Modélisation de l’AVC chez la souris: lésions corticales focales par photothrombose

Résumé

Décrit ici est le modèle d’AVC photothrombotique, où un AVC est produit à travers le crâne intact en induisant une occlusion microvasculaire permanente à l’aide d’un éclairage laser après administration d’un colorant photosensible.

Résumé

L’AVC est l’une des principales causes de décès et d’invalidité acquise chez les adultes dans les pays développés. Malgré des recherches approfondies pour de nouvelles stratégies thérapeutiques, il reste des options thérapeutiques limitées pour les patients victimes d’un AVC. Par conséquent, davantage de recherches sont nécessaires pour les voies physiopathologiques telles que l’inflammation post-AVC, l’angiogenèse, la plasticité neuronale et la régénération. Compte tenu de l’incapacité des modèles in vitro à reproduire la complexité du cerveau, les modèles expérimentaux d’AVC sont essentiels pour l’analyse et l’évaluation ultérieure de nouvelles cibles médicamenteuses pour ces mécanismes. En outre, des modèles standardisés détaillés pour toutes les procédures sont nécessaires de toute urgence pour surmonter la crise dite de la réplication. Dans le cadre d’un effort au sein du consortium de recherche ImmunoStroke, un modèle murin photothrombotique standardisé utilisant une injection intrapéritonéale de Rose Bengal et l’éclairage du crâne intact avec un laser de 561 nm est décrit. Ce modèle permet la performance de l’AVC chez la souris avec une allocation à n’importe quelle région corticale du cerveau sans chirurgie invasive; permettant ainsi l’étude de l’AVC dans diverses zones du cerveau. Dans cette vidéo, les méthodes chirurgicales d’induction de l’AVC dans le modèle photothrombotique ainsi que l’analyse histologique sont démontrées.

Introduction

L’AVC ischémique reste l’une des principales causes de décès et d’invalidité acquise chez les adultes dans les pays^développés au 21e siècle, représentant environ 2,7 millions de décès en 2017 dans le monde^1. Malgré les immenses efforts de la communauté scientifique, peu de traitements sont disponibles. De plus, avec des critères d’exclusion aussi élevés, ces options déjà limitées ne sont pas accessibles à de nombreux patients, ce qui entraîne un besoin urgent de nouveaux traitements pour améliorer la récupération fonctionnelle après un AVC.

Compte tenu de l’incapacité des modèles in vitro à reprod....

Protocole

Les expériences rapportées dans cette vidéo ont été menées conformément aux directives nationales pour l’utilisation d’animaux de laboratoire, et les protocoles ont été approuvés par les comités gouvernementaux allemands (Regierung von Oberbayern, Munich, Allemagne). Les souris utilisées dans cette étude étaient des souris mâles C57Bl/6J, âgées de 10 à 12 semaines, et envoyées par Charles River Allemagne. Les animaux ont été logés à des températures contrôlées (22 °C ± 2 °C), avec une période de cycle lumière-obscurité de 12 h et un accès ad libitum à de la nourriture et de l’eau granulées.

1. Préparation du matériel et des instrumen....

Résultats

Le modèle décrit ici est un modèle de course photothrombotique par injection de Rose Bengal et éclairage intact du crâne pendant 20 min, à une longueur d’onde constante de 561 nm et une puissance de sortie de 25 mW à la fibre. Bien que la chirurgie photothrombotique complète dure 30 minutes, l’animal est maintenu sous anesthésie basse et les lésions cérébrales sont modérées. Environ 10 minutes après le transfert dans leurs cages, tous les animaux étaient éveillés, se déplaçaient librement dans la .......

Discussion

Le protocole présenté décrit le modèle expérimental de photothrommose par AVC en éclairant le crâne intact avec un laser de 561 nm, avec une injection intrapéritonéale précédente de Rose Bengal. Jusqu’à récemment, l’utilisation de ce modèle était faible mais ne cesse d’augmenter.

La mortalité pendant l’induction de l’AVC dans ce modèle est absente. La mortalité globale de moins de 5% survient pendant l’opération en raison de complications anesthésiologiques ou d.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
561 nm wavelenght laser	Solna	Cobolt HS-03
Acetic Acid	Sigma Life Science	695092
Anesthesia system for isoflurane	Drager
ApopTag Peroxidase In Situ Apoptosis Detection Kit	Millipore	S7100
Bepanthen pomade	Bayer	1578681
C57Bl/6J mice	Charles River	000664
Collimeter	Thorlabs	F240APC-A
Cotons	NOBA Verbondmitel Danz	974116
Cresyl violet	Sigma Life Science	C5042-10G
Cryostat	Thermo Scientific CryoStarNX70
Ethanol 70%	CLN Chemikalien Laborbedorf	521005
Ethanol 96%	CLN Chemikalien Laborbedorf	522078
Ethanol 99%	CLN Chemikalien Laborbedorf	ETO-5000-99-1
Filter paper	Macherey-Nagel	432018
Fine Scissors	FST	15000-00
Forceps	FST	11616-15
Heating blanket	FHC DC Temperature Controller	40-90-8D
Isoflurane	Abbot	B506
Isopentane	Fluka	59070
Ketamine	Inresa Arzneimittel GmbH
Laser Speckle	Perimed	PeriCam PSI HR
Mayor Scissors	FST	1410-15
Phosphate Buffered Saline PH: 7.4	Apotheke Innestadt Uni Munchen	P32799
Protective glasses	Laser 2000	NIR-ZS2-38
Rose Bengal	Sigma Aldrich	198250-5G
Roti-Histokit mounting medium	Roth	6638.1
Saline solution	Braun	131321
Stereomikroskop	Zeiss	Stemi DV4
Stereotactic frame	Stoelting	51500U
Superfrost Plus Slides	Thermo Scientific	J1800AMNZ
Xylacine	Albrecht