Commencez par configurer le système de pompe pour les pinces hypoglycémiques ou hyperglycémiques. Pour ce faire, remplissez deux seringues Hamilton avec la perfusion d’insuline et la solution de glucose à 30 %. Connectez les seringues remplies aux deux longs tubes de la configuration du tube d’extension destinés à la perfusion de glucose et d’insuline.
Après avoir fixé l’ensemble seringue aux pousse-seringues respectifs, versez chaque solution dans les tubes d’extension respectifs. Ensuite, remplissez de solution saline dans la seringue d’un millilitre et le tube d’extension pour prélever le sang de l’artère. Ensuite, connectez le tube d’extension pour perfusion au cathéter de la veine jugulaire préinstallé de la souris correctement anesthésiée.
Le tube d’extension pour aspirer le sang au cathéter de l’artère carotide de l’animal. Utilisez du ruban de cellophane pour fixer les tubes ensemble. Placez la souris avec les tubes dans un bécher vide de 500 millilitres avec litière.
Clamp l’extrémité supérieure du tube d’extension pour prélever du sang tout en le connectant à une nouvelle seringue. Extrayez 50 microlitres de sang, transférez-le dans un tube de 1,5 millilitre et mesurez la glycémie. Infusez ensuite 50 microlitres de solution saline.
Pour prélever du sang pour les mesures hormonales, extrayez 50 microlitres de sang supplémentaires et transférez-les dans un tube de 1,5 millilitre sur de la glace. Après la mesure de la glycémie de zéro minute, démarrez la pompe à seringue à insuline pour perfuser la quantité appropriée d’insuline. Continuez à mesurer la glycémie et modifiez le débit de perfusion de glucose toutes les 5 à 10 minutes pendant la période de surveillance de 120 minutes jusqu’à ce qu’un état d’équilibre soit atteint.
Pour le clamp hyperglycémique, suivez les étapes décrites pour le clamp hypoglycémique, à l’exception de la perfusion d’insuline et d’une glycémie ajustée à l’état d’équilibre.
