Pour commencer, remplissez une seringue d’un millilitre avec 500 microlitres de phase continue. Fixez le microtube en PTFE à une aiguille de calibre 27 de 0,75 pouce. Montez l’ensemble sur la seringue puis sur le pousse-seringue.
Ensuite, percez un trou à l’aide d’un poinçon de biopsie de 0,75 millimètre au milieu d’une découpe PDMS. Tirez environ trois centimètres de tube en PTFE à travers le trou de la découpe et poussez l’ensemble dans le haut d’une pointe de pipette de 200 microlitres. Scellez le connecteur avec de la colle durcissable aux UV sur le dessus de la pipette et fixez l’autre côté du tube à une aiguille de calibre 23 de 1,25 pouce.
Ensuite, remplissez deux seringues d’un millilitre avec 500 microlitres d’huile minérale légère. Fixez deux aiguilles de calibre 23 avec les embouts sur mesure et montez-les sur le pousse-seringue. À l’aide du logiciel de contrôle de la pompe à seringue, aspirez la solution de nanoparticules et de cellules fonctionnalisées dans l’extrémité de la pipette des phases aqueuses.
Après avoir nettoyé la chambre d’observation préparée, fixez la chambre dans le support de chambre imprimé équipé de deux aimants en néodyme à 30 degrés. Maintenant, ouvrez les deux ports et branchez une serviette en papier dans l’orifice supérieur pour absorber l’excès de phase extérieure pendant le remplissage. Connectez la phase continue à l’entrée supérieure de la puce microfluidique.
Ensuite, rincez la puce avec la phase continue pendant environ 30 secondes à un débit de 1800 microlitres par heure. Fixez les pointes de pipette des solutions aqueuses aux deux entrées centrales de la puce. Démarrer l’écoulement de la solution aqueuse à 200 microlitres par heure pour chaque solution.
Une fois que le liquide apparaît à la sortie, commencez le flux de phase d’huile fluorée à 800 microlitres par heure. Attendez que la production stable de gouttelettes soit établie, indiquée par une solution grise homogène et brillante à la sortie. Connectez ensuite le microtube en PTFE à l’orifice de sortie pour collecter les gouttelettes.
À l’aide du module de virole d’un raccord monobloc étanche à la main, dirigez-les vers une chambre d’observation. Une fois la chambre remplie, arrêtez l’écoulement et fermez les orifices avec des bouchons d’orifice en exerçant une pression serrée à la main. Après la production de gouttelettes, rincez la puce avec de l’huile fluorée, suivie d’azote, pour souffler tout liquide restant.
Montez le support de chambre sur le microscope à l’aide d’une platine de format de plaque à puits. Ensuite, à l’aide de l’objectif 10x, basculez le microscope sur le canal fond clair. Concentrez-vous sur les gouttelettes immobilisées dans le fond clair et déplacez-vous vers le centre de la chambre.
Ensuite, activez le système de mise au point automatique. Ajustez le plan de mesure sur le canal en fond clair de sorte que les bords des gouttelettes apparaissent sous la forme de cercles noirs nets facilement distinguables de la phase d’huile et de l’arrière-plan. Parcourez chacun des canaux de fluorescence, en définissant le plan de mesure optimal pour eux.
Pour les mesures de relocalisation, concentrez-vous sur l’agrégat de nanoparticules dans les canaux FITC, TRITC et Cyanine5.
