Pour commencer, à l’aide d’une paire de ciseaux et d’une pince émoussée, soulevez et coupez la peau d’une souris anesthésiée sur la veine jugulaire droite. Découpez une fenêtre ronde dans la peau suffisamment grande pour exposer la veine jugulaire et une partie des tissus environnants. Repoussez doucement le tissu adipeux, les ganglions lymphatiques et le tissu conjonctif à l’aide de la technique de dissection émoussée.
Ensuite, remplissez une seringue de 20 millilitres avec une solution saline normale réchauffée à 37 degrés Celsius. Chargez la seringue dans la pompe à perfusion de la seringue. Fixez ensuite une aiguille papillon de calibre 27 et le tube associé à la seringue.
Réglez le pousse-seringue à un débit de 0,5 millilitre par minute pour éliminer le sang de la veine ou de l’artère perforée. Placez le jet de solution saline à quelques millilitres sur le côté du site de ponction et non directement au-dessus. Une fois la veine jugulaire nettoyée, démarrez la minuterie.
Procurez-vous des aiguilles hypodermiques de calibre 30 et 33 pour la veine jugulaire et l’artère fémorale respectivement. Tournez le biseau vers le haut. Positionnez ensuite l’aiguille à un angle de 25 degrés sur la veine jugulaire ou l’artère fémorale.
Après avoir noté l’heure, percez rapidement le haut du récipient. Notez le temps nécessaire pour que le saignement s’arrête complètement. Attendez la formation d’un thrombus avant de commencer la fixation de perfusion.
Une fois la perfusion terminée, disséquez la partie de la veine jugulaire avec le site de ponction et le thrombus. À l’aide d’une paire de ciseaux bien aiguisés, faites une coupe diagonale à l’extrémité distale du segment vasculaire et faites une coupe droite à l’extrémité proximale du segment vasculaire. Ensuite, placez le tissu fixé à quatre degrés Celsius pendant 24 heures.
Le lendemain, versez la solution tampon de cacodylate de sodium dans une boîte de culture de 35 millimètres contenant un tapis en silicone de cinq millimètres d’épaisseur. Transférez soigneusement le tissu dans le tampon, en vous assurant qu’il est immergé dans le tampon. À l’aide de goupilles minutien en acier inoxydable et d’une paire de pinces fines, épinglez soigneusement chaque extrémité du récipient au tapis.
Nettoyez soigneusement la veine jugulaire. À l’aide d’une paire de micro-ciseaux, coupez la paroi du récipient en face du site de ponction dans le sens de la longueur. Ouvrez doucement le récipient, puis épinglez-le sur le tapis de silicone avec le côté intraluminal vers le haut.
Retirez la solution tampon de la boîte. Ajoutez ensuite 1% de paraformaldéhyde pour immerger le récipient. Placez immédiatement le couvercle sur le plat pour éviter qu’il ne se dessèche.
