La technologie 2D-HPLC-MS combinée à un réseau moléculaire pour l’identification de composants dans le pendule de l’aconit de la médecine tibétaine

Résumé

Cette étude utilise la technologie bidimensionnelle de chromatographie liquide à haute performance couplée à la spectrométrie de masse (2D-HPLC-MS) en conjonction avec un réseau moléculaire pour démêler la composition chimique complexe de la plante médicinale tibétaine Aconitum pendulum Busch (APB). L’article fournit un protocole détaillé pour l’exploration et l’identification systématiques de composants chimiques complexes des plantes médicinales.

Résumé

Dans cette étude, une approche globale a été utilisée, utilisant la technologie 2D-HPLC-MS en conjonction avec le réseau moléculaire pour démêler la composition chimique complexe de la plante médicinale tibétaine APB. Grâce à la mise en œuvre de la 2D-HPLC, une séparation améliorée des mélanges complexes a été obtenue, permettant d’isoler des composés individuels pour une analyse ultérieure. L’approche du réseau moléculaire a également permis d’élucider les relations structurelles entre ces composés, contribuant ainsi à la détermination de molécules bioactives potentielles. Cette stratégie intégrée a permis d’identifier efficacement un large éventail de composants chimiques présents dans l’usine. Les résultats ont révélé un large éventail de constituants chimiques dans l’APB, y compris les alcaloïdes, entre autres. Cette recherche fait non seulement progresser la compréhension du profil phytochimique de cette médecine traditionnelle tibétaine, mais fournit également des informations précieuses sur ses propriétés thérapeutiques potentielles. L’intégration de la 2D-HPLC-MS et du réseau moléculaire s’avère être un outil puissant pour l’exploration et l’identification systématiques de compositions chimiques complexes dans les plantes médicinales, ouvrant la voie à de nouvelles recherches et développements dans le domaine de la découverte de produits naturels.

Introduction

La médecine tibétaine fait partie intégrante de la médecine traditionnelle chinoise, adhérant aux principes des pratiques médicales tibétaines, et est utilisée pour la prévention et le traitement des maladies¹. Cependant, la phytothérapie tibétaine contient des constituants chimiques végétaux complexes caractérisés par des fluctuations importantes de leur contenu. La compréhension limitée des éléments bioactifs fondamentaux est devenue un goulot d’étranglement dans la modernisation de la médecine tibétaine². L’application de la chromatographie liquide-spectrométrie de masse (LC-MS), combinant le fort pouvoir de séparatio....

Protocole

1. Préparation

1. Préparation des échantillons
   1. À l’aide d’une balance de sensibilité de 1/10 000, peser 0,25 g (poids sec) d’APB dans un tube de microcentrifugation de 3 mL, ajouter 2,5 mL de méthanol, puis sonicate pendant 30 min (puissance 240 W, fréquence 40 kHz).
   2. Effectuer une centrifugation à 1,2 x g pendant 5 min, recueillir le surnageant et filtrer à travers un filtre à membrane avec une taille de pores de 0,22 μm.
2. Préparation du matériel expérimental
   1. Préparez la phase mobile bidimensionnelle, utilisez de l’acétonitrile comme phase B organique et configurez de l’eau ultrapure à 0,1 ....

Discussion

L’objectif principal de cette expérience était l’optimisation d’une méthode partielle dans le cadre de la séparation bidimensionnelle en phase liquide. Pour y parvenir, un nouveau modulateur de dilution en colonne a été intégré de manière transparente dans le système de chromatographie liquide bidimensionnelle (2D-LC). Cet ajustement technique était d’une importance primordiale car il a considérablement amélioré la compétence dans le profilage des constituants chimiques présents dans la médecine .......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acetonitrile	Fisher chemical	F22M81203	Mobile phase
Aconitum pendulum	/	/	Herb medicine
Agilent 1290 Infinity (II) 2D-LC	Agilent Technologies	G2198-90001	Liquid chromatography
Disposable syringes	Chengdu Keen experimental equipment	/	1ml
EP tube	Chengdu Keen experimental equipment	/	3ml
Liquid phase injection bottle	Chengdu Keen experimental equipment	/	1.5ml
LTQ XL Mass Spectrometer	Thermo Fisher	LTQ21991	Mass Spectrometer
Microporous membranes	Chengdu Keen experimental equipment	/	0.22μm
Ultimate XB-C18,5 μm,2.1 x 200 mm	Welch	00201-31015	Reversed-phase column
Ultrasonic Cleaner	GT Sonic	UGT20DEC048Y	Ultrasonic Cleaner 240W 40KHz
XAmide,3 μm,100A	Dalian Mondi Technology	D2019110601	Hydrophilic column