Prélèvement sanguin séquentiel de la veine cave inférieure suivi d’une veine porte pour évaluer les métabolites microbiens intestinaux chez la souris

Résumé

Le protocole démontre une méthode permettant de prélever séquentiellement du sang des veines portes et de la veine cave inférieure de souris afin d’évaluer la production et l’absorption des métabolites microbiens intestinaux.

Résumé

Les produits microbiens intestinaux sont connus pour agir à la fois localement dans l’intestin et être absorbés dans la circulation, où leurs effets peuvent s’étendre à de nombreux systèmes d’organes distants. Les acides gras à chaîne courte (AGCC) sont une classe de métabolites produits par les microbes intestinaux lors de la fermentation des fibres alimentaires non digestibles. Ils sont maintenant reconnus comme des contributeurs importants à la façon dont le microbiome intestinal influence les systèmes d’organes extra-intestinaux via l’intestin-poumon, l’intestin-cerveau et d’autres axes intestinaux de l’hôte. Les AGCC sont absorbés du côlon, à travers le tissu intestinal, dans la veine porte (PV). Ils passent ensuite par le foie et sont consommés dans divers organes tels que le cerveau, les muscles, le tissu adipeux et les poumons. Les AGCC sont plus facilement mesurés dans les matières fécales expulsées, mais des mesures plus précises ont été obtenues à partir du contenu fécal intra-colique. Ici, nous proposons que l’échantillonnage du PV et du plasma circulant systémique d’un seul sujet puisse être préférable pour étudier l’absorption, le transport et les niveaux systémiques des AGCC chez la souris. Nous présentons une nouvelle technique de prélèvement sanguin efficace à partir de la PV et de la veine cave inférieure (IVC) qui permet de collecter des volumes relativement importants de sang à partir des circulations portale et systémique. Ceci est accompli en ligaturant le PV, permettant ainsi la dilatation ou l’élargissement du PV lorsqu’il se remplit à partir des veines mésentériques qui s’y écoulent. En utilisant cette méthode, nous avons pu améliorer le taux de réussite du prélèvement ainsi que la quantité totale de sang collectée (jusqu’à 0,3 mL de VCI et 0,5 mL de PV).

Introduction

Les acides gras à chaîne courte (AGCC) sont une classe majeure de métabolites produits par le microbiote intestinal. Leurs rôles critiques dans l’interaction entre le microbiome intestinal et d’autres organes distants¹ ont été soutenus par des recherches décrivant comment ils modulent l’inflammation, signalent par le biais de récepteurs dédiés et servent de substrats dans le métabolisme cellulaire ^2,3,4,5. Des travaux récents de notre groupe ont suggéré que les AGCC sont des régulateu....

Protocole

Toutes les étapes de cette procédure de non-survie ont été approuvées par l’Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) de l’Université de Californie à San Francisco. Le sexe et la souche de souris utilisés étaient des souris C57BL/6J mâles (pesant de 25 à 35 g et âgées de 12 à 15 semaines). Des souches de souris femelles et/ou d’autres souches de souris standard peuvent également être utilisées.

1. Anesthésie

1. Essuyez la moitié inférieure de l’abdomen de la souris avec des cotons-tiges à 70 % d’éthanol. Administrer l’anesthésie en administrant une injection intrapéritonéal....

Discussion

Cet article décrit une méthode in vivo innovante pour la collecte quasi simultanée d’échantillons de sang séquentiellement à partir de l’IVC et du PV chez la même souris expérimentale. Cette méthode est utile pour mesurer les niveaux de produits générés par le microbiote intestinal, tels que les AGCC, qui transitent par la circulation portale. Le volume maximal moyen de sang pouvant être prélevé lors d’une procédure terminale chez la souris (pesant de 25 à.......

matériels

Name	Company	Catalog Number	Comments
2,2,2 Tribromoethanol, 97% (Avertin)	Sigma Aldrich	T48402-25G	Anesthetic agent
Buprenorphine Hydrochloride Injection 0.3 mg/mL	PAR Pharmaceutical	NDC 42023-179-05	Analgesic agent
Dressing Forceps	Miltex	6-100	Dissection
Graefe Forceps	Roboz	RS-5136	Dissection
Hepatin sodium 1000 USP units/mL	Hikma	NDC 0641-0391-12	Blood sample syringes/tubes heparinization
Prolene 7-0	Ethicon	8696G	Portal vein ligature
Scissors	F.S.T	14058-11	Dissection
Student Halsted-Mosquito Hemostats	F.S.T	91308-12	Dissection
Surgical tape	3M Transpore	1527-1	Mouse limbs fixation
U-100 Insulin Syringe 28G1/2	EXEL	26027	Blood sample collection