La combinaison d’une fraction vasculaire stromale isolée mécaniquement et d’un hydrogel de fibrine : un protocole de traitement

Résumé

La fraction vasculaire stromale (SVF) isolée mécaniquement associée à un hydrogel de fibrine offre un support facile et efficace pour des cellules stromales viables dérivées du tissu adipeux pour diverses indications, y compris l’ingénierie tissulaire et/ou la cicatrisation des plaies. Ici, nous présentons la préparation d’une construction mécanique d’hydrogel SVF (mSVF)-fibrine pour la recherche translationnelle et l’application clinique.

Résumé

Le potentiel de régénération des cellules stromales dérivées du tissu adipeux (ASC) a suscité une attention considérable dans la recherche régénérative et translationnelle. Dans le passé, l’extraction de ces cellules du tissu adipeux nécessitait un processus enzymatique en plusieurs étapes, ce qui aboutissait à un mélange cellulaire hétérogène composé de SCA et d’autres cellules, appelées conjointement fraction vasculaire stromale (SVF). Plus récemment, les protocoles d’isolation mécanique SVF (mSVF) prennent moins de temps et contournent les problèmes réglementaires. Nous avons récemment proposé un protocole qui génère des mSVF riches en cellules stromales en combinant émulsification et centrifugation. L’un des problèmes actuels dans l’application mSVF pour l’application de thérapie des plaies est l’absence d’un échafaudage offrant une protection contre les manipulations mécaniques et la dessiccation. Les hydrogels de fibrine se sont avérés être un complément utile dans le transfert cellulaire à des fins de cicatrisation des plaies dans le passé. Dans le présent travail, nous décrivons les étapes de préparation d’une construction d’hydrogel mSVF-fibrine en tant qu’approche novatrice pour la recherche translationnelle et l’application clinique.

Introduction

Au cours des dernières années, la chirurgie plastique régénérative est devenue un pilier supplémentaire de la chirurgie plastique¹. La chirurgie plastique régénérative vise à restaurer les tissus endommagés en transférant des facteurs solubles, des cellules et des tissus prélevés sur le patient pour favoriser la restauration des tissus de manière peu invasive². Les cellules souches dérivées du tissu adipeux (ASC) ont attiré l’attention en raison de leur capacité à se différencier en plusieurs lignées mésenchymateuses, ce qui en fait un candidat prometteur pour la re....

Protocole

Cette étude a été réalisée conformément à la Déclaration d’Helsinki. Tous les donneurs adultes ont fourni un consentement éclairé écrit pour permettre l’utilisation ultérieure des échantillons de tissus recueillis. Le protocole suit les lignes directrices du comité d’éthique de la recherche sur les êtres humains de notre établissement.

1. Prélèvement du tissu adipeux

1. Récoltez le tissu adipeux en effectuant une liposuccion standard dans une technique conventionnelle de récolte de graisse décrite dans les publications précédentes^26,27

Discussion

L’isolement mécanique de la FVS offre une alternative élégante à l’approche enzymatique traditionnelle et offre un large accès pour une application clinique²⁹. En fait, la mSVF, telle que proposée dans le présent manuscrit, est déjà utilisée en clinique pour le traitement des tissus mous des cicatrices ou en complément des procédures esthétiques³⁰. Le protocole présenté ici fournit une méthode simple pour une administrat.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
12-Wellplate	Sarstedt	83.3921
4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI)	Biochemica	A1001.0010
50 mL-Falcon	Falcon	352070
Absorbent Towels, Two Pack	Halyard	89701
Alamar blue 25 mL	Invitrogen	DAL1025
Albumin, Bovine (BSA)	VWR	0332-500G
Biotek Cytation 5	Agilent		Cell Imaging Multimode Microplate Reader
CaCl2	Sigma-Aldrich	C5670-500G
Cryostat	Microtome
DMEM with 4,5 g/L glucose,with L-Glutamine, with sodium pyruvate	VWR	392-0416
DPBS	Gibco	14190-144
Epinephrin	Sigma-Aldrich	E4250
Fetal Bovine Serum	Biowest	S181H-500
Fibrinogen Human Plasma 100 mg	Sigma-Aldrich	341576-100MG
Formalin	Fisher Scientific	SF100-4
Formalin 4%	Formafix	1308069
FSC 22-Einbettmedium, blau	Biosystems	3801481S
Hematoxylin & Eosin Solution	Sigma-Aldrich	H3136 / HT110132
Lactated Ringer’s Solution 1000 mL	B Braun	R5410-01
Mercedes Cannula 4mm	MicroAire	PAL-R404LL
NaCl 0.9%	Bbraun	570160
OCT Embedding Matrix 125 mL	CellPath	KMA-0100-00A
Paraformaldehyde	Fisher Scientific	10342243
PBS 1%	Sigma-Aldrich	P4474
PenStrep	Sigma-Aldrich	P4333-100ML
Petridish 150mm	Sarstedt	83.1803
Phalloidin-iFluor 488 Reagent	Abcam	ab176753
Sterile Syringe 20 mL Luer	HENKE-JECT	5200-000V0
Sterile Syringe 30 mL Luer-Lock	BD	10521
Thrombin from Human Plasma	Sigma-Aldrich	T6884-100UN
Tranexamic acid	Orpha Swiss	6837093
Tulipfilter 1.2	Lencion Surgical	ATLLLL
Tulipfilter 1.4	Lencion Surgical	ATLLLL