Fabrication de lymphocytes T à récepteur antigénique chimérique sur un processeur cellulaire automatisé

Résumé

Cet article détaille le processus de fabrication des lymphocytes T à récepteurs antigéniques chimériques à usage clinique, en particulier à l’aide d’un processeur cellulaire automatisé capable d’effectuer la transduction virale et la culture de lymphocytes T. Nous formulons des recommandations et décrivons les pièges à éviter qui doivent être pris en compte lors de l’élaboration du processus et de la mise en œuvre d’un essai clinique de phase précoce.

Résumé

Les cellules T à récepteurs antigéniques chimériques (CAR)-T représentent une approche immunothérapeutique prometteuse pour le traitement de diverses maladies malignes et non malignes. Les cellules CAR-T sont des cellules T génétiquement modifiées qui expriment une protéine chimérique qui reconnaît et se lie à une cible de surface cellulaire, entraînant la destruction de la cellule cible. Les méthodes traditionnelles de fabrication des cellules CAR-T sont à forte intensité de main-d’œuvre, coûteuses et peuvent comporter un risque de contamination. Le CliniMACS Prodigy, un processeur cellulaire automatisé, permet de fabriquer des produits de thérapie cellulaire à l’échelle clinique dans un système fermé, minimisant ainsi le risque de contamination. Le traitement s’effectue de manière semi-automatique sous le contrôle d’un ordinateur et minimise ainsi l’implication humaine dans le processus, ce qui permet de gagner du temps et de réduire la variabilité et les erreurs.

Ce manuscrit et cette vidéo décrivent le processus de transduction des cellules T (TCT) pour la fabrication de cellules CAR-T à l’aide de ce processeur. Le processus TCT implique l’enrichissement des lymphocytes T CD4+/CD8+, l’activation, la transduction avec un vecteur viral, l’expansion et la récolte. À l’aide de la matrice d’activité, une fonctionnalité qui permet d’ordonner et de chronométrer ces étapes, le processus TCT peut être largement personnalisé. Nous fournissons une présentation de la fabrication des cellules CAR-T conformément aux bonnes pratiques de fabrication (BPF) actuelles et discutons des tests de libération requis et des expériences précliniques qui soutiendront une demande de nouveau médicament expérimental (IND). Nous démontrons la faisabilité et discutons des avantages et des inconvénients de l’utilisation d’un processus semi-automatique pour la fabrication clinique de cellules CAR-T. Enfin, nous décrivons un essai clinique en cours initié par un chercheur qui cible les tumeurs malignes à cellules B pédiatriques [NCT05480449] comme un exemple de la façon dont ce processus de fabrication peut être appliqué dans un cadre clinique.

Introduction

Le transfert adoptif de lymphocytes T modifiés pour exprimer un récepteur antigénique chimérique (CAR) a montré une efficacité remarquable dans le traitement des patients atteints de tumeurs malignes à cellules B réfractaires 1,2,3,4,5. Cependant, les méthodes traditionnelles de fabrication des cellules CAR-T sont à forte intensité de main-d’œuvre, prennent beaucoup de temps et nécessitent des techniciens hautement qualifiés pour effectuer des étapes hautement spécialisées. Par exemple, le processus de fabr....

Protocole

Toutes les recherches ont été effectuées conformément aux directives de l’établissement avec l’approbation de l’Institutional Review Board (IRB) de l’hôpital, et tous les sujets ont donné leur consentement éclairé à la publication des données recueillies dans le cadre de l’essai.
REMARQUE : La première section du protocole donne un aperçu général du processus de fabrication des CAR-T. Les sections restantes fournissent les instructions étape par étape. Le protocole décrit le flux de travail à l’aide de la version 1.4 du logiciel TCT, qui est la version actuelle au moment de la rédaction de cet article. L’interface utilisateur des autres versions du logiciel TCT peu....

Discussion

La thérapie cellulaire CAR-T est apparue comme une approche thérapeutique prometteuse pour les cellules B et d’autres tumeurs malignes. Cependant, les méthodes traditionnelles de fabrication des cellules CAR-T présentent plusieurs limites, telles qu’un coût élevé, une production à forte intensité de main-d’œuvre et des étapes ouvertes qui augmentent le risque de contamination. Récemment, plusieurs plates-formes semi-automatisées, dont Miltenyi CliniMACS Prodigy (le « processeur »), ont vu le jour pou.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
12 x 75 borosilicate tubes	Charles River	TL1000
20 mL Reagent Bag	Miltenyi Biotec	170-076-631
50 mL Conical Tube	Fisher	05-539-10
150 mL Transfer Set	Fenwal	4R2001
2,000 mL Transfer Set	Fenwal	4R2041
7AAD	Fisher Scientific	BDB559925
Alcohol Prep	Tyco/Healthcare
Bag Access	Medline	2300E-0500
CD19 APC-Vio770 REAfinity	Miltenyi Biotec	130-113-643
CD19 CAR Detection Reagent Biotin	Miltenyi Biotec	130-129-550
CD19 PE	BD	555413
CD3 APC	BD	340440
CD4 VioBright FITC REAfinity	Miltenyi Biotec	130-113-229
CD45 VioBlue REAfinity	Miltenyi Biotec	130-110-637
CD8 APC-Vio770 REAfinity	Miltenyi Biotec	130-110-681
Cellometer Reference Beads 10um	Nexcelom	B10-02-020
Cellometer Reference Beads 15um	Nexcelom	B15-02-010
Cellometer Reference Beads 5um	Nexcelom	B05-02-050
Cellometer Slides	Nexcelom	CHT4-SD100-002
CliniMACS CD4 GMP MicroBeads	Miltenyi Biotec	276-01	The CD4 reagent
CliniMACS CD8 GMP MicroBeads	Miltenyi Biotec	275-01	The CD8 reagent
CliniMACS PBS/EDTA Buffer	Miltenyi Biotec	130-021-201	The buffer
DMSO	Origen	CP-10
Freezing Bag 50 mL	Miltenyi Biotec	200-074-400
Freezing Vial, 1.8 mL	Nunc	12565171N
Freezing Vial, 4.5 mL	Nunc	12565161N
Human AB serum	Valley Biomedical		Sterile filtered, heat inactivated
Human Serum Albumin 25%	Grifols	68516-5216-1
Human Serum Albumin 5%	Grifols	68516-5214-1
MACS GMP Recombinant Human IL-2	Miltenyi Biotec	170-076-148	The cytokines
MACS GMP T Cell TransAct	Miltenyi Biotec	200-076-202	The activation reagent
MycoSeq Mycoplasma Detection Kit	Life Technologies	4460623
Needles, Hypodermic 14G	Medline	SWD200573
Needles, SlideSafe 18G	BD	B-D305918
Pipet tips, 2-200 μL, individually wrapped	Eppendorf	022492209
Pipet tips, 50-1000 μL, individually wrapped	Eppendorf	022492225
Pipets 10 mL	Fisher	13-678-27F
Pipets 25 mL	Fisher	13-675-30
Pipets 5 mL	Fisher	13-678-27E
Plasmalyte-A	Baxter	2B2544X	The electrolyte solution
Prodigy TS520 Tubing Set	Miltenyi Biotec	170-076- 600	The tubing set
Sterile Field	Medline	NON21001
Streptavidin PE-Vio770	Miltenyi Biotec	130-106-793
Syringe 1 mL	BD	309628
Syringe 10 mL	BD	302995
Syringe 3 mL	BD	309657
Syringe 30 mL	BD	302832
Syringe 50 mL	BD	309653
TexMACS GMP Medium	Miltenyi Biotec	170-076-306	The medium
Triple Sampling Adapter	Miltenyi Biotec	170-076-609
Viral Vector	CHOP Clinical Vector Core		huCART19
Equipment
Biological Safety Cabinet	The Baker Co
Cellometer Auto 2000	Nexcelom
CliniMACS Prodigy	Miltenyi Biotec	200-075-301	The processor
Controlled Rate Freezer	Planer/Kryosave
Endosafe nexgen-PTS150K	Charles River
Mettler Balance	Mettler
Refrigerated Centrifuge	Thermo Fisher
Refrigerated Centrifuge	Fisher Sci
SCD Sterile Tubing Welder	Terumo
Sebra Tube Sealer	Sebra
Varitherm	Barkey		The dry thaw device
XN-330 Hematology Analyzer	Sysmex