Pour commencer, centrifugez les tubes contenant du sang coagulé à 626 à 1,409 G pendant 20 minutes à deux à huit degrés Celsius. Ensuite, recueillez soigneusement le surnageant dans un nouveau tube. Stockez le surnageant à moins 80 degrés Celsius.
Ensuite, configurez l’étalon vierge et les puits d’échantillonnage. Pipette 50 microlitres d’étalons dilués dans la plaque ELISA. Transférez ensuite 40 microlitres d’échantillons dilués dans les puits d’échantillons.
Ajoutez 10 microlitres de sérum dans les puits d’échantillons. Maintenant, scellez la plaque avec un film d’étanchéité. Placez la plaque scellée dans un incubateur à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes.
Diluez la solution de lavage concentrée 30 fois avec de l’eau distillée pour obtenir une solution de lavage à concentration unique. Ensuite, retirez le film d’étanchéité de la plaque et jetez le liquide. Maintenant, remplissez chaque puits avec 200 microlitres de solution de lavage cinq fois.
Après avoir jeté le surnageant pour la dernière fois, tapotez la plaque pour la sécher. Pipeter 50 microlitres du réactif enzymatique dans tous les puits autres que les puits à blanc. Scellez ensuite la plaque avec un film d’étanchéité avant de la placer dans un incubateur à 37 degrés Celsius pendant 30 minutes.
Après avoir lavé la plaque cinq fois de plus, ajoutez 50 microlitres de chacun des révélateurs de couleur, A et B.Secouez doucement la plaque pour bien mélanger. Ensuite, incubez la plaque à 37 degrés Celsius à basse lumière pendant 10 minutes. Maintenant, pipetez 50 microlitres de la solution d’arrêt dans chaque puits pour terminer la réaction.
Mesurez l’absorbance de chaque puits séquentiellement à 450 nanomètres. La concentration plasmatique d’homocystéine dans le groupe méthionine était deux fois plus élevée que dans le groupe témoin. Les concentrations plasmatiques d’homocystéine étaient relativement plus faibles dans les groupes traités.
