Culture in vitro et expansion des cellules tumorales circulantes du liquide céphalo-rachidien (LCR) pour l’étude de la maladie leptoméningée

Pour commencer, faites tourner les cultures décongelées de CTC-LCR cryoconservés à 257 G pendant cinq minutes à quatre degrés Celsius. Aspirez le surnageant à l’aide de la pipette. Ajoutez un millilitre de PBS pour laver la pastille de cellule.

Aspirez à nouveau le surnageant. Ensuite, remettez en suspension les cellules dans 450 microlitres de milieu conditionné HMC dans trois puits séparés d’une plaque de 96 puits. Pipeter 150 microlitres de suspension cellulaire dans trois puits différents d’une plaque de 96 puits.

Complétez le support conditionné HMC avec un support frais tous les trois jours. Lorsque la culture cellulaire atteint 90 % de confluence, transférez les cellules trypsinisées d’un puits dans un puits vide dans une plaque de 24 puits. Au cours de la culture continue des cellules tumorales, sélectionnez les clones des cellules qui se transforment et se développent de manière exponentielle pour une expérimentation plus approfondie.