Mise en place d’organoïdes tumoraux et de fibroblastes dérivés du cancer du pancréas à partir de tissus frais

Résumé

Les organoïdes tumoraux ont révolutionné la recherche sur le cancer et l’approche de la médecine personnalisée. Ils représentent un modèle de tumeur cliniquement pertinent qui permet aux chercheurs de garder une longueur d’avance sur la tumeur en clinique. Ce protocole établit des organoïdes tumoraux à partir d’échantillons frais de tissus tumoraux pancréatiques et de xénogreffes dérivées de patients d’origine adénocarcinome pancréatique.

Résumé

Les organoïdes tumoraux sont des modèles tumoraux ex vivo tridimensionnels (3D) qui récapitulent les principales caractéristiques biologiques des tissus tumoraux primaires d’origine. Les organoïdes tumoraux dérivés de patients ont été utilisés dans la recherche translationnelle sur le cancer et peuvent être appliqués pour évaluer la sensibilité et la résistance au traitement, les interactions cellule-cellule et les interactions des cellules tumorales avec le microenvironnement tumoral. Les organoïdes tumoraux sont des systèmes de culture complexes qui nécessitent des techniques de culture cellulaire avancées et des milieux de culture avec des cocktails de facteurs de croissance spécifiques et une membrane basale biologique qui imite l’environnement extracellulaire. La capacité d’établir des cultures tumorales primaires dépend fortement du tissu d’origine, de la cellularité et des caractéristiques cliniques de la tumeur, telles que le grade de la tumeur. De plus, la collecte d’échantillons de tissus, la qualité et la quantité des matériaux, ainsi qu’une biobanque et un stockage corrects sont des éléments cruciaux de cette procédure. Les capacités techniques du laboratoire sont également des facteurs cruciaux à prendre en compte. Ici, nous rapportons une SOP/protocole validé qui est techniquement et économiquement réalisable pour la culture d’organoïdes tumoraux ex vivo à partir d’échantillons de tissus frais d’origine adénocarcinome pancréatique, soit à partir de tissus de donneurs primaires primaires frais réséqués de patients, soit de xénogreffes dérivées de patients (PDX). La technique décrite ici peut être réalisée dans des laboratoires avec des installations de culture tissulaire et de souris de base et est adaptée à une large application dans le domaine de l’oncologie translationnelle.

Introduction

Les organoïdes tumoraux sont des cultures organisées en trois dimensions (3D) ex vivo qui sont dérivées de tissus tumoraux frais et fournissent des modèles de cancer. Les organoïdes tumoraux récapitulent les principales caractéristiques biologiques de la tumeur primaire d’origine 1,2,3,4 et peuvent être étendus jusqu’à plusieurs mois et cryoconservés^, comme les lignées cellulaires immortalisées conventionnelles. Les organoïdes tumoraux fournissent une biobanque de modèles tumoraux dérivés de patients pour la médecine translationnel....

Protocole

Toutes les procédures ont été effectuées conformément aux directives institutionnelles pour le bien-être des animaux de laboratoire approuvées par le Comité d’éthique de l’Universidad Autónoma de Madrid (CEI 103-1958-A337) et La Comunidad de Madrid (PROEX 294/19) et conformément aux directives pour une conduite éthique dans le soin et l’utilisation des animaux telles qu’énoncées dans les Principes directeurs internationaux pour la recherche biomédicale impliquant des animaux. élaboré par le Conseil des organisations internationales des sciences médicales (CIOMS). Le protocole suivait les principes éthiques de la recherche biomédicale avec un consentement éclairé écri....

Discussion

Les progrès majeurs dans les thérapies pharmacologiques contre le cancer sont difficiles, car la probabilité d’approbation des médicaments dans les essais cliniques de phase I en oncologie est de 5,1 %, ce qui est le plus bas de tous les types de maladie²³. La raison principale est que le cancer est très hétérogène et, par conséquent, les cohortes de patients ne répondent pas uniformément comme prévu au traitement donné, ce qui souligne qu’une approche plus personnalisée est néc.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
6 well Costar Ultra-low Attachment plates	Biofil	TCP011006
70 μm pore strainer	VWR	732-2758
Ammonium Chloride Potassium (ACK) Lysis Buffer	Gibco	A10492-01
Amphotericin B	Gibco	15290018
Cell culture incubator (21% O2, 5% CO2 and 37 ºC)	Nuaire	NU-4750E
Cell recovery solution	Corning	354253
Collagenase IV	Gibco	17104019
DMEM/F-12 (1:1)(1X) with L-Glutamine and HEPES	Gibco	31330-038
DNase	Roche	10104159001
Fetal Bovine Serum (FBS)	Corning	35-079-CV
Freezing container, Nalgene	Merck	C1562
gentleMACS Octo Dissociator	Milteny Biotec	130-096-427
HEPES	Gibco	15630056
Human Placenta Growth Factor (PlGF)	enQuireBio	QP6485-EC-100UG
Immunocompromised female 6-week-old NU-Foxn1nu nude mice	Janvier, France
Insulin-like growth factor-1 (IGF-1)	Invitrogen	RP10931
L-Glutamine	Corning	354235
Matrigel Basement Membrane Matrix	Corning	356234
Normocin	InvivoGen	ant-nr-2
Pasteur pipettes	Deltalab	200007
Penicillin Streptomycin Solution (100x)	Corning	30-002-CI
Phosphate-Buffered Saline (PBS)	Corning	21-040-CV
Recombinant Human Basic Fibroblast Growth Factor (bFGF)	Gibco	PHG0026
Recombinant Human Epidermal Growth Factor (EGF)	Gibco	PHG0311
ROCK Inhibitor Y-27632 (Dihydrochloride)	STEMCELL	72304
StemPro Accutase Cell Dissociation Reagent	Gibco	A1110501
Surgical Blades	Nahita	FMB018
Trypsin	Gibco	25300054