Électroporation des muscles squelettiques in vivo du releveur de l’Auris Longus pour étudier la régénération de la NMJ chez la souris

Pour commencer, assurez-vous que tous les outils de dissection et l’espace de travail ont été autoclavés et sont propres. Placez une souris CF-1 anesthésiée sur la table d’opération. À l’aide d’une seringue Hamilton, injectez par voie sous-cutanée 20 microlitres de hyaluronidase de 2 milligrammes par millilitre dans du PBS.

Pesez la souris pour déterminer la dose approximative de méloxicam et placez l’animal dans une cage vide pour une récupération de 30 minutes. Après avoir anesthésié à nouveau la souris, faites une incision de 8 millimètres sur la suture sagittale du crâne. À l’aide de ciseaux et de pinces, retirez délicatement la graisse et le tissu conjonctif sous la peau pour exposer le muscle releveur de l’auris long ou le muscle LAL.

À l’aide d’une seringue Hamilton, injectez 10 microlitres d’ADN d’origine commerciale dans le fascia du muscle. Positionnez deux électrodes à aiguille dorée à 5 millimètres l’une de l’autre en alignement parallèle sur les fibres musculaires, couvrant toute la longueur du muscle LAL. Maintenant, utilisez un électro-opérateur pour appliquer cinq impulsions électriques à 100 volts par centimètre pendant 20 millisecondes chacune avec une fréquence de 1 hertz.

L’examen microscopique a montré qu’une forte proportion de fibres musculaires de la partie rostrale LAL étaient positives pour l’expression de la tomate dimère en tandem, confirmant l’efficacité du transfert de gènes des muscles LAL médié par électroporation in vivo.