Amélioration de la fiabilité des biobanques de tumeurs de la prostate grâce à une technique d’échantillonnage et une caractérisation histologique améliorées

Résumé

Ce protocole décrit une méthode pour faciliter le prélèvement d’échantillons de prostatectomie radicale. L’objectif est de cartographier, caractériser et micro-macro disséquer des échantillons de tissus à partir des échantillons sur la base de critères anatomopathologiques avant de les stocker dans une biobanque.

Résumé

L’acquisition d’échantillons de tissus tumoraux frais et bien caractérisés est essentielle pour mener des études « omiques » de haute qualité. Cependant, cela peut être particulièrement difficile dans le contexte du cancer de la prostate (CP) en raison de la nature unique de cet organe et de la grande hétérogénéité associée à cette tumeur. D’autre part, la caractérisation histopathologique des échantillons avant leur stockage sans provoquer d’altérations tissulaires importantes est également un défi intrigant. Dans ce contexte, nous présentons une nouvelle méthode d’acquisition, de cartographie, de caractérisation et de micro-dissection de tissu prostatique réséqué basée sur des critères anatomopathologiques.

Contrairement aux protocoles publiés précédemment, cette méthode réduit le temps nécessaire à l’analyse histopathologique de l’échantillon de prostate sans compromettre sa structure, ce qui est crucial pour l’évaluation des marges chirurgicales. De plus, il permet la délimitation et la micro-macro-dissection d’échantillons de tissus prostatiques frais, en mettant l’accent sur les zones tumorales histologiques définies par des critères pathologiques tels que le score de Gleason, les lésions précurseurs (néoplasie intra-épithéliale prostatique de haut grade - PIN) et les lésions inflammatoires (prostatite). Ces échantillons sont ensuite stockés dans une biobanque pour des analyses de recherche ultérieures.

Introduction

Le cancer de la prostate (CP) est le 2e^{cancer le plus} fréquent chez les hommes et la 5e cause de^{décès dans le} monde1. Le traitement et le pronostic du patient dépendent de la stadification et de la classification (score de Gleason) de la tumeur, comme en témoignent les taux de survie à 5 ans plus élevés des tumeurs localisées et de bas grade (grade de Gleason 6) (99%) par rapport aux grades de Gleason élevés et aux tumeurs métastatiques (31%)².

La rechute locale du PC et l’échec du traitement ont été liés à la forte hétérogénéité intratumorale génétique caractéristique de....

Protocole

Cette méthode a été développée grâce à des efforts de collaboration impliquant différents services cliniques (urologie, pathologie et biobanque de l’hôpital La Fe). L’étude a été menée dans le respect des directives institutionnelles, nationales et internationales en matière de bien-être humain, et a reçu l’approbation du Comité d’éthique de la recherche biomédicale de l’Instituto de Investigación Sanitaria Hospital Universitario y Politécnico La Fe (Valence, Espagne). Tous les échantillons ont été conservés à la biobanque de l’hôpital de La Fe (PT13/0010/0026). La procédure générale est détaillée à la figure 1.

Discussion

Dans toute étude de recherche, l’obtention d’échantillons de qualité est une condition essentielle pour réduire les biais systématiques et obtenir des résultats fiables²². Par conséquent, le contrôle des variables préanalytiques telles que la température à laquelle les échantillons sont traités et entreposés, le temps écoulé entre le prélèvement et l’entreposage des échantillons, l’utilisation de matériaux stérilisés ou les effets que l’ajout de conservateurs ou d?.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cadiere forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471049. 18 uses.
Conventional slides	Knittel Glass	2021	Ground/ Frosted end
Cryostat microtome	Thermo Fisher Scientific	---	Criostato CryoStar NX50
Cryotubes	Greiner Bio-One GmbH	Ref.: 122280.	CRYO S. PP, with screw cap, sterile.
Da Vinci surgical system	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	XI model
Dissection instruments	Bayer	---	Two tweezers and a surgical blade
DPX Eukitt	Medizin- und Labortechnik GmbH	6.00.01.0001.06.01.01
Eosin	Agilent	157252
Fenestrated bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471205. 14 lives.
Force bipolar	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471405. 12 uses.
Freezers	Thermo Scientific		MODEL 907. -80 ºC
Hematoxylin	Agilent	157251
Inmunohistochemistry Slides	Agilent-Dako	K802021-2
Large needle driver	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471006. 15 uses.
Maryland bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471172. 14 uses.
Microscope	Olympus	---	Olympus cx40
Microtome blades	PFM Medical	a35
Monopolar curved scissors	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 470179. 10 uses.
OCT compound	NEG-50	LOT.117340
PlusSpeed S Single-use Biopsy Device with beveled tip	Peter Pflugbeil GmbH	PSS-1825-S
ProGasp forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471093. 18 uses.
Sample holder Disc	Davidson Cryo Chuck. BradleyProducts		30 mm
Tissue ink	Pelikan	2021	Ink 4001 brilliant black (301168)
Xylol	Quimipur	Ref. 169