Injection intracamérulaire chez le rat présentant un faible risque d’effets indésirables

Résumé

Ce protocole décrit une technique d’injection intracamérale chez le rat à l’aide d’une incision cornéenne centrale et d’un long tunnel dans la chambre antérieure. Cette méthode d’injection minimise le risque d’induire des lésions tissulaires par inadvertance et améliore ainsi la précision et la reproductibilité.

Résumé

L’injection intracamérale est une routine d’administration standard en ophtalmologie. L’application de l’injection intracamérulaire chez les rongeurs pour la recherche est difficile en raison des dimensions et de l’anatomie limites de l’œil, notamment le petit volume de l’humeur aqueuse, la courbure du cristallin et l’épaisseur du cristallin. Les dommages potentiels lors des injections intracamérulaires introduisent des effets indésirables et une variabilité expérimentale. Ce protocole décrit une procédure d’injection intracamérulaire chez le rat, permettant précision et reproductibilité.

Des rats Sprague-Dawley ont été utilisés comme modèles expérimentaux. Étant donné que la position de la lentille chez le rat fait saillie dans la chambre antérieure, l’injection à partir de la périphérie, comme chez l’homme, est défavorable. Par conséquent, une incision est créée dans la région cornéenne centrale à l’aide d’une lame aiguille de 0,8 mm de calibre 31 pour former un tunnel auto-scellant dans la chambre antérieure. Une incision à un angle proche du plat permet de créer un long tunnel, ce qui minimise la perte d’humeur aqueuse et la profondeur de la chambre antérieure. Une nano-aiguille de calibre 34 est insérée dans le tunnel pour l’injection. Cela permet une pénétration avec une résistance minimale au frottement et évite de toucher l’objectif. L’injection de trypan-blue permet de visualiser par microscopie à fente la présence du colorant dans la chambre antérieure et d’exclure les fuites. La biodisponibilité pour la couche endothéliale cornéenne est démontrée par l’injection d’un colorant Hoechst, qui a coloré les noyaux des cellules endothéliales cornéennes après l’injection.

En conclusion, ce protocole met en œuvre une procédure d’injection intracamérale précise chez le rat. Cette procédure peut être utilisée pour l’administration intracamérale de divers médicaments et composés dans des modèles expérimentaux de rats, augmentant ainsi l’efficacité et la reproductibilité de la recherche ophtalmique.

Introduction

La biodisponibilité des composés délivrés par administration topique à la surface de l’œil est considérablement limitée, généralement <5 %¹. Les composés administrés par les gouttes ophtalmiques sont principalement éliminés par drainage, larmoiement induit, renouvellement du liquide lacrymal et absorption conjonctivale. De plus, la perméation des composés à travers la surface oculaire est fortement limitée par la barrière cornée-conjonctive ^1,2,3. La cornée est composée de trois couches principales : l’épithélium le pl....

Protocole

Les expériences du protocole ont été approuvées par le Comité national des permis - pour la science animale et sont conformes à la déclaration de l’ARVO sur l’utilisation d’animaux dans la recherche ophtalmique et visuelle. Des rats Sprague-Dawley femelles, âgés de 8 à 10 semaines, ont été utilisés pour la présente étude et ont été exposés à des cycles lumière-obscurité de 12/12 h. Les animaux ont été obtenus d’une source commerciale (voir la Table des matières).

1. Préparation des animaux

1. Préparez un mélange anesthésique de kétamine (80 mg/kg de poids corporel da....

Discussion

Les modèles de recherche préclinique doivent fournir un environnement contrôlé et reproductible pour garantir la fiabilité et l’applicabilité des résultats. Dans la recherche en ophtalmologie, les modèles d’injection oculaire sont couramment utilisés dans divers aspects de la recherche, allant de l’établissement de modèles de maladies, à la mise à l’essai de nouveaux traitements et à l’évaluation des réactions tissulaires et des effets indésirables potentiels.<.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alizarin Red	Alpha Aesar	042040.5
Buprenorphine	Richter pharma	102047
Dexamethasone 0.1%	Fisher Pharmaceutical	393102-0413
Hamilton glass syringe 10 μL	Hamilton Co.	721711
Hoeschst	Merck	B2261
Ketamine	Bremer pharma GMBH (medimarket)	17889
Ofloxacin 0.3% eye drops	Allergan	E92170
Oxybuprocaine Hydrochloride 0.4%	Fisher Pharmaceutical	N/A
Pentobarbital sodium 200 mg/mL	CTS	N/A
Slit microscope	Haag-streit bern	b-90019115
Sprague-Dawley Rats	Envigo	N/A
Stiletto blade 31 G 0.8 mm	Tecfen medical (skymed)	QKN2808
Surgical microscope	Zeiss	OPMI-6 CFC
Trypan Blue	Sartorius	03-102-1B
Xylazine	Eurovet Animal Health	615648