buque en C57BL / 6 ratones (Figura 2B). Aumenta la tortuosidad durante arteriogénesis colaterales en las arteriolas. En otras cepas de ratón, que son más vulnerables a la isquemia debido a la ausencia de las arteriolas colaterales (por ejemplo, Balb / c), se observa arterialización capilar 10. Arterialización capilar se detecta por el aumento de los diámetros y el desarrollo de α-actina de músculo liso reactividad. En segundo lugar, la estimulación eléctrica funcional del músculo conduce a la vasodilatación en las arteriolas terminales de la spinotrapezinosotros (Figura 3B).

<table border="1"><tbody><tr><td> Nombre </td><td> Empresa </td><td> Número de Catálogo </td><td> Comentarios </td></tr><tr><td> Iris tijeras </td><td> FST </td><td> 14090-09 </td><td> Tipo: Tool </td></tr><tr><td> Tamaño 7 fórceps </td><td> FST </td><td> 11271-30 </td><td> Tipo: Tool </td></tr><tr><td> Tamaño 5 fórceps </td><td> FST </td><td> 11251-20 </td><td> Tipo: Tool </td></tr><tr><td> Tijeras de primavera </td><td> Roboz </td><td> RS5671 </td><td> Tipo: Tool </td></tr><tr><td> Microprobe </td><td> FST </td><td> 10140-03 </td><td> Tipo: Tool Puede estar sustituido con sonda recta </td></tr><tr><td> Soporte de la aguja </td><td> FST </td><td> 12500-12 </td><td> Tipo: Tool </td></tr><tr><td> Inducción cámara </td><td> JD Dist Médica. Co., Inc. </td><td> IC-1086 </td><td>Tipo: Equipamiento </td></tr><tr><td> Eye Gel </td><td> Dechra </td><td> NDC 17033-211-38 </td><td> Tipo: Reactivo </td></tr><tr><td> El calor pad </td><td> FST </td><td> 21060-01 </td><td> Tipo: Equipamiento </td></tr><tr><td> Sonda de temperatura rectal </td><td> FST </td><td> 21060-01 </td><td> Tipo: Equipamiento </td></tr><tr><td> Electrodos de estimulación </td><td> FHC </td><td> UEWSGCSE0N1M </td><td> Tipo: Equipamiento </td></tr><tr><td> Artesanos arcilla del polímero </td><td> Polyform </td><td> N / A </td><td> Tipo: Equipamiento </td></tr><tr><td> PowerLab sistema de adquisición de datos </td><td> ADInstruments </td><td> ML 845 </td><td> Tipo: Equipamiento </td></tr><tr><td> Estímulo aislador </td><td> ADInstruments </td><td> FE 180 </td><td> Tipo: Equipamiento </td></tr><tr><td> LabChart </td><td> ADInstruments </td><td> S060 ML / 7 </td><td> Tipo: Software </td></tr&gt; <tr><td> Luz reflejada microscopio de fluorescencia </td><td> Olimpo </td><td> BFXM </td><td> Tipo: Equipamiento </td></tr><tr><td> Alta MW dextrano fluorescente </td><td> Sigma </td><td> FD250S-100MG </td><td> Tipo: Reactivo </td></tr><tr><td> Pinzas Vídeo </td><td> Colorado Vídeo </td><td> 308 </td><td> Tipo: Equipamiento </td></tr><tr><td> Automatizado de Análisis vascular (AVA) </td><td> Microvision Medical </td><td></td><td> Tipo: Software </td></tr><tr><td> Lucha contra el αSMA fluoróforo conjugado </td><td> Sigma </td><td> 1A4-Cy3 </td><td> Tipo: Reactivo 1:100 clonal, </td></tr><tr><td> Microscopio de fluorescencia </td><td> Olimpo </td><td> BFXM </td><td> Tipo: Equipamiento </td></tr><tr><td> De alto peso molecular fluorescente dextrano </td><td> Sigma </td><td> FD250S-100MG </td><td> Tipo: Reactivo </td></tr></tbody></table>

murine spinotrapezius model to assess the impact of arteriolar ligation on microvascular function and remodeling

El spinotrapezius murino es un músculo delgado y superficial soporte del esqueleto que se extiende desde T3 a L4, y es fácilmente accesible a través de incisión en la piel dorsal. Su anatomía única hace que los spinotrapezius útil para la investigación de la lesión isquémica microvascular y la remodelación posterior. Este sentido, demostrar un modelo de la ligadura de las arteriolas en el músculo murino spinotrapezius que fue desarrollado por nuestro equipo de investigación y publicado previamente 1-3. Para ciertas cepas de ratón vulnerables, tales como el ratón Balb / c, esta cirugía de ligadura crea de forma fiable la isquemia del músculo esquelético y sirve como plataforma para la investigación de terapias que estimulan la revascularización. Métodos de evaluación también se ha demostrado, incluyendo el uso de la microscopía intravital y confocal. El spinotrapezius se adapta bien a los estudios de imagen tales debido a su accesibilidad (anatomía dorsal superficial) y delgadez relativa (60-200 micras). El músculo spinotrapezius se puede montar en face, facilitandoformación de imágenes de músculo entero redes microvasculares sin seccionar histológico. Se describe el uso de la microscopía intravital para adquirir siguientes mediciones un procedimiento vasodilatación funcional; específicamente, el aumento en el diámetro arterilar como resultado de la contracción muscular. También demuestran los procedimientos para la recolección y la fijación de los tejidos, un precursor necesario para la inmunotinción estudios y el uso de la microscopía confocal.

Una vista quirúrgica de la arteria principal que alimenta el músculo spinotrapezius que sufre de ligación se muestra en la Figura 1, con etiquetas que indiquen las áreas de interés. Una imagen confocal ejemplo de la región recogieron y se inmunotiñeron de músculo situado directamente aguas abajo de la arteria se ligó una semana después de la ligadura se muestra en la Figura 2A. Agrandamiento de las arteriolas colaterales que contienen músculo liso alfa-actina de músculo liso de las células que expresan (rojo) muestran tortuosidad característica después de la ligadura. Tortuosidad buque, informa como la proporción entre la longitud del recipiente de ruta y la distancia de cable (es decir, la línea que se extiende a través de los extremos de los vasos mismo camino), en el músculo ligado (derecha) se ha mejorado con respecto a músculo contralateral no ligado (Figura 2B, n = 8) . Figura 3 muestra los resultados de un estudio piloto en el que se midió la terminal de vasodilatación arteriolar funcional mediante microscopía intravital. Como era de esperar, arteriolar di<html> ámetro aumenta significativamente después de la contracción muscular eléctrica estimulación inducida. <img src="/files/ftp_upload/50218/50218fig1.jpg" alt="Figura 1" fo:content-width="4in" fo:src="/files/ftp_upload/50218/50218fig1highres.jpg"/> Figura 1. Campo quirúrgico de músculo refleja spinotrapezius y la arteria de alimentación. La arteria de alimentación se ligó en los dos lugares indicados por A0. Entre estas ligaduras y después de la obstrucción de flujo de sangre, la arteria se secciona en el sitio indicado por A. El segmento objetivo de las transiciones de la arteria ventral de la almohadilla de grasa, se indica por C, en el músculo spinotrapezius, esbozado por D, en el lugar indicado con la flecha de dirección de flujo B. se indica con trazos flecha E. ghres.jpg &quot;/&gt; Figura 2. Imagen confocal de red spinotrapezius microvascular del músculo para estudio piloto de tortuosidad. (A) recogidos y músculo entero montado se inmunotiñó para músculo liso alfa-actina y formado la imagen mediante microscopía confocal. El campo de visión se muestra la región del músculo que se encuentra directamente ligado aguas abajo de la arteriola 1 semana después de la ligadura. Vasos tortuosos son evidentes en el músculo como resultado de la unión (B) los resultados del estudio piloto muestran significativamente mayor (p = 0,035; 1 Estudiante de cola de la t-test). Tortuosidad exhibido por microvasos en el músculo ligado medida por la eslora del barco camino a relación de la distancia para un cable de prueba de ratones C57BL / 6 (n = 8) en comparación con el control contralateral. <img src="/files/ftp_upload/50218/50218fig3.jpg" alt="Figura 3" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50218/50218fig3highres.jpg"/> Figure 3. Imagen de microscopía intravital de la vasodilatación funcional en las arteriolas spinotrapezius, in vivo. (A) microfotografías representativas de las arteriolas terminales spinotrapezius en reposo (izquierda) e inmediatamente después del cese de la contracción muscular 8 Hz (derecha). (B) Terminal diámetro arteriolar en reposo ( 8,5 ± 0,5 m, a la izquierda) e inmediatamente después (11 ± 1 m, centro) 90 seg de la contracción muscular, lo que aumenta significativamente diámetro arteriolar (p = 0,032; 1-cola prueba t pareada) en ratones Balb / C (n = 6). Variación porcentual indicado (derecha).

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Murine Spinotrapezius Model to Assess the Impact of Arteriolar Ligation on Microvascular Function and Remodeling

Demostramos un nuevo modelo ligadura arterial en el músculo spinotrapezius murino, incluyendo un procedimiento paso a paso y la descripción de la instrumentación requerida. Se describe la cirugía y las medidas de resultado relevantes relacionados con la remodelación de la red vascular y vasodilatación funcional utilizando microscopía intravital y confocal.

Modelo murino Spinotrapezius para evaluar el impacto de la ligadura arteriolar en la función microvascular y Remodelación

The murine spinotrapezius is a thin, superficial skeletal support muscle that extends from T3 to L4, and is easily accessible via dorsal skin incision. ...

murine-spinotrapezius-model-to-assess-impact-arteriolar-ligation-on

Research

JoVE Journal

Medicine

12.0K vistas.  University of Virginia. Demostramos un nuevo modelo ligadura arterial en el músculo spinotrapezius murino, incluyendo un procedimiento paso a paso y la descripción de la instrumentación requerida. Se describe la cirugía y las medidas de resultado relevantes relacionados con la remodelación de la red vascular y vasodilatación funcional utilizando microscopía intravital y confocal.

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Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo. With the advent of genetic modifications to the whole organism or the myocardium and an array of biological and/or synthetic materials, there is great potential for any combination of these to assuage the extent of acute ischemic injury and impede the onset of heart failure pursuant to myocardial remodeling. 
Here we present the methods and materials used to reliably perform this microsurgery and the modifications involved for temporary (with reperfusion) or permanent coronary artery occlusion studies as well as intramyocardial injections. The effects on the heart that can be seen during the procedure and at the termination of the experiment in addition to histological evaluation will verify efficacy. 
Briefly, surgical preparation involves anesthetizing the mice, removing the fur on the chest, and then disinfecting the surgical area. Intratracheal intubation is achieved by transesophageal illumination using a fiber optic light. The tubing is then connected to a ventilator. An incision made on the chest exposes the pectoral muscles which will be cut to view the ribs. For ischemia/reperfusion studies, a 1 cm piece of PE tubing placed over the heart is used to tie the ligature to so that occlusion/reperfusion can be customized. For intramyocardial injections, a Hamilton syringe with sterile 30gauge beveled needle is used. When the myocardial manipulations are complete, the rib cage, the pectoral muscles, and the skin are closed sequentially. Line block analgesia is effected by 0.25% marcaine in sterile saline which is applied to muscle layer prior to closure of the skin. The mice are given a subcutaneous injection of saline and placed in a warming chamber until they are sternally recumbent. They are then returned to the vivarium and housed under standard conditions until the time of tissue collection. At the time of sacrifice, the mice are anesthetized, the heart is arrested in diastole with KCl or BDM, rinsed with saline, and immersed in fixative. Subsequently, routine procedures for processing, embedding, sectioning, and histological staining are performed. 
Nonsurgical intubation of a mouse and the microsurgical manipulations described make this a technically challenging model to learn and achieve reproducibility. These procedures, combined with the difficulty in performing consistent manipulations of the ligature for timed occlusion(s) and reperfusion or intramyocardial injections, can also affect the survival rate so optimization and consistency are critical.

Numerous genetic manipulations and/or intramyocardial injections of genes, proteins, cells, and/or biomaterials are superimposed upon the dimension of time in studies of acute ischemia/ reperfusion injury and chronic remodeling in mice. This video illustrates the microsurgical procedures for ischemia/reperfusion, permanent coronary artery ligation, and intramyocardial injection studies.

Ligadura de las arterias coronarias y la inyección intramiocárdica en un modelo murino de infarto

Mouse models are a valuable tool for studying acute injury and chronic remodeling of the myocardium in vivo.  With the advent of genetic modifications to ...

Investigación

Medicina

Non-invasive Assessment of Microvascular and Endothelial Function

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of cardiovascular disease. Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. Percent capillary recruitment is assessed by dividing the increase in capillary density induced by postocclusive reactive hyperemia (postocclusive reactive hyperemia capillary density minus baseline capillary density), by the maximal capillary density (observed during passive venous occlusion). Percent perfused capillaries represents the proportion of all capillaries present that are perfused (functionally active), and is calculated by dividing postocclusive reactive hyperemia capillary density by the maximal capillary density. Both percent capillary recruitment and percent perfused capillaries reflect the number of functional capillaries. The forearm blood flow (FBF) technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function: The ratio FBFmax/FBFbase is computed as an estimate of vasodilation, by dividing the mean of the four FBFmax values by the mean of the four FBFbase values. Forearm vascular resistance at maximal vasodilation (FVRmax) is calculated as the mean arterial pressure (MAP) divided by FBFmax. Both the capillaroscopy and forearm techniques are readily acceptable to patients and can be learned quickly.
The microvascular and endothelial function measures obtained using the methodologies described in this paper may have future utility in clinical patient cardiovascular risk-reduction strategies. As we have published reports demonstrating that microvascular and endothelial dysfunction are found in initial stages of hypertension including prehypertension, microvascular and endothelial function measures may eventually aid in early identification, risk-stratification and prevention of end-stage vascular pathology, with its potentially fatal consequences.

Capillaroscopy is a non-invasive, relatively inexpensive methodology for directly visualizing the microcirculation. The forearm blood flow technique provides accepted non-invasive measures of endothelial function.

La evaluación no invasiva de la función endotelial microvascular y

The authors have utilized capillaroscopy and forearm blood flow techniques to investigate the role of microvascular dysfunction in pathogenesis of ...

A Murine Model of Myocardial Ischemia-reperfusion Injury through Ligation of the Left Anterior Descending Artery

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms at work during MI and developing effective therapeutic approaches requires methodology to reproducibly simulate the clinical incidence and reflect the pathophysiological changes associated with MI. Here, we describe a surgical method to induce MI in mouse models that can be used for short-term ischemia-reperfusion (I/R) injury as well as permanent ligation. The major advantage of this method is to facilitate location of the left anterior descending artery (LAD) to allow for accurate ligation of this artery to induce ischemia in the left ventricle of the mouse heart. Accurate positioning of the ligature on the LAD increases reproducibility of infarct size and thus produces more reliable results. Greater precision in placement of the ligature will improve the standard surgical approaches to simulate MI in mice, thus reducing the number of experimental animals necessary for statistically relevant studies and improving our understanding of the mechanisms producing cardiac dysfunction following MI. This mouse model of MI is also useful for the preclinical testing of treatments targeting myocardial damage following MI.

We introduce a surgical method to induce experimental ischemia/reperfusion (I/R) injury to simulate myocardial infarction (MI) in mouse models that allows for more clarity in positioning of the ligation on the left anterior descending artery (LAD) to increase the reproducibility of MI experiments in mice.

Un modelo murino de isquemia-reperfusión miocárdica lesión a través de la ligadura de la arteria descendente anterior

Acute or chronic myocardial infarction (MI) are cardiovascular events resulting in high morbidity and mortality. Establishing the pathological mechanisms ...

A Rat Carotid Balloon Injury Model to Test Anti-vascular Remodeling Therapeutics

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is also a valuable model system to test, and to evaluate therapeutics and drugs that negate maladaptive remodeling in the vessel. The injury, or barotrauma, in the vessel lumen caused by an inflated balloon via an inserted catheter induces subsequent neointimal growth, often leading to hyperplasia or thickening of the vessel wall that narrows, or obstructs the lumen. The method described here is sufficiently sensitive, and the results can be obtained in relatively short time (2 weeks after the surgery). The efficacy of the drug or therapeutic against the induced-remodeling can be evaluated either by the post-mortem pathological and histomorphological analysis, or by ultrasound sonography in live animals. In addition, this model system has also been used to determine the therapeutic window or the time course of the administered drug. These studies can leadto the development of a better administrative strategy and a better therapeutic outcome. The procedure described here provides a tool for translational studies that bring drug and therapeutic candidates from bench research to clinical applications.

The rat carotid balloon injury model described below allows researchers to evaluate drugs or therapeutics that negate injury-induced arterial hyperplasia. Detailed pre-surgical preparation, surgical procedure, and post-surgical cares of the animal are described.

Una rata carótida lesión con el balón modelo para probar Terapéutica Remodelación Anti-vasculares

The rat carotid balloon injury is a well-established surgical model that has been used to study arterial remodeling and vascular cell proliferation. It is ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by reduced blood supply to the heart, resulting in the loss of oxygen to and the ensuing necrosis of the heart muscle. The MI model has gained popularity for its use as a short-term ischemia-reperfusion model and a long-term permanent ligation model. Below, we describe a reliable method for the permanent ligation of the LAD. With mouse genetic engineering technology becoming more advanced, and with an increasing availability of quality murine surgical instruments, the mouse has become a popular model for MI surgeries. Our surgical model incorporates the use of an easily reversible anesthetic for the rapid recovery of the mouse; a minimally invasive endotracheal intubation without involving a tracheotomy; and a thoracentesis through the original thoracotomy site without creating an additional incision in the chest, as is done in some other methods, to effectively remove excess blood and air from the chest cavity. This method is comparatively less invasive than other methods, which dramatically reduces surgical and post-surgical complications and mortality and improves reproducibility.

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

We provide a reliable method for left anterior descending artery (LAD) ligation in a mouse model. This method is comparatively less invasive than other methods, involving endotracheal intubation, a left-sided thoracotomy approach, and thoracentesis. This method can be used as a model for both acute and chronic myocardial infarction (MI).

Murino descendente anterior (LAD) ligadura de la arteria coronaria: un modelo mejorado y simplificado para el infarto de miocardio

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...

Assessment of Human Adipose Tissue Microvascular Function Using Videomicroscopy

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. It is hypothesized that pro-atherogenic mediators released from fat tissues particularly in association with central/visceral adiposity may promote pathogenic vascular changes locally and systemically, and the notion that cardiovascular disease may be the consequence of adipose tissue dysfunction continues to evolve. Here, we describe a unique method of videomicroscopy that involves analysis of vasodilator and vasoconstrictor responses of intact small human arterioles removed from the adipose depot of living human subjects. Videomicroscopy is used to examine functional properties of isolated microvessels in response to pharmacological or physiological stimuli using a pressured system that mimics in vivo conditions. The technique is a useful approach to gain understanding of the pathophysiology and molecular mechanisms that contribute to vascular dysfunction locally within the adipose tissue milieu. Moreover, abnormalities in the adipose tissue microvasculature have also been linked with systemic diseases. We applied this technique to examine depot-specific vascular responses in obese subjects. We assessed endothelium-dependent vasodilation to both increased flow and acetylcholine in adipose arterioles (50 - 350 &#181;m internal diameter, 2 - 3 mm in length) isolated from two different adipose depots during bariatric surgery from the same individual. We demonstrated that arterioles from visceral fat exhibit impaired endothelium-dependent vasodilation compared to vessels isolated from the subcutaneous depot. The findings suggest that the visceral microenvironment is associated with vascular endothelial dysfunction which may be relevant to clinical observation linking increased visceral adiposity to systemic disease mechanisms. The videomicroscopy technique can be used to examine vascular phenotypes from different fat depots as well as compare findings across individuals with different degrees of obesity and metabolic dysfunction. The method can also be used to examine vascular responses longitudinally in response to clinical interventions.

Videomicroscopy systems are used to examine functional properties of isolated adipose tissue arterioles in response to physiological and pharmacological stimuli. This technique can be used to examine microvascular phenotypes in different adipose tissue domains in obese humans.

Evaluación de la función Microvascular del tejido adiposo humano mediante videomicroscopía

While obesity is closely linked to the development of metabolic and cardiovascular disease, little is known about mechanisms that govern these processes. ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Medición de la contractilidad isométrica de la arteria mesentérica de ratón con cable miografía

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Murine Myocardial Infarction Model using Permanent Ligation of Left Anterior Descending Coronary Artery

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine models of MI with permanent ligation of left-anterior descending (LAD) coronary artery closely mimics MI in humans. Murine models benefit from the extensive genetic engineering available nowadays. Here we propose a reproducible murine surgical model of myocardial infarction by permanent LAD coronary ligation. Our technique comprises anesthesia with ketamine/xylazine that can be rapidly reversed by administration of an antagonist, intubation without tracheotomy for mechanical-assisted ventilation, ventilation with application of extrinsic positive end-expiratory pressure (PEEP) to avoid alveolar collapse, a thoracotomy method limiting to the minimum surgical lesions made to skeletal muscles, and lung inflation without thoracentesis. This method is sparsely invasive, reproducible and reduces post-surgery mortality and complications.

Herein we describe a surgical procedure showing how to achieve permanent ligation of the left-anterior descending coronary artery in mice. This model is of high relevance to investigate the pathophysiology of myocardial infarction and the concomitant biological processes.

Modelo de infarto de miocardio murino usando ligadura permanente de la arteria coronaria descendente anterior izquierda

Myocardial infarction (MI) and acute coronary diseases are among the most prominent causes of death in population with western lifestyle. The murine ...

A Non-Invasive Method for Generating the Cyclic Loading-Induced Intra-Articular Cartilage Lesion Model of the Rat Knee

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely correlated with a history of articular cartilage damage and ligament avulsion. Surgical animal models of OA of the knee play an important role in understanding the onset and progression of post-traumatic OA and aid in the development of novel therapies for this disease. However, non-surgical models have been recently considered to avoid traumatic inflammation that could affect the evaluation of the intervention. 
In this study, an intra-articular cartilage lesion rat model induced by in vivo cyclic compressive loading was developed, which allowed researchers to (1) determine the optimal magnitude, speed, and duration of load that could cause focal cartilage damage; (2) assess post-traumatic spatiotemporal pathological changes in chondrocyte vitality; and (3) evaluate the histological expression of destructive or protective molecules that are involved in the adaptation and repair mechanisms against joint compressive loads. This report describes the experimental protocol for this novel cartilage lesion in a rat model.

Here, we present the cyclic loading-induced intra-articular cartilage lesion model of the rat knee, generated by 60 cyclic compressions over 20 N, resulting in damage to the femoral condylar cartilage in rats.

Un método no invasivo para generar el modelo de lesión de cartílago intraarticular inducida por carga cíclica de la rodilla de rata

The pathophysiology of primary osteoarthritis (OA) remains unclear. However, a specific subclassification of OA in relatively younger age groups is likely ...

Left Coronary Artery Ligation: A Surgical Murine Model of Myocardial Infarction

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In order to explore the pathophysiological changes after myocardial infarction and design future treatments, research models of MI are required. Permanent ligation of the left coronary artery (LCA) in mice is a popular model to investigate cardiac function and ventricular remodeling post MI. Here we describe a less invasive, reliable, and reproducible surgical murine MI model by permanent ligation of the LCA. Our surgical model comprises of an easily reversible general anesthesia, endotracheal intubation that does not require a tracheotomy, and a thoracotomy. Electrocardiography and troponin measurement should be performed to ensure MI. Echocardiography at day 28 after MI will discern heart function and heart failure parameters. The degree of cardiac fibrosis can be evaluated by Masson's trichrome staining and cardiac MRI. This MI model is useful for studying the pathophysiological and immunological alterations after MI.

Presented here is a surgical procedure for permanent ligation of the left coronary artery in mice. This model can be used to investigate the pathophysiology and associated inflammatory response after myocardial infarction.

Ligadura de la arteria coronaria izquierda: un modelo murino quirúrgico de infarto de miocardio

Ischemic heart disease and subsequent myocardial infarction (MI) is one of the leading causes of mortality in the United States and around the world. In ...