Pour commencer, injectez un analgésique préventif dans une souris anesthésiée. À l’aide d’une tondeuse, rasez la tête de la souris. Installez l’animal sur une table stéréotaxique et positionnez correctement les barres d’oreille.
Fixez la bouche de la souris à la souris et positionnez soigneusement la langue à l’extérieur pour éviter la suffocation. Après avoir vérifié la profondeur de l’anesthésie, placez le support d’élévation sous l’animal pour vous assurer que le corps et la tête restent à niveau horizontal. Et utilisez un tampon chaud avec du papier pour maintenir la température de l’animal.
Appliquez une pommade sur les deux yeux pour prévenir la sécheresse. Ensuite, à l’aide d’iode et d’alcool, désinfectez la tête de la souris. Utilisez un scalpel pour faire une incision le long de la ligne médiane de la tête avec la coupure s’étendant de derrière les yeux pour poster la suture lambda.
Exposez le crâne et écouvillonnez-le avec un coton-tige stérile saturé d’une solution de chlorure de sodium 0,9. Au stéréomicroscope, identifiez la veine rhinale rostrale ou RRV et utilisez un crayon stérile pour la marquer. En utilisant une aiguille stérile comme référence, confirmez l’orientation du cerveau.
Assurez-vous qu’il n’y a pas de changement dans les coordonnées DV et ML. Ensuite, positionner une pipette en verre stérile contenant la solution virale sur la référence RRV pour zéro référence antéropostérieure. Avancez la pipette le long de la suture sagittale jusqu’à atteindre la coordonnée antéropostérieure choisie.
Marquez cet endroit avec un crayon stérile et soulevez l’aiguille. Percez soigneusement un petit cercle autour de la position marquée pour éviter de casser le sinus sagittal supérieur et retirez le morceau du crâne avec une petite pince. Ensuite, en utilisant la médiane supérieure du sinus sagittal comme référence médiolatérale, déplacez la pipette dans la position et abaissez-la jusqu’à ce qu’elle touche la dure-mère comme référence dorso-ventrale.
Créez une légère rupture dans la dure-mère et abaissez la pipette dans la position dorso-ventrale préférée. Injecter la quantité spécifiée de virus adéno-associés ou de vecteurs AAV dans le cerveau et retirer la pipette. Libérez la souris des barres d’oreille, puis fermez la peau à l’aide de clips chirurgicaux.
Transférer l’animal dans une cage chauffée séparée pour récupérer. Gardez un œil sur la récupération de la souris. Une fois qu’il a repris conscience, remettez-le dans son enclos d’origine lorsqu’il est complètement rétabli.
