Pour commencer, insérez la queue de la souris dans l’ouverture supérieure du tube de retenue. Tirez lentement la souris dans le tube et placez la fiche devant la souris pour l’empêcher de s’échapper. Pour fabriquer un manchon de contention pour une souris plus petite, coupez à l’extrémité du nez du cône pour vous assurer que le nez de la souris n’est pas obstrué et qu’elle a suffisamment d’espace pour respirer.
Coupez ensuite l’arrière du cône de la longueur de la souris. Placez la souris dans le tube de retenue comme décrit précédemment. Tout en tenant la queue de la souris, laissez la souris marcher dans le cône.
Faites glisser le cône de retenue dans le tube. Assurez-vous que la queue de la souris est complètement à l’extérieur de l’arrière du tube et que la souris a de la place pour respirer à l’intérieur du cône. Fixez le bouchon du tube immédiatement devant l’ouverture du nez du cône.
Remplissez le tube conique de 15 millilitres avec de l’eau tiède. Placez le tube de retenue avec la souris à l’intérieur sur la plate-forme surélevée. Trempez la queue de la souris dans de l’eau tiède pendant au moins une minute jusqu’à ce que les veines latérales soient clairement dilatées et visibles.
Placez le virus adéno-associé non bouché, ou AAV, contenant un microtube à centrifuger de 1,7 millilitre dans le support de tubes. Avec la main dominante, insérez l’aiguille verticalement dans le tube. Une fois que l’aiguille est à l’intérieur du tube, tenez le tube avec la main non dominante.
Ensuite, soulevez simultanément le tube et la seringue au niveau de l’œil, tout en veillant à ce que l’aiguille ne touche pas la paroi du tube. Posez les deux bras sur la table et tirez lentement la dose dans la seringue. Expulsez les bulles d’air de la seringue au-dessus d’un tampon absorbant jetable.
Maintenez l’injecteur pendant 40 secondes pour le réchauffer. Après vous être assuré que les veines de la queue sont clairement visibles, retirez le dispositif de retenue du tube de la plate-forme surélevée et placez-le directement sur la table. Positionnez la souris dans la contention avec ses pieds vers le bas pour faciliter la manipulation de la queue.
Essuyez rapidement la queue avec de la gaze pour la sécher. Essuyez ensuite la queue avec un tampon imbibé d’alcool et séchez-la à nouveau avec de la gaze sèche. Faites pivoter la queue d’environ 90 degrés vers la gauche ou la droite de sorte que l’une des deux nervures latérales soit tournée vers le haut.
Localisez un site d’injection approprié dans le tiers médian de la queue. Tenez la queue avec la main non dominante à l’aide du pouce et de l’index immédiatement distaux du site d’injection. Repliez la queue sur l’index de manière à ce que le site d’injection repose à plat sur l’index.
Tirez ensuite sur la queue pour l’étirer et le site d’injection est complètement horizontal. Tenez la seringue à l’aide de l’index et du majeur de la main dominante de chaque côté de la bride du corps de la seringue tout en gardant le pouce prêt au niveau du piston. Posez les deux mains sur la table et placez l’aiguille directement sur et parallèlement à la queue et à la veine avec le biseau vers le haut.
Appliquez maintenant une pression vers le bas sur l’aiguille et faites-la glisser vers l’avant dans la veine pour injecter la solution AAV dans la veine. Après avoir administré la dose, retirez lentement l’aiguille et appliquez immédiatement une pression avec de la gaze au site d’injection pendant au moins 10 secondes jusqu’à ce que le saignement cesse. L’imagerie histologique de la protéine rapporteure fluorescente après l’injection a montré que tdTomato était exprimé de manière diffuse dans tout le foie et les quadriceps, indiquant que l’AAV9 atteignait et transduisait largement différentes régions des deux tissus.
