Name: enzymatic cascade reactions for the synthesis of chiral amino alcohols from l-lysine
Uploaded: 2018-02-16T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 14 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Enzymatic Cascade Reactions for the Synthesis of Chiral Amino Alcohols from L-lysine at JoVE.com

Los autores agradecen Véronique de Berardinis de debate fructífero y Alain Perret, Christine Pellé y Peggy Sirvain para soporte técnico.

1. preparación de enzimas
<ol><li>Expresar y purificar las proteínas como se describió anteriormente26. Nota: Proteínas recombinantes se obtuvieron con las siguientes concentraciones finales: αKAO de Catenulispora acidiphila, UniProtKB ID: C7QJ42 (KDO1), 1,35 mg/mL; ΑKAO de C. pinensis, UniProtKB ID: C7PLM6 (KDO2) 2,29 mg/mL; PLP-DCs de S. rumirantium, UniProtKB ID: O50657 (LDCSrum), extracto de célula libre con enzima total 12,44 mg/ml; PLP-DC de C. pinensis, UniProtKB ID: C7PLM7 (CCCpin), 2,62 mg/mL.</li>
</ol>2. preparación de soluciones
Nota: Todas las soluciones que a continuación se preparan en agua desionizada.
<ol><li>Preparar 1 M de tampón HEPES, pH 7,5; ajuste con 5 M de NaOH. Nota: Durante la etapa de ajuste de pH, use guantes protectores, ropa protectora, protección para los ojos y cara protección (P280). En caso de contacto con los ojos (P305, P351, P338), enjuague cuidadosamente con agua durante varios minutos quitar lentes de contacto si es posible. Continúe enjuagando y llame de inmediato a un centro de envenenamiento o al médico (P310). El código P se refiere a la intervención cautelar (peligro clase y categoría; véase, por ejemplo, pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/ghs/).</li>
	<li>Preparar 100 mM de L-lisina, 100 (5S) - hidroxi - L-lisina, 150 mM α-ketoglutaric ácido, ascorbato de sodio 100 mM, 10 mM amonio hierro (II) sulfato hexahidrato (sal de Mohr), piridoxal 5-fosfato (PLP) de 100 mM y 100 mM Ditiotreitol (DTT).</li>
	<li>Preparar 1 M, 2M y 6M de ácido clorhídrico (HCl) de una solución de HCl 37% (aproximadamente 12 M solución), siguiendo las mismas instrucciones de seguridad descritas en el punto 2.1. Nota: Las soluciones de ácido α-ketoglutaric, ascorbato de sodio y amonio hierro (II) sulfato hexahidrato se realizará recién en el día de uso. La solución de lisina puede almacenarse durante varios meses a temperatura ambiente. La solución PLP puede guardarse durante un mes a 4 ° C. La solución DTT puede guardarse durante un mes a-20 ° C.</li>
</ol>3. balanza analítica reacciones
<ol><li>Desarrollo de métodos para la reacción de descarboxilación de (5R) - hidroxi - L-lisina<ol>
<li>Añadir 11 μl de 1 M solución de HEPES buffer pH 7,5 (concentración final 50 m m) a un microtubo 2 mL. Luego agregue 22 μL de 100 mM (5S) - hidroxi - L-lisina (concentración final 10 mM), 2,2 μl 100 mm PLP (concentración final 1 mM) y 2,2 μl de 100 mM DTT (concentración final 1 mM). Nota: En el caso de la reacción con LDCSrum, la incorporación de la TDT no es necesaria.</li>
		<li>Añadir el PLP-DC purificado (concentración final 0,1 mg/mL). Completo con H2O para un volumen final de 220 μl.</li>
		<li>Agite la mezcla de reacción a temperatura ambiente, con una tapa abierta al aire libre, en 300 rpm durante 3 horas. Nota: Agitación de la mezcla de reacción con una tapa abierta aire libre garantiza una buena oxigenación de los medios de reacción. Por lo tanto no es necesario a la burbuja de oxígeno en el medio de reacción.</li>
		<li>Recoger 10 μl de la mezcla de reacción para ser analizados según el procedimiento de control de la reacción se describe en el paso 6. Las muestras son preferentemente derivatizadas y analizadas directamente después del muestreo.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Desarrollo de métodos para la reacción de la cascada enzimática combina un paso de hidroxilación catalizado por αKAO con descarboxilación catalizada por PLP-DC<ol>
<li>Añadir 11 μl de 1 M de pH de buffer HEPES 7.5 (concentración final 50 m m) a un microtubo 2 mL. Luego, añade 22 μL de 150 mM de α-ketoglutaric ácido (concentración final 15 mM), 5.5 μl de 100 mM de ascorbato de sodio (concentración final 2,5 mM), 22 μL de 10 mM de Mohr de sal (concentración final 1 mM) y 22 μL de 100 mM de L-lisina (concentración final 10 mM).</li>
		<li>Completo con H2O para un volumen final de 220 μl, tomando en cuenta el volumen de la solución de enzima a ser agregado en el paso 3.2.3.</li>
		<li>Agregue la enzima αKAO purificada requerido según la regioselectividad específica: KDO1 para la hidroxilación en posición C-3 o KDO2 posición C-4 de L-lisina. La concentración final de la enzima purificada (0.05-0.5 mg/mL) fue determinado permitir una conversión completa en aproximadamente 3 h.</li>
		<li>Agite la mezcla de reacción a temperatura ambiente, con una tapa abierta al aire libre, en 300 rpm durante 3 horas.</li>
		<li>Añadir 2,2 μl de 100 mM de PLP (concentración final ~ 1 mM) y 2,2 μl de 100 mM de DTT (concentración final ~ 1 mM). Nota: En el caso de la reacción con LDCSrum, la incorporación de la TDT no es necesaria.</li>
		<li>Añadir el PLP-DC purificado en una concentración que permite la conversión completa en 18 h: LDCSrum en una concentración final aproximada de 0,1 mg/mL para la reacción en cascada con KDO1 y DCCpin en una concentración final aproximada de 0,5 mg/mL para la reacción en cascada con KDO2.</li>
		<li>Agite la mezcla de reacción a temperatura ambiente, con una tapa abierta al aire libre a 300 rpm durante 18 h.</li>
		<li>Ejecutar un procedimiento de control como en el paso 3.1.4.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Desarrollo de métodos para la reacción de cascada enzimática que combina dos pasos de hidroxilación catalizadas por αKAOs con descarboxilación catalizada por PLP-DC<ol>
<li>Ejecutar pasos 3.2.1-3.2.2.</li>
		<li>Añadir a KDO1 a una concentración final de 0.05 mg/mL. Agite la mezcla de reacción a temperatura ambiente, con una tapa abierta al aire libre, en 300 rpm durante 3 horas.</li>
		<li>Añadir KDO2 en una concentración final aproximada de 0,5 mg/mL, calculada el volumen inicial de reacción. Agite la mezcla de reacción a temperatura ambiente, con una tapa abierta al aire libre, a 300 rpm durante 18 h.</li>
		<li>Ejecute paso 3.2.5.</li>
		<li>Añadir el PLP-DC DC purificadoCpin en una concentración final aproximada de 0,5 mg/mL, calculada el volumen inicial de reacción. Agite la mezcla de reacción a temperatura ambiente, con una tapa abierta al aire libre, a 300 rpm durante 18 h.</li>
		<li>Ejecute el procedimiento de control como en el paso 3.1.4.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. semi-preparativa reacción biocatalítica de One-pot
Nota: Las reacciones enzimáticas se llevan a cabo en 0.1 mmol de L-lisina en un matraz Erlenmeyer un volumen total de 10 mL de vidrio 250 mL al aire libre.
<ol><li>Síntesis de los derivados de monohydroxylated<ol>
<li>Agregar 0,5 mL de tampón HEPES de 1 M pH 7,5 (concentración final 50 mM) en el matraz. Luego, añadir 1 mL de 100 mM de L-lisina (concentración final 10 mM), 1 mL de 150 mM α-ketoglutaric ácido (concentración final 15 mM), 0.25 mL de ascorbato de sodio 100 mM (concentración final de 2,5 mM), y 1 mL de 10 mM Mohr sal (concentración final 1 mM).</li>
		<li>Completo con H2O para un volumen final de 10 mL, teniendo en cuenta el volumen de la solución de enzima a ser agregado en el paso 4.1.3.</li>
		<li>Agregue la enzima αKAO purificada requerido según la regioselectividad objetivo: KDO1 a una concentración final de 0,075 mg/mL para la hidroxilación en posición C-3 o KDO2 a una concentración final de 0,5 mg/mL para la posición C-4 de L-lisina. La concentración final de la enzima purificada fue determinada para permitir una conversión completa en aproximadamente 3 h.</li>
		<li>Agite la mezcla de reacción a temperatura ambiente a 300 rpm para la duración apropiada. Cuando la supervisión de reacción indica una reacción de hidroxilación terminado (ejecute todos los pasos detallados en el paso 6 para la reacción control protocolo), proceda al paso 4.1.5. Un tiempo de reacción típico es 3 h.</li>
		<li>Añada 100 μl de 100 mM PLP a la mezcla de reacción αKAO (concentración final ~ 1 mM). Luego, añada 100 μl del 100 mM DTT (concentración final ~ 1 mM), excepto cuando se utiliza LDCSrum.</li>
		<li>Añadir purificada PLP-DC: LDCSrum en una concentración final aproximada de 0,05 mg/mL para la reacción en cascada con KDO1 o DCCpin en una concentración final aproximada de 0,5 mg/mL para la reacción en cascada con KDO2.</li>
		<li>Agite la mezcla de reacción a temperatura ambiente, 300 rpm, durante 18 h y continuar directamente a los pasos detallados en el paso 4.3.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Síntesis del derivado dihydroxylated<ol>
<li>Agregar 0,5 mL de tampón HEPES de 1 M pH 7,5 (concentración final 50 mM), 1 mL de 100 mM de L-lisina (concentración final 10 mM), 1 mL de 150 mM α-ketoglutaric ácido (concentración final 15 mM), 0.25 mL de ascorbato de sodio 100 mM (concentración final 2, 5 mM) , y 1 mL de 10 mM Mohr sal (concentración final 1 mM). Completo con H2O para un volumen final de 10 mL, teniendo en cuenta el volumen de la solución de enzima a ser agregado en el paso 4.2.2.</li>
		<li>Añadir a KDO1 a una concentración final de 0,075 mg/mL. Agite la mezcla de reacción a temperatura ambiente, 300 rpm durante el tiempo apropiado.</li>
		<li>Cuando la supervisión de reacción indica una reacción de hidroxilación completa (vea el paso 6 para la reacción control protocolo), proceda al paso 4.2.5. Un tiempo de reacción típico es 3 h.</li>
		<li>Añadir 1 mL de 150 mM α-ketoglutaric ácido (concentración final 15 mM), 0.25 mL de ascorbato de sodio 100 mM (concentración final de 2,5 mM), y 1 mL de 10 mM Mohr sal (concentración final 1 mM).</li>
		<li>Añadir KDO2 a una concentración final aproximada de 0,5 mg/mL, calculada el volumen inicial de reacción. Agite la mezcla de reacción a temperatura ambiente a 300 rpm durante 18 h.</li>
		<li>Cuando la supervisión de reacción indica una reacción de hidroxilación completa (vea el paso 6 para la reacción control protocolo), proceda al paso 4.2.7. Un tiempo de reacción típico es 18 h.</li>
		<li>Añada 100 μl de 100 mM de DTT (concentración final ~ 1 mM), excepto cuando se utiliza el LDCSrum.</li>
		<li>Añadir el purificado DCCpin en una concentración final aproximada de 0,5 mg/mL, calculada el volumen inicial de reacción.</li>
		<li>Agite la mezcla de reacción a temperatura ambiente a 300 rpm durante 18 h.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Amortiguamiento de<ol>
<li>Enfríe la mezcla de reacción colocando el vaso de 250 mL matraz Erlenmeyer en un baño de hielo.</li>
		<li>Añadir cuidadosamente, durante aproximadamente 1 minuto, 0.25 mL de 6 M de HCl agitando manualmente con cuidado la mezcla de reacción refrigerada. Siga las mismas instrucciones de seguridad descritas en el paso 2.1.</li>
		<li>Transferencia de la mezcla ácida en una centrífuga de fondo cónico de 50 mL del tubo utilizando un vidrio pipeta Pasteur equipada con una bombilla, luego centrifugar a 1.680 x g y 4 ° C por 15 minutos.</li>
		<li>Retirar el sobrenadante y mantener a un lado en un matraz de fondo redondo de 250 mL.</li>
		<li>Añadir 10 mL de agua desionizada para el tubo de centrífuga de fondo cónico que contiene el precipitado. Vortex para Resuspender el pellet.</li>
		<li>Centrífuga x 1.680 g, 4 º C, durante 15 minutos.</li>
		<li>Retirar el sobrenadante y añadir al matraz de fondo redondo de 250 mL que contiene el primer sobrenadante (paso 4.3.4).</li>
		<li>Congelar los sobrenadantes recogidos por inmersión del matraz en nitrógeno líquido con mano constante remolino y transferir inmediatamente el matraz a un colector de benchtop congelar-secador para evitar que el material descongelado.</li>
		<li>Una vez finalizado el proceso de liofilización (noche), retire el matraz del congelar-secador.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. purificación de Amino Alcoholes de mezcla de crudo de reacción enzimática
<ol><li>Resina de intercambio iónico<ol>
<li>Disolver el producto liofilizado en la cantidad mínima de acuosa 0,1 M de HCl (aproximadamente 4 mL) hasta que las partículas sólidas no son visibles para el ojo desnudo.</li>
		<li>Condición de una resina de intercambio catiónico del grupo funcional ácido sulfónico, malla de 200-400, en una columna de vidrio (20 x 250 mm) por liberador a presión atmosférica 1 M HCl (volúmenes de columna 4) seguido de 0.1 M HCl (4 volúmenes de columna, volumen de la columna = 10 mL).</li>
		<li>Carga de la muestra cuidadosamente en la parte superior de la resina en las paredes de la columna de vidrio utilizando una micropipeta de 1000 μl. Luego, enjuague el tubo de centrífuga de fondo cónico que contenía el producto crudo tres veces con 1 mL 0.1 M de ácido clorhídrico solución acuosa por lavar y cargar los volúmenes de enjuague resultante en la columna de la misma manera.</li>
		<li>Eluir con una no-lineal gradiente: 4 volúmenes de columna de 0.1 M HCl, 4 volúmenes de columna de agua, 4 volúmenes de columna de 5% de NH4OH, 4 volúmenes de columna de 10% de NH4OH, 4 volúmenes de columna de 15% NH4OH, 4 volúmenes de columna de 20% NH4OH , 4 volúmenes de columna de 25% de NH4OH y por último 4 volúmenes de columna de 28% NH4OH.</li>
		<li>Supervisar la purificación por HPLC (ver paso 6).</li>
		<li>Las fracciones que contiene el compuesto (NH4OH 20-28%) de la piscina y como se describe en pasos 4.3.8-4.3.9 por congelación. Nota: La columna de intercambio iónico se puede reutilizar después de la elución con agua desionizada para neutralización de agua de elución (aproximadamente 50 mL) seguido de reacondicionamiento por liberador con 50 mL de 1 M de HCl.</li>
	</ol>
</li>
	<li>SPE<ol>
<li>Solubilizar el compuesto liofilizado en aproximadamente 2 mL de H3PO4diesel (20 μl/mL).</li>
		<li>Lugar un modo mixto intercambio catiónico SPE 6 mL cartucho en un colector de extracción conectada a una bomba de agua. Estado del cartucho de dibujo con 4 mL de metanol a presión reducida, suministrada por el distribuidor. Equilibrar el cartucho por el dibujo a través de 4 mL de H3PO4diesel (20 μl/mL).</li>
		<li>Cargar la muestra en el cartucho utilizando una micropipeta μL 1.000 en la parte superior de la resina en las paredes de la columna de vidrio y enjuague el frasco que contiene el producto tres veces con 0,75 mL de H3PO4diesel (20 μl/mL) por lavado. El volumen de enjuague resultante en la columna de la carga de la misma manera.</li>
		<li>Lavar el cartucho por liberador de presión reducida, suministrado por el colector, 4 mL 2% HCOOH, en agua, luego con 4 mL de agua. Procederá a la elución con un gradiente de NH4OH en agua (4 mL para cada elución, a partir de 4% de NH4OH: 10%, 15%, 15%, 20% y 28%).</li>
		<li>Supervisar la purificación por HPLC mediante el análisis de cada fracción según la reacción seguimiento protocolo descrito en el paso 6. Mantenga todas las fracciones que contienen puro derivado deseado según cromatograma (UV) ULTRAVIOLETA y proceda al paso 5.2.6.</li>
		<li>Piscina las fracciones que contiene el deseado compuesto en un 100 mL redondo matraz de fondo, enjuague los tubos que contienen las fracciones con agua y añadir el volumen de enjuague 100 ml redondo matraz de fondo.</li>
		<li>Eliminar el disolvente a presión reducida utilizando un evaporador rotatorio, equipado con termostato agua baño hervidor de agua a 40 ° C y conectado a una bomba de vacío de 10 mbar.</li>
		<li>Solubilizar el sólido en un volumen mínimo de agua y transfiera la solución a un pesado 25 mL redondo matraz de fondo. Enjuagar el matraz con un volumen mínimo de agua, añadir el volumen de enjuague al matraz de 25 mL y proceda al paso 5.2.9.</li>
		<li>Pesar el producto purificado y calcular el rendimiento.</li>
		<li>El producto purificado en el volumen mínimo de 2M de HCl se disuelven hasta que las partículas sólidas no son visibles para el ojo desnudo y como se describe en pasos 4.3.8-4.3.9 por congelación. Nota: El amino alcoholes son compuestos sensibles y se mantienen como sus sales de clorhidrato.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. reacción de monitoreo y análisis de productos
<ol><li>Derivatización de sustratos y productos antes de análisis de HPLC Nota: Los substratos y productos necesitan derivatizada como derivados aromáticos para aumentar su detectivity cromatográfico de UV. Utilizamos 1-fluoro-2, 4-dinitrobenceno (DNFB). Cada muestra fue inyectada en el HPLC inmediatamente después de la derivatización.<ol>
<li>Tomar 10 μl de la reacción enzimática y la transferencia a un microtubo de 1.5 mL. Añadir 10 μl de 0,25 M de solución acuosa de NaHCO3 , 100 μl de etanol y 30 μl de 2.5 mg/mL de solución DNFB en etanol.</li>
		<li>Cierre el microtubo y agitar la solución resultante por 1 h a 65 ° C, a 1.000 rpm. Saciar con 10 μl de 1 M de HCl.</li>
		<li>Filtrar sobre un filtro de jeringas no estériles de 4 mm de diámetro con un 0,22 μm poro tamaño del polivinilideno hidrofílico fluoruro (PVDF) la membrana utilizando una jeringa de 1 mL Luer.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Realizar seguimiento de la reacción del dioxygenase utilizando cualquier sistema capaz de separar los aminoácidos derivatizados. Este protocolo implica la detección UV de aminoácidos derivatizada en el dinitrobenceno (DNB) del cromóforo grupo27.<ol>
<li>Ajuste el HPLC con C18 con trimetil sililo endcapping fase reversa columna (5 μm, 3 x 150 mm).</li>
		<li>Equilibrar la columna C18 con (30:70) eluyente B (MeCN + 0.1% TFA) al eluyente A (H2O + 0.1% TFA) a un flujo de 1 mL/min y 35 ° C por 15 min (correspondiente a aproximadamente 20 volúmenes de columna).</li>
		<li>Inyectar 10 μl de la mezcla de reacción derivatizados (ver paso 6.1) en la columna HPLC C18. Use una mezcla de MeCN, 0.1% TFA/H2O y 0.1% TFA como eluyente con un degradado lineal (relación 30:70 a 70: 30 en 9 min., temperatura de 35 ° C, flujo 1 mL/min).</li>
		<li>Utilizar la detección de UV de 400 nm a analizar los productos que eluyen en la columna cromatográfica. DNB-lisina elutes típicamente alrededor 6,5 min hidroxilado DNB-lisina alrededor de 5,5 min, dihydroxylated DNB-lisina alrededor de 4,2 min y DNB-aminodiol alrededor de 5,3 minutos.</li>
	</ol>
</li>
</ol>7. RMN análisis de Amino Alcoholes purificadas
<ol><li>Disolver purificadas amino alcoholes en D2O (700 μL) y transfiera la solución a un tubo de resonancia magnética Nuclear (RMN).</li>
	<li>Adquirir 1H y 13C NMR espectros según apropiado NMR facility protocolos28.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Nestl, B. M., Hammer, S. C., Nebel, B. A., Hauer, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+Generation+of+Biocatalysts+for+Organic+Synthesis.">New Generation of Biocatalysts for Organic Synthesis.</a> Ang. Chem. Int. Ed. 53 (12), 3070-3095 (2014).</li><li>Reetz, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocatalysis+in+Organic+Chemistry+and+Biotechnology:+Past,+Present,+and+Future.">Biocatalysis in Organic Chemistry and Biotechnology: Past, Present, and Future.</a> J. Am. Chem. Soc. 135 (34), 12480-12496 (2013).</li><li>Turner, N. J., O'Reilly, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocatalytic+retrosynthesis.">Biocatalytic retrosynthesis.</a> Nat. Chem. Biol. 9 (5), 285-288 (2013).</li><li>Oroz-Guinea, I., Garcia-Junceda, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzyme+catalysed+tandem+reactions.">Enzyme catalysed tandem reactions.</a> Curr. Opin. Chem. Biol. 17 (2), 236-249 (2013).</li><li>Ricca, E., Brucher, B., Schrittwieser, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-Enzymatic+Cascade+Reactions:+Overview+and+Perspectives.">Multi-Enzymatic Cascade Reactions: Overview and Perspectives.</a> Adv. Syn. Catal. 353 (13), 2239-2262 (2011).</li><li>Ager, D. J., Prakash, I., Schaad, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=1,2-Amino+Alcohols+and+Their+Heterocyclic+Derivatives+as+Chiral+Auxiliaries+in+Asymmetric+Synthesis.">1,2-Amino Alcohols and Their Heterocyclic Derivatives as Chiral Auxiliaries in Asymmetric Synthesis.</a> Chem. Rev. 96 (2), 835-876 (1996).</li><li>Abiko, A., Masamune, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved,+convenient+procedure+for+reduction+of+amino+acids+to+aminoalcohols:+Use+of+NaBH4-H2SO4.">An improved, convenient procedure for reduction of amino acids to aminoalcohols: Use of NaBH4-H2SO4.</a> Tet. Lett. 33 (38), 5517-5518 (1992).</li><li>McKennon, M. J., Meyers, A. I., Drauz, K., Schwarm, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+convenient+reduction+of+amino+acids+and+their+derivatives.">A convenient reduction of amino acids and their derivatives.</a> J. Org. Chem. 58 (13), 3568-3571 (1993).</li><li>Singh, P., Samanta, K., Das, S. K., Panda, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Amino+acid+chirons:+a+tool+for+asymmetric+synthesis+of+heterocycles.">Amino acid chirons: a tool for asymmetric synthesis of heterocycles.</a> Org. Biomol. Chem. 12 (33), 6297-6339 (2014).</li><li>Colomer, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aminomethylhydroxylation+of+alkenes:+Exploitation+in+the+synthesis+of+scaffolds+for+small+molecule+libraries.">Aminomethylhydroxylation of alkenes: Exploitation in the synthesis of scaffolds for small molecule libraries.</a> Bioorg. Med. Chem. 23 (11), 2736-2740 (2015).</li><li>Steinreiber, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Aromatic+1,2-Amino+Alcohols+Utilizing+a+Bienzymatic+Dynamic+Kinetic+Asymmetric+Transformation.">Synthesis of Aromatic 1,2-Amino Alcohols Utilizing a Bienzymatic Dynamic Kinetic Asymmetric Transformation.</a> Adv. Syn. Catal. 349 (8-9), 1379-1386 (2007).</li><li>Steinreiber, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Overcoming+Thermodynamic+and+Kinetic+Limitations+of+Aldolase-Catalyzed+Reactions+by+Applying+Multienzymatic+Dynamic+Kinetic+Asymmetric+Transformations.">Overcoming Thermodynamic and Kinetic Limitations of Aldolase-Catalyzed Reactions by Applying Multienzymatic Dynamic Kinetic Asymmetric Transformations.</a> Ang. Chem. Int. Ed. 46 (10), 1624-1626 (2007).</li><li>Kohls, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selective+Access+to+All+Four+Diastereomers+of+a+1,3-Amino+Alcohol+by+Combination+of+a+Keto+Reductase-+and+an+Amine+Transaminase-Catalysed+Reaction.">Selective Access to All Four Diastereomers of a 1,3-Amino Alcohol by Combination of a Keto Reductase- and an Amine Transaminase-Catalysed Reaction.</a> Adv. Syn. Catal. 357 (8), 1808-1814 (2015).</li><li>Sehl, T., Maugeri, Z., Rother, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-step+synthesis+strategies+towards+1,2-amino+alcohols+with+special+emphasis+on+phenylpropanolamines.">Multi-step synthesis strategies towards 1,2-amino alcohols with special emphasis on phenylpropanolamines.</a> J. Mol. Cat. B: Enzymatic. 114, 65-71 (2015).</li><li>Martinez, S., Hausinger, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catalytic+Mechanisms+of+Fe(II)-+and+2-Oxoglutarate-dependent+Oxygenases.">Catalytic Mechanisms of Fe(II)- and 2-Oxoglutarate-dependent Oxygenases.</a> J. Biol. Chem. 290 (34), 20702-20711 (2015).</li><li>Baud, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synthesis+of+Mono&#8208;and+Dihydroxylated+Amino+Acids+with+New+&#945;&#8208;Ketoglutarate&#8208;Dependent+Dioxygenases:+Biocatalytic+Oxidation+of+C-H+Bonds.">Synthesis of Mono&#8208;and Dihydroxylated Amino Acids with New &#945;&#8208;Ketoglutarate&#8208;Dependent Dioxygenases: Biocatalytic Oxidation of C-H Bonds.</a> ChemCatChem. , (2014).</li><li>Suzuki, H., Kurihara, S., Kusano, T., Suzuki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+4.">Ch. 4.</a> Polyamines. 4, 47-59 (2015).</li><li>Kind, S., Wittmann, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bio-based+production+of+the+platform+chemical+1,5-diaminopentane.">Bio-based production of the platform chemical 1,5-diaminopentane.</a> Appl. Microbiol. Biotechnol. 91 (5), 1287-1296 (2011).</li><li>Schneider, J., Wendisch, V. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biotechnological+production+of+polyamines+by+bacteria:+recent+achievements+and+future+perspectives.">Biotechnological production of polyamines by bacteria: recent achievements and future perspectives.</a> Appl. Microbiol. Biotechnol. 91 (1), 17-30 (2011).</li><li>Qian, Z. -. G., Xia, X. -. X., Lee, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+engineering+of+Escherichia+coli+for+the+production+of+cadaverine:+A+five+carbon+diamine.">Metabolic engineering of Escherichia coli for the production of cadaverine: A five carbon diamine.</a> Biotechnol. Bioeng. 108 (1), 93-103 (2011).</li><li>Shin, J. H., Lee, S. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+engineering+of+microorganisms+for+the+production+of+L-arginine+and+its+derivatives.">Metabolic engineering of microorganisms for the production of L-arginine and its derivatives.</a> Microb. Cell. Fact. 13, (2014).</li><li>Nguyen, A., Schneider, J., Reddy, G., Wendisch, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fermentative+Production+of+the+Diamine+Putrescine:+System+Metabolic+Engineering+of+Corynebacterium+Glutamicum.">Fermentative Production of the Diamine Putrescine: System Metabolic Engineering of Corynebacterium Glutamicum.</a> Metabolites. 5 (2), 211 (2015).</li><li>Kidron, H., Repo, S., Johnson, M. S., Salminen, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Classification+of+Amino+Acid+Decarboxylases+from+the+Alanine+Racemase+Structural+Family+by+Phylogenetic+Studies.">Functional Classification of Amino Acid Decarboxylases from the Alanine Racemase Structural Family by Phylogenetic Studies.</a> Mol. Biol. Evol. 24 (1), 79-89 (2007).</li><li>Takatsuka, Y., Onoda, M., Sugiyama, T., Muramoto, K., Tomita, T., Kamio, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+Characteristics+of+Selenomonas+ruminantium+Lysine+Decarboxylase+Capable+of+Decarboxylating+Both+L-Lysine+and+L-Ornithine.">Novel Characteristics of Selenomonas ruminantium Lysine Decarboxylase Capable of Decarboxylating Both L-Lysine and L-Ornithine.</a> Biosci. Biotechnol. Biochem. 63 (6), 1063-1069 (1999).</li><li>Takatsuka, Y., Tomita, T., Kamio, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+the+Amino+Acid+Residues+Conferring+Substrate+Specificity+upon+Selenomonas+ruminantium+Lysine+Decarboxylase.">Identification of the Amino Acid Residues Conferring Substrate Specificity upon Selenomonas ruminantium Lysine Decarboxylase.</a> Biosci. Biotechnol. Biochem. 63 (10), 1843-1846 (1999).</li><li>Baud, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocatalytic+Approaches+towards+the+Synthesis+of+Chiral+Amino+Alcohols+from+Lysine:+Cascade+Reactions+Combining+alpha-Keto+Acid+Oxygenase+Hydroxylation+with+Pyridoxal+Phosphate-+Dependent+Decarboxylation.">Biocatalytic Approaches towards the Synthesis of Chiral Amino Alcohols from Lysine: Cascade Reactions Combining alpha-Keto Acid Oxygenase Hydroxylation with Pyridoxal Phosphate- Dependent Decarboxylation.</a> Adv. Syn. Catal. 359 (9), 1563-1569 (2017).</li><li>Ilisz, I., Berkecz, R., Peter, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+chiral+derivatizing+agents+in+the+high-performance+liquid+chromatographic+separation+of+amino+acid+enantiomers:+a+review.">Application of chiral derivatizing agents in the high-performance liquid chromatographic separation of amino acid enantiomers: a review.</a> J. Pharm. Biomed. Anal. 47 (1), 1-15 (2008).</li><li>. Organic Chemistry. Nuclear Magnetic Resonance (NMR) Spectroscopy Available from: <a target="_blank" href="https://www.jove.com/science-education/5680/nuclear-magnetic-resonance-nmr-spectroscopy">https://www.jove.com/science-education/5680/nuclear-magnetic-resonance-nmr-spectroscopy</a> (2017)</li><li>Hibi, M., Ogawa, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+and+biotechnology+applications+of+aliphatic+amino+acid+hydroxylases+belonging+to+the+Fe(II)/alpha-ketoglutarate-dependent+dioxygenase+superfamily.">Characteristics and biotechnology applications of aliphatic amino acid hydroxylases belonging to the Fe(II)/alpha-ketoglutarate-dependent dioxygenase superfamily.</a> Appl. Microbiol. Biotechnol. 98 (9), 3869-3876 (2014).</li><li>H&#252;ttel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocatalytic+Production+of+Chemical+Building+Blocks+in+Technical+Scale+with+&#945;-Ketoglutarate-Dependent+Dioxygenases.">Biocatalytic Production of Chemical Building Blocks in Technical Scale with &#945;-Ketoglutarate-Dependent Dioxygenases.</a> Chem. Ing. Tec. 85 (6), 809-817 (2013).</li><li>Kourist, R., Guterl, J. -. K., Miyamoto, K., Sieber, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enzymatic+Decarboxylation-An+Emerging+Reaction+for+Chemicals+Production+from+Renewable+Resources.">Enzymatic Decarboxylation-An Emerging Reaction for Chemicals Production from Renewable Resources.</a> ChemCatChem. 6 (3), 689-701 (2014).</li><li>Lee, J., Michael, A. J., Martynowski, D., Goldsmith, E. J., Phillips, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phylogenetic+diversity+and+the+structural+basis+of+substrate+specificity+in+the+beta/alpha-barrel+fold+basic+amino+acid+decarboxylases.">Phylogenetic diversity and the structural basis of substrate specificity in the beta/alpha-barrel fold basic amino acid decarboxylases.</a> J. Biol. Chem. 282 (37), 27115-27125 (2007).</li><li>Porter, J. L., Rusli, R. A., Ollis, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Directed+Evolution+of+Enzymes+for+Industrial+Biocatalysis.">Directed Evolution of Enzymes for Industrial Biocatalysis.</a> ChemBiochem. 17 (3), 197-203 (2016).</li></ol>

Los autores no tienen nada que revelar.

Derivados y aminoalcoholes quirales tienen una amplia gama de aplicaciones, desde auxiliares quirales para la síntesis orgánica a la terapia farmacéutica. Síntesis multietapa para producir alcoholes aminos por síntesis orgánica convencional son numerosos, pero no siempre es eficiente debido a medidas de protección/desprotección tedioso junto con un control sensible de la estereoquímica16. Un enfoque de biocatalizadores que prescinde de las medidas de protección/desprotección y es genera...

A pesar de los beneficios ofrecidos por Biocatálisis, la integración de biocatalizadores pasos de vías sintéticas o rutas biocatalíticas total sigue siendo en su mayoría limitada resolución cinética enzimática. Estas rutas han sido ampliamente utilizadas como un primer paso en la síntesis asimétrica de chemo-enzimática y Biocatálisis ofrece muchas más posibilidades de interconversions de grupo funcional con alta estereoselectividad1,2,3 . Por otra parte, como reacciones biocatalíticas se realizan en condiciones similares, por lo tanto es factible llevar a cabo reacciones de cascada en un pote de una manera4,5.
Aminoalcoholes quirales, son moléculas versátiles para el uso como auxiliares o andamios en síntesis orgánica6. La molécula de alcohol amino se encuentra con frecuencia en metabolitos secundarios y en ingredientes farmacéuticos activos (API). Β-amino alcoholes primarios están disponibles de los correspondientes ácidos α-amino por síntesis química convencional, sino acceso a γ-amino alcoholes quirales o alcoholes aminos secundarios requiere a menudo tediosas vías sintéticas junto con sensibles control de la estereoquímica7,8,9,10. Debido a su alta estereoselectividad, Biocatálisis pueden proporcionar una ruta sintética superior a estos bloques de construcción quirales11,12,13,14.
Previamente Reportamos la síntesis de mono - y di-hidroxi-L-lisinas por diastereoselectiva hidroxilación enzimática catalizada por dioxygenases de hierro (II) / α-ketoacid-dependiente de la familia de la ciclooxigenasa (αKAO) (figura 1)15. En particular, a partir de L-lisina, la KDO1 dioxigenasa cataliza la formación de los (3S) - hidroxi derivado (1), mientras que laR(4) - derivado (2) se forma por la reacción con KDO2 dioxigenasa. Hydroxylations regiodivergent sucesivos KDO1 y KDO2 conducen a la formación de los (3R4R) - dihidroxi - L-lisina (3) en forma ópticamente pura. Sin embargo, la gama limitada del sustrato de estas enzimas impide su gran utilización en la síntesis química, especialmente en la hidroxilación de aminas simples, como una molécula de ácido carboxílico en la α-posición del grupo amino es esencial para la actividad16.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56926/56926fig1.jpg"> Figura 1: conversiones biocatalíticas de L-lisina. Conversión en (3S) - hidroxi - L-lisina (1) catalizada por KDO1 dioxigenasa; (4R) - hidroxi - L-lisina (2) catalizada por dioxygenase KDO2; y 3R4R- dihidroxi - L-lisina (3) por la reacción en cascada sucesivamente catalizada por KDO1 y KDO2 dioxygenases. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56926/56926fig1large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Descarboxilación es una reacción común en el metabolismo17. En particular, aminoácidos DCs (EC 4.1.1) libre de cofactor (pyruvoyl-dependiente) o enzimas dependientes de PLP y catalizar la descarboxilación de los aminoácidos en las poliaminas correspondientes en las bacterias y los más altos organismos18,19 , 20 , 21 , 22. el mono - y dihidroxi compuestos (figura 3) 4–7, 10–11 corresponden a cadaverina hidroxilado, la diamina obtenida por descarboxilación de la L-lisina. Cadaverina es un bloque de construcción clave para la industria química, específicamente es un componente de polímeros de poliuretano y poliamida. Por lo tanto, bio-basado en la producción de esta diamina de recursos renovables ha atraído la atención como alternativa a la ruta de base de petróleo y varios microorganismos han sido diseñados para este propósito. En estas rutas metabólicas, lisina DC (PMA) es la enzima clave. LDC es una enzima dependiente de PLP pertenecientes a la alanina evaluacion (AR) familia estructural23. El DCs de PLP-dependientes (PLP-DCs) son conocidos por ser altamente específicos de sustrato. Sin embargo, algunas enzimas poseen la capacidad de la promiscuidad leve, siendo activa a los aminoácidos L-ornitina y L-lisina, como por ejemplo el LDC de Selenomonas rumirantium (LDCSrum), que tiene constantes cinéticas similares para lisina y ornitina descarboxilación24,25. Este sustrato extendido especificidad hace que esta enzima un buen candidato para la descarboxilación de mono - y di-hidroxi-L-lisina. Además, para DCs activa hacia los derivados hidroxilos de la lisina, se examinó el contexto genomic de los genes que codifican las enzimas αKAO. De hecho, en genomas procariotas los genes que codifican las enzimas implicadas en la vía biosintética de la misma son generalmente co localizados en racimos del gene. El gene KDO2 (de Chitinophaga pinensis) fue encontrado Co localizada con un gen que codifica la supuesta PLP-DC (figura 2). En cambio, ninguna codificación del gene para DC se ha encontrado al analizar el contexto genómico de la KDO1 dioxigenasa. La proteína PLP-DC de C. pinensis (DCCpin) por lo tanto, fue seleccionada como un candidato prometedor para catalizar el paso de la descarboxilación de la reacción en cascada.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56926/56926fig2.jpg"> Figura 2: contexto Genomic del gene KDO2 en C. pinensis. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56926/56926fig2large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
Por lo tanto, hemos diseñado las reacciones de la cascada enzimática que dioxygenases y DCs para lograr la síntesis de alcoholes alifáticos quirales β - y γ-amino de los aminoácidos (figura 3). Como se informó anteriormente, la oxidación de H de C catalizada por la αKAO presenta el centro stereogenic hidroxi sustituidas con diastereoselectividad total; la quiralidad Cβ/γ se conservarán en el paso decarboxylative, que sólo afecta el carbono Cα de la molécula del aminoácido del16.
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56926/56926fig3.jpg"> Figura 3: Análisis retrosintético. Retrosynthesis (A) de β - y γ-amino alcoholes (R) - 1, 5 - diaminopentan-2-ol (4) (5R) - hidroxi - L-lisina y (S) - 1, 5 - diaminopentan-2-ol (5) y 1, 5-diaminopentan-3-ol (6) de L-lisina. Retrosynthesis (B) β, γ y β, δ-aminoácidos dioles (2S, 3S) - 1, 5 - diaminopentane-2, 3-diol (10) y (2R, 4S) - 1,5 - diaminopentane-2, 4-diol (11) a partir de (5R)- hidroxi-L-lisina y (2R, 3R) - 1,5 - diaminopentane-2, 3-diol (7) a partir de L-lisina. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56926/56926fig3large.jpg" target="_blank">Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.</a>
A partir de L-lisina y su (5R)-hidroxi derivado, Adjunto divulgamos una dos o tres paso, un pote, procedimiento enzimático combina dioxygenases y PLP-DCs para obtener el objetivo de amino alcoholes. Antes de la síntesis a escala de laboratorio de las moléculas de la blanco, el método fue desarrollado en la balanza analítica para ajustar las condiciones de reacción, por ejemplo, las concentraciones de enzima, necesarias para permitir la conversión total de las materias primas; Presentamos este procedimiento así.

<table><tbody><tr><td>HEPES</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>L-lysine hydrochloride</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L5626</td><td></td></tr><tr><td>(5&lt;em&gt;S&lt;/em&gt;)-hydroxy-L-lysine</td><td>Sigma Aldrich</td><td>GPS NONH</td><td>Out sourcing</td></tr><tr><td>&amp;alpha;-ketoglutaric acid</td><td>Sigma Aldrich</td><td>75892</td><td></td></tr><tr><td>Sodium ascorbate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7631</td><td></td></tr><tr><td>Ammonium Iron(II) sulfate hexahydrate</td><td>Acros</td><td>201370250</td><td></td></tr><tr><td>Pyridoxal phosphate (PLP)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>82870</td><td></td></tr><tr><td>3,4-dimercaptobutane-1,2-diol (DTT)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D0632</td><td></td></tr><tr><td>1-fluoro-2,4-dinitrobenzene (DNFB)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D1529</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>VWR</td><td>20825.290</td><td></td></tr><tr><td>Sodium hydrogen carbonate</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71631</td><td></td></tr><tr><td>HCl 37%</td><td>Sigma Aldrich</td><td>435570</td><td></td></tr><tr><td>HCl 0.1M</td><td>Fluka</td><td>35335</td><td></td></tr><tr><td>Acetonitrile HiPerSolv CHROMANORM for LC-MS</td><td>VWR</td><td>83640.320</td><td></td></tr><tr><td>2,2,2-trifluoroacetic acid</td><td>VWR</td><td>153112E</td><td></td></tr><tr><td>Ammonia 28%</td><td>VWR</td><td>21182.294</td><td></td></tr><tr><td>Methanol HiPerSolv CHROMANORM for LC-MS</td><td>VWR</td><td>83638.32</td><td></td></tr><tr><td>Formic acid</td><td>Acros</td><td>270480010</td><td></td></tr><tr><td>Phosphoric acid 85%</td><td>Acros</td><td>201145000</td><td></td></tr><tr><td>Deuterium oxide</td><td>Acros</td><td>320,710,075</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S5881</td><td></td></tr><tr><td>C18 HPLC column</td><td>Phenomenex</td><td>00F-4601-Y0</td><td></td></tr><tr><td>Accela UHPLC System</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Accela PDA detector</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4mm syringe filters - 0,22&amp;micro;m - PVDF</td><td>Merck</td><td>SLGVR04NL</td><td></td></tr><tr><td>Single-use tuberculin syringe with ml graduation, Luer tip</td><td>VWR</td><td>HSWA5010.200V0</td><td></td></tr><tr><td>Cation exchange resin 100-200&amp;nbsp;mesh</td><td>Sigma Aldrich</td><td>217506</td><td></td></tr><tr><td>Mixed mode cation-exchange solid-phase extraction cartridge 6 mL</td><td>Waters</td><td>186000776</td><td></td></tr><tr><td>Extraction manifold</td><td>Waters</td><td>WAT200609</td><td></td></tr><tr><td>Rotary evaporator</td><td>B&amp;uuml;chi</td><td>531-0103</td><td></td></tr><tr><td>Lyophilizer alpha 1-2 LDplus</td><td>Christ</td><td>L083302</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette 20 &amp;micro;L</td><td>Eppendorf</td><td>3121000031</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette 100 &amp;micro;L</td><td>Eppendorf</td><td>3121000074</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette 500 &amp;micro;L</td><td>Eppendorf</td><td>3121000112</td><td></td></tr><tr><td>Micropipette 1000 &amp;micro;L</td><td>Eppendorf</td><td>3121000120</td><td></td></tr><tr><td>300 MHz spectrometer</td><td>Bruker</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 mL microtube</td><td>CLEARLine</td><td>CL20.002.0500</td><td></td></tr><tr><td>50 mL conical-bottom centrifuge tube</td><td>Fischer Scientific</td><td>05-539-8</td><td></td></tr><tr><td>25 mL round-bottom flask 14/23</td><td>Fischer Scientific</td><td>10353331</td><td></td></tr><tr><td>100 mL round-bottom flask 29/32</td><td>Fischer Scientific</td><td>11786183</td><td></td></tr><tr><td>250 mL round-bottom flask 29/32</td><td>Fischer Scientific</td><td>11786183</td><td></td></tr><tr><td>250 mL erlenmeyer flask</td><td>Fischerbrand</td><td>15496143</td><td></td></tr></tbody></table>

enzymatic cascade reactions for the synthesis of chiral amino alcohols from l-lysine

Amino alcoholes son compuestos versátiles con una amplia gama de aplicaciones. Por ejemplo, se han utilizado como andamios quirales en síntesis orgánica. Su síntesis de química orgánica convencional a menudo requiere procesos de síntesis de múltiples pasos tediosos, con difícil control sobre el resultado stereochemical. Presentamos un protocolo enzimáticamente sintetizar amino alcoholes a partir de la L-lisina disponible en 48 h. Este protocolo combina dos reacciones químicas que son muy difíciles de llevar a cabo por síntesis orgánica convencional. En la primera oxidación de paso, el regio - y diastereoselectiva de un enlace C-H sin activar de la lisina cadena lateral es catalizada por una dioxigenasa; una segundo regio - y diastereoselectiva de la oxidación catalizada por una dioxigenasa regiodivergent puede conducir a la formación de 1, 2-dioles. En el último paso, el grupo carboxílico del ácido alfa amino es dividido por un decarboxylase del fosfato de piridoxal (PLP) (DC). Este paso decarboxylative afecta sólo el carbono alfa del aminoácido, conservando el centro stereogenic hidroxi sustituido en posición beta y gamma. Los alcoholes aminos resultantes son ópticamente enriquecidos. El protocolo fue aplicado con éxito a la síntesis de semipreparative-escala de cuatro amino alcoholes. Seguimiento de las reacciones se realizó por cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) después de la derivatización de 1-fluoro-2, 4-dinitrobenceno. Simple purificación por extracción en fase sólida (SPE) que brinda el amino alcoholes con excelentes rendimientos (93% a > 95%).

Hemos divulgado previamente la síntesis de mono - y di-hidroxi-L-lisinas por diastereoselectiva hidroxilación enzimática catalizada por dioxygenases de hierro (II) / αKAO familia (figura 1)16. Para optimizar el protocolo de las cascadas todos presentado aquí, que combinan uno o dos pasos de hidroxilación catalizadas por una αKAO seguida por un paso de descarboxilación catalizado por un PLP-DC, las condiciones de reacción fuero...

Watch this Scientific Journal Video about Enzymatic Cascade Reactions for the Synthesis of Chiral Amino Alcohols from L-lysine at JoVE.com

Enzymatic Cascade Reactions for the Synthesis of Chiral Amino Alcohols from L-lysine

Aminoalcoholes quirales son moléculas versátiles para el uso como andamios en síntesis orgánica. A partir de L-lisina, sintetizar alcoholes aminos por una reacción de cascada enzimática combinando diastereoselectiva H C oxidación catalizada por dioxygenase seguido por clivaje de la molécula de ácido carboxílico del aminoácido del hidróxido correspondiente por un decarboxilasa.

Reacciones de la cascada enzimática para la síntesis de aminoalcoholes quirales de L-lisina

Amino alcohols are versatile compounds with a wide range of applications. For instance, they have been used as chiral scaffolds in organic synthesis. ...

enzymatic-cascade-reactions-for-synthesis-chiral-amino-alcohols-from

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Chemistry

Chemical Kinetics

SCIENTISTS IN ACTION

12.0K vistas.  CEA, CNRS, Univ Evry, Univ Paris-Saclay. Aminoalcoholes quirales son moléculas versátiles para el uso como andamios en síntesis orgánica. A partir de L-lisina, sintetizar alcoholes aminos por una reacción de cascada enzimática combinando diastereoselectiva H C oxidación catalizada por dioxygenase seguido por clivaje de la molécula de ácido carboxílico del aminoácido del hidróxido correspondiente por un decarboxilasa.

Video: Enzymatic Cascade Reactions for the Synthesis of Chiral Amino Alcohols from L-lysine

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

Activity-based protein profiling (ABPP) is a method for the identification of an enzyme of interest in a complex proteome through the use of a chemical probe that targets the enzyme&#39;s active sites. A reporter tag introduced into the probe allows for the detection of the labeled enzyme by in-gel fluorescence scanning, protein blot, fluorescence microscopy, or liquid chromatography-mass spectrometry. Here, we describe the preparation and use of the compound ARN14686, a click chemistry activity-based probe (CC-ABP) that selectively recognizes the enzyme N-acylethanolamine acid amidase (NAAA). NAAA is a cysteine hydrolase that promotes inflammation by deactivating endogenous peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR)-alpha agonists such as palmitoylethanolamide (PEA) and oleoylethanolamide (OEA). NAAA is synthesized as an inactive full-length proenzyme, which is activated by autoproteolysis in the acidic pH of the lysosome. Localization studies have shown that NAAA is predominantly expressed in macrophages and other monocyte-derived cells, as well as in B-lymphocytes. We provide examples of how ARN14686 can be used to detect and quantify active NAAA ex vivo in rodent tissues by protein blot and fluorescence microscopy.

Preparation and In Vivo Use of an Activity-based Probe for N-acylethanolamine Acid Amidase

Here, we describe the preparation and use of an activity-based probe (ARN14686, undec-10-ynyl-N-[(3S)-2-oxoazetidin-3-yl]carbamate) that allows for the detection and quantification of the active form of the proinflammatory enzyme N-acylethanolamine acid amidase (NAAA), both in vitro and ex vivo.

Preparación y<em&gt; En Vivo</em&gt; El uso de una sonda basada en la actividad de<em&gt; N</em&gt; -acylethanolamine Ácido amidasa

Activity-based protein profiling (ABPP) is a method for the identification of an enzyme of interest in a complex proteome through the use of a chemical ...

Investigación

Bioquímica

A Facile and Efficient Approach for the Production of Reversible Disulfide Cross-linked Micelles

Nanomedicine is an emerging form of therapy that harnesses the unique properties of particles that are nanometers in scale for biomedical application. Improving drug delivery to maximize therapeutic outcomes and to reduce drug-associated side effects are some of the cornerstones of present-day nanomedicine. Nanoparticles in particular have found a wide application in cancer treatment. Nanoparticles that offer a high degree of flexibility in design, application, and production based on the tumor microenvironment are projected to be more effective with rapid translation into clinical practice. The polymeric micellar nano-carrier is a popular choice for drug delivery applications.
In this article, we describe a simple and effective protocol for synthesizing drug-loaded, disulfide cross-linked micelles based on the self-assembly of a well-defined amphiphilic linear-dendritic copolymer (telodendrimer, TD). TD is composed of polyethylene glycol (PEG) as the hydrophilic segment and a thiolated cholic acid cluster as the core-forming hydrophobic moiety attached stepwise to an amine-terminated PEG using solution-based peptide chemistry. Chemotherapy drugs, such as paclitaxel (PTX), can be loaded using a standard solvent evaporation method. The O2-mediated oxidation was previously utilized to form intra-micellar disulfide cross-links from free thiol groups on the TDs. However, the reaction was slow and not feasible for large-scale production. Recently, an H2O2-mediated oxidation method was explored as a more feasible and efficient approach, and it was 96 times faster than the previously reported method. Using this approach, 50 g of PTX-loaded, disulfide cross-linked nanoparticles have been successfully produced with narrow particle size distribution and high drug loading efficiency. The stability of the resulting micelle solution is analyzed using disrupting conditions such as co-incubation with a detergent, sodium dodecyl sulfate, with or without a reducing agent. The drug-loaded, disulfide cross-linked micelles demonstrated less hemolytic activity when compared to their non-cross-linked counterparts.

To deliver cancer drugs to tumor sites with high specificity and reduced side effects, new methods based on nanoparticles are required. Here, we describe disulfide cross-linked micelles that can be easily prepared by hydrogen peroxide-mediated oxidation and are able to dissociate efficiently under a reducing tumor environment to release payloads.

Un enfoque Facile y eficiente para la producción de micelas reticuladas reversible disulfuro

Nanomedicine is an emerging form of therapy that harnesses the unique properties of particles that are nanometers in scale for biomedical application. ...

An Efficient Method for the Synthesis of Peptoids with Mixed Lysine-type/Arginine-type Monomers and Evaluation of Their Anti-leishmanial Activity

This protocol describes the manual solid-phase synthesis of linear peptoids that contain two differently functionalized cationic monomers. In this procedure amino functionalized 'lysine' and guanido functionalized 'arginine' peptoid monomers can be included within the same peptoid sequence. This procedure uses on-resin (N-(1-(4,4-dimethyl-2,6-dioxocyclohexylidene)ethyl) or Dde protection, orthogonal conditions to the Boc protection of lysine monomers. Subsequent deprotection allows an efficient on-resin guanidinylation reaction to form the arginine residues. The procedure is compatible with the commonly used submonomer method of peptoid synthesis, allowing simple peptoids to be made using common laboratory equipment and commercially available reagents. The representative synthesis, purification and characterization of two mixed peptoids is described. The evaluation of these compounds as potential anti-infectives in screening assays against Leishmania mexicana is also described. The protozoan parasite L. mexicana is a causative agent of cutaneous leishmaniasis, a neglected tropical disease that affects up to 12 million people worldwide.

A protocol to synthesize peptoids with mixed cationic functionality in the same sequence is presented (lysine- and arginine-type monomers). Subsequent testing of these compounds against Leishmania mexicana, the protozoan parasites that cause cutaneous leishmaniasis, is also described.

Un método eficaz para la síntesis de peptoides con monómeros de tipo mixto lisina / arginina del tipo y la evaluación de su actividad anti-Leishmania

This protocol describes the manual solid-phase synthesis of linear peptoids that contain two differently functionalized cationic monomers. In this ...

Hydrolysis of a Ni-Schiff-Base Complex Using Conditions Suitable for Retention of Acid-labile Protecting Groups

Unnatural amino acids, amino acids containing side-chain functionalities not commonly seen in nature, are increasingly found in synthetic peptide sequences. Synthesis of some unnatural amino acids often includes the use of a precursor consisting of a Schiff-base stabilized by a nickel cation. Unnatural side-chains can be installed on an amino acid backbone found in this Schiff-base complex. The resulting unnatural amino acid can then be isolated from this complex using hydrolysis of the Schiff-base, typically by employing reflux in strongly acidic solution. These highly acidic conditions may remove acid-labile side-chain protecting groups necessary for the unnatural amino acids to be used in microwave-assisted solid-phase peptide synthesis. In this work, we present an efficient hydrolysis and subsequent Fmoc protection of an amino acid isolated from a Ni-Schiff base complex. Hydrolysis conditions presented in this work are suitable for retention of acid-labile side-chain protecting groups and may be adaptable to a variety of unnatural amino acid substrates.

Here, we present an efficient hydrolysis and subsequent Fmoc protection of an amino acid isolated from a Ni-Schiff-base complex. Hydrolysis conditions presented here are suitable for use when retention of acid-labile side-chain protecting groups is required. This technique may be adaptable to a variety of unnatural amino acid substrates.

Hidrólisis de un Ni-Schiff-base compleja usando condiciones adecuadas para la retención de los grupos protectores lábiles en medio ácido

Unnatural amino acids, amino acids containing side-chain functionalities not commonly seen in nature, are increasingly found in synthetic peptide ...

Highly Stereoselective Synthesis of 1,6-Ketoesters Mediated by Ionic Liquids: A Three-component Reaction Enabling Rapid Access to a New Class of Low Molecular Weight Gelators

In organic chemistry ionic liquids (ILs) have emerged as safe and recyclable reaction solvents. In the presence of a base ILs can be deprotonated to form catalytically active N-Heterocyclic Carbenes (NHCs). Here we have used ILs as precatalysts in the addition of &#945;,&#946;-unsaturated aldehydes to chalcones to form 1,6-ketoesters, incorporating an anti-diphenyl moiety in a highly stereoselective fashion. The reaction has a broad substrate scope and several functional groups and heteroaromatics can be integrated into the ketoester backbone in generally good yields with maintained stereoselectivity. The reaction protocol is robust and scalable. The starting materials are inexpensive and the products can be obtained after simple filtration, avoiding solvent-demanding chromatography. Furthermore, the IL can be recycled up to 5 times without any loss of reactivity. Moreover, the 1,6-ketoester end product is a potent gelator in several hydrocarbon based solvents. The method enables rapid access to and evaluation of a new class of low molecular weight gelators (LMWGs) from recyclable and inexpensive starting materials.

Ionic liquids (ILs) mediate fast, simple and cheap access to 1,6-ketoesters in high diastereoselectivities and good yields. The reaction protocol is robust and the 1,6-ketoesters can be obtained in gram scale after a simple filtration protocol. Moreover, the 1,6-ketoesters are potent gelators in hydrocarbon solvents.

Síntesis altamente estereoselectiva de 1,6-cetoésteres Mediada por líquidos iónicos: una reacción de tres componentes Habilitación de acceso rápido a una nueva clase de bajo peso molecular gelificantes

In organic chemistry ionic liquids (ILs) have emerged as safe and recyclable reaction solvents. In the presence of a base ILs can be deprotonated to form ...

Química

Constructing Thioether/Vinyl Sulfide-tethered Helical Peptides Via Photo-induced Thiol-ene/yne Hydrothiolation

Here, we describe a detailed protocol for the preparation of thioether-tethered peptides using on-resin intramolecular/intermolecular thiol-ene hydrothiolation. In addition, this protocol describes the preparation of vinyl-sulfide-tethered peptides using in-solution intramolecular thiol-yne hydrothiolation between amino acids that possess alkene/alkyne side chains and cysteine residues at i, i+4 positions. Linear peptides were synthesized using a standard Fmoc-based solid-phase peptide synthesis (SPPS). Thiol-ene hydrothiolation is carried out using either an intramolecular thio-ene reaction or an intermolecular thio-ene reaction, depending on the peptide length. In this research, an intramolecular thio-ene reaction is carried out in the case of shorter peptides using on-resin deprotection of the trityl groups of cysteine residues following the complete synthesis of the linear peptide. The resin is then set to UV irradiation using photoinitiator 4-methoxyacetophenone (MAP) and 2-hydroxy-1-[4-(2-hydroxyethoxy)-phenyl]-2-methyl-1-propanone (MMP). The intermolecular thiol-ene reaction is carried out by dissolving Fmoc-Cys-OH in an N,N-dimethylformamide (DMF) solvent. This is then reacted with the peptide using the alkene-bearing residue on resin. After that, the macrolactamization is carried out using benzotriazole-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate (PyBop), 1-hydroxybenzotriazole (HoBt), and 4-Methylmorpholine (NMM) as activation reagents on the resin. Following the macrolactamization, the peptide synthesis is continued using standard SPPS. In the case of the thio-yne hydrothiolation, the linear peptide is cleaved from the resin, dried, and subsequently dissolved in degassed DMF. This is then irradiated using UV light with photoinitiator 2,2-dimethoxy-2-phenylacetophenone (DMPA). Following the reaction, DMF is evaporated and the crude residue is precipitated and purified using high-performance liquid chromatography (HPLC). These methods could function to simplify the generation of thioether-tethered cyclic peptides due to the use of the thio-ene/yne click chemistry that possesses superior functional group tolerance and good yield. The introduction of thioether bonds into peptides takes advantage of the nucleophilic nature of cysteine residues and is redox-inert relative to disulfide bonds.

We present a protocol for the construction of thioether/vinyl sulfide-tethered helical peptides using photo-induced thiol-ene/thiol-yne hydrothiolation.

Construcción de Thioether/sulfuro de vinilo-atado Hydrothiolation de péptidos helicoidales mediante foto-inducida tiol-eno/Ino

Here, we describe a detailed protocol for the preparation of thioether-tethered peptides using on-resin intramolecular/intermolecular thiol-ene ...

Efficient Construction of Drug-like Bispirocyclic Scaffolds Via Organocatalytic Cycloadditions of &#945;-Imino &#947;-Lactones and Alkylidene Pyrazolones

Bispirocyclic scaffolds are one of the important structural subunits in many natural products that exhibit diverse and attractive biological activities. Recently, we have developed an efficient organocatalytic strategy, which provides facile access to a variety of enantiomerically enriched bispiro[&#947;-butyrolactone-pyrrolidin-4,4&#39;-pyrazolone] skeletons. In this paper, we demonstrate a detailed protocol for the asymmetric synthesis of drug-like bispirocyclic compounds with two spirocyclic carbon centers via an organocatyltic 1,3-dipolar cycloaddition reaction. Spirocyclization synthons &#945;-imino &#947;-lactones and alkylidene pyrazolones are prepared first, which are then subjected to a cycloaddition reaction in the presence of a bifunctional squaramide organocatalyst to afford the desired bispirocycles in high yields and excellent stereoselectivities. Chiral high-performance liquid chromatography (HPLC) is carried out to determine the enantiomeric purity of the products, and the d.r. value is examined by proton nuclear magnetic resonance (1H NMR). The absolute configuration of the product is assigned according to an X-ray crystallographic analysis. This synthetic strategy allows scientists to prepare a diversity of bispirocyclic scaffolds in high yields and excellent diastereo- and enantioselectivities.

Enantiomerically enriched bispiro[&#947;-butyrolactone-pyrrolidin-4,4&#39;-pyrazolone] skeletons are asymmetrically synthesized through a simple organocatalytic 1,3-dipolar cycloaddition reaction.

Técnicas de construcción de andamios Bispirocyclic de droga-, como a través de la actividad del Organocatalytic de γ-lactonas α-Imino y Alkylidene pirazolonas

Bispirocyclic scaffolds are one of the important structural subunits in many natural products that exhibit diverse and attractive biological activities. ...

Preparation of Enantiopure Non-Activated Aziridines and Synthesis of Biemamide B, D, and epiallo-Isomuscarine

Nitrogen-containing heterocycle aziridines are synthetically very valuable for the preparation of azacyclic and acyclic molecules. However, it is very difficult and laborious to make aziridines in optically pure forms on a large scale to apply asymmetric synthesis of aza compounds. Fortunately, we successfully achieved both enantiomers (2R)- and (2S)-aziridine-2-carboxylates with the electron-donating &#945;-methylbenzyl group at the ring nitrogen as non-activated aziridines. These starting aziridines have two distinct functional groups-highly reactive three-membered ring and versatile carboxylate. They are applicable in ring-opening or ring-transformation with aziridine and in functional group transformation to others from carboxylate. Both of these enantiomers were utilized in the preparation of biologically important amino acyclic and/or aza-heterocyclic compounds in an asymmetric manner. Specifically, this report describes the first expedient asymmetric synthesis of both enantiomers of 5, 6-dihydrouracil-type marine natural products biemamide B and D as potential TGF-&#946; inhibitors. This synthesis consisted of regio- and the stereoselective ring-opening reaction of aziridine-2-carboxylate and subsequent formation of 4-aminoteterahydropyrimidine-2,4-dione. One more example in this protocol dealt a highly stereoselective Mukaiyama reaction of aziridine-2-carboxylate and silyl enol ether, following intramolecular aziridine ring-opening to provide easy and facile access to (-)-epiallo-isomuscarine.

Preparation of Enantiopure Non-Activated Aziridines and Synthesis of Biemamide B, D, and epiallo-Isomuscarine

In this study, we prepare both enantiomers of aziridine-2-carboxylate, which are used in the asymmetric synthesis of alkaloids, including biemamide B and D, and (-)-epiallo-isomuscarine.

Preparación de aziridinas no activadas enantiopure y síntesis de biemamida B, D y epiallo-isomuscarina

Nitrogen-containing heterocycle aziridines are synthetically very valuable for the preparation of azacyclic and acyclic molecules. However, it is very ...

Organocatalysis

Source: Vy M. Dong and Faben Cruz, Department of Chemistry, University of California, Irvine, CA
This experiment will demonstrate the concept of organocatalysis by illustrating the proper setup of a reaction that utilizes enamine catalysis. Organocatalysis is a form of catalysis that uses substoichiometric amounts of small organic molecules to accelerate reactions. This type of catalysis is complementary to other forms of catalysis such as transition metal or biocatalysis. Transition metal catalysis involves transition metals as catalysts and biocatalysis uses enzymes as catalysts. Some advantages of organocatalysis include the low toxicity and cost of the organocatalysts in comparison to many metal catalysts. In addition, most organocatalysts are not sensitive to air and moisture, unlike metal catalysts. In contrast to enzymes found in living organisms, the small molecules that act as organocatalysts are typically easy to access. Furthermore, organocatalysis offers complementary and new reactivity not observed with other forms of catalysis.

Organocatalysis: Principles and Applications

Organocatálisis

Source: Vy M. Dong and Faben Cruz, Department of Chemistry, University of California, Irvine, CA
This experiment will demonstrate the concept of ...

Educación

JoVE Science Education

Química orgánica II

Acid Halides to Esters: Alcoholysis

Alcoholysis is a nucleophilic acyl substitution reaction in which an alcohol functions as a nucleophile. Acid halides react with alcohol to produce esters. The mechanism proceeds in three steps:
<ol>
	<li>First, the alcohol acts as a nucleophile and attacks the acyl carbon to form a tetrahedral intermediate.</li>
	<li>Next, the carbonyl re-forms with the loss of a chloride ion.</li>
	<li>Lastly, the positively charged intermediate loses a proton to give an ester as the final product along with H3O+, making HCl an overall byproduct of the reaction.</li>
</ol>
<img alt="Organic reaction mechanism diagram, nucleophilic substitution process displaying molecular transition." src="/files/ftp_upload/12362/12362_PT_Figure_1.svg" style="text-align: center; height: 200px;" data-altupdatedat="1747908711000" data-alt="Figure1">
Pyridine is used as a base to neutralize the acidic reaction mixture.
Alcoholysis of sulfonyl chlorides follows a similar pattern and forms sulfonic acid esters.
<img alt="Chemical reaction diagram; synthesis process; reaction of acyl chloride with alcohol; ester formation." src="/files/ftp_upload/12362/12362_PT_Figure_2.svg" style="text-align: center; height: 75px;" data-altupdatedat="1747908711000" data-alt="Figure2">

Halogenuros ácidos a ésteres: alcoholisis

Alcoholysis is a nucleophilic acyl substitution reaction in which an alcohol functions as a nucleophile. Acid halides react with alcohol to produce ...

Reacciones de la cascada enzimática para la síntesis de aminoalcoholes quirales de L-lisina

Resumen

Explorar más videos

PLAYLIST