Pour commencer, placez une souris intubée avec une thoracotomie ouverte sur une plaque de base de la chambre d’imagerie avec le thorax gauche ouvert vers le haut. Avec du ruban de soie, fixez la souris sur son visage, ses pattes avant et sa queue. Appliquez de la colle sur la face inférieure de la vitre de protection fixée à la plaque supérieure.
Ensuite, abaissez la plaque supérieure jusqu’à ce que le verre de couverture entre en contact avec le poumon, permettant à la colle de toucher la surface du poumon. Tenez le verre de protection contre le poumon. Gonflez le poumon pendant une à deux secondes, de sorte que la zone de colle adhère aux tissus environnants.
Placez un écrou à oreilles sur chaque boulon et fixez la plaque supérieure. Pour l’imagerie à deux photons, placez l’ensemble de la chambre d’imagerie avec la souris sur une platine de microscope. Utilisez des filtres dichroïques pour séparer les signaux du rapporteur GFP, les points Q et le collagène génèrent le signal SHG.
Ensuite, réglez un laser à impulsions femtosecondes en saphir de titane sur une longueur d’onde d’excitation de 890 nanomètres à la puissance la plus basse possible. Appliquez un millilitre d’eau sur le verre de protection de la plaque supérieure. Abaissez maintenant l’objectif d’immersion dans l’eau et concentrez-vous sur la surface du poumon.
Allumez le chauffage de la plaque de base en maintenant la température entre 35 et 37 degrés Celsius. Acquérez des piles d’images à l’aide du logiciel d’acquisition de votre choix. 24 heures après la greffe, il y avait plus de neutrophiles dans les poumons que deux heures après la greffe.
