Pour commencer, mélangez les composants A et B du polydiméthylsiloxane, ou PDMS, dans un rapport de 10 pour un. Après avoir bien remué le mélange, versez le mélange dans un moule maître. Placez le moule PDMS sous une pression d’une livre par pouce carré pendant 15 minutes pour éliminer les bulles d’air.
Faites durcir le moule PDMS à 60 degrés Celsius pendant deux heures. Démouler pour obtenir le moule de production de la micro-aiguille. Ensuite, nettoyez le moule de production avec de l’eau ultra pure avant utilisation.
Quantifier la teneur en protéines de la solution d’exosomes préparée à l’aide d’un kit de dosage BCA. Ajoutez une quantité appropriée de DPBS à la solution d’exosome. Maintenant, préparez une solution de 200 milligrammes par millilitre de tréhalose en utilisant le DPBS comme solvant.
Remuer pendant 20 minutes pour assurer une dissolution complète. Ensuite, préparez une solution d’acide hyaluronique et de polyvinylpyrrolidone, ou PVP, en utilisant respectivement du DPBS et de l’éthanol comme solvant. Remuer toute la nuit pour assurer une dissolution complète.
Mélangez la solution d’exosome et la solution de tréhalose dans un rapport égal. Ajoutez un volume égal de solution d’acide hyaluronique et mélangez soigneusement pour obtenir la solution d’extrémité. À l’aide d’un nettoyant plasma, traitez la surface du moule PDMS pendant 30 secondes à faible grade pour améliorer son hydrophilie.
Ajoutez 40 microlitres de solution de pointe dans le moule PDMS. Centrifugez à 3 000 G pendant trois minutes à température ambiante pour vous assurer que le liquide remplit la couche d’aiguille du moule. Retirez l’excès de liquide du moule et séchez à température ambiante dans une étuve de séchage sous vide pendant une journée.
Ensuite, ajoutez 200 microlitres de solution PVP dans le moule PDMS. Centrifugez à 3 000 G pendant trois minutes à température ambiante pour vous assurer que le liquide remplit la couche de support du moule. Après avoir séché le moule pendant une journée, démoulez pour obtenir le patch de la micro-aiguille chargée d’exosomes.