Pour commencer à déparaffiner des sections de paraffine précédemment préparées du patch de Peyer isolées à partir d’une souris modèle d’immunoglobuline A ou de neuropathie IgA, immergez chaque section séquentiellement dans des gradients de xylène et d’éthanol pendant cinq minutes. Ensuite, rincez la section à l’eau distillée. Pour la récupération de l’antigène, chauffer la solution de citrate de sodium pendant deux minutes dans un autoclave.
Ensuite, placez la tranche de tissu dans la solution et chauffez-la à haute température pendant cinq minutes. Une fois refroidie, incubez la section dans une solution de peroxyde d’hydrogène à 3 % pendant 15 minutes à température ambiante à l’abri de la lumière. Ensuite, appliquez uniformément du sérum de chèvre à 10 % sur la section du tissu et incubez pendant 30 minutes à température ambiante pour bloquer la section.
Après avoir secoué la solution de blocage, appliquez une quantité appropriée de l’anticorps primaire préparé dans chaque section. Incuber les sections posées à plat dans une boîte humide pendant la nuit à quatre degrés Celsius. Le lendemain, couvrez le tissu avec une goutte de l’anticorps secondaire marqué HRP et incubez-le à température ambiante pendant 50 minutes.
Ensuite, appliquez une solution chromogène DAB fraîchement préparée sur chaque section et attendez le développement de la couleur. Recolorez la section avec de l’hématoxyline pendant environ une minute. Rincez ensuite les sections pendant 10 minutes à l’eau du robinet jusqu’à ce qu’elles reprennent une couleur bleue.
Pour la déshydratation, placez chaque section séquentiellement en gradients d’éthanol et de xylène pendant cinq minutes chacune. Une fois que toutes les sections sont légèrement séchées, scellez chaque section avec de la gomme neutre. Les résultats immunohistochimiques ont montré que l’expression des marqueurs de cellules B CD20 et CXCR5 était significativement plus élevée dans le groupe modèle de neuropathie IgA, par rapport au groupe témoin.
Cependant, la dioscine pourrait inhiber l’expression des marqueurs moléculaires.
