Commencez par préparer un stock d’infection à Pseudomonas aeruginosa d’unités formant des colonies connues par millilitre avant l’infection. Pour granuler le bouillon d’infection, centrifugez-le à 10 000 x g pendant cinq minutes à température ambiante. Remettez la pastille en suspension dans le PBS.
Ensuite, préparez trois tubes microfuges d’un millilitre contenant soit de l’eau distillée stérile, soit de l’éthanol, soit du PBS stérile. Inspectez une seringue Hamilton stérile de 100 microlitres, en vous assurant que la pointe de l’aiguille est tranchante et qu’elle n’a pas développé de crochet qui pourrait causer un traumatisme important au site de l’infection. Lavez maintenant la seringue séquentiellement avec de l’eau distillée, de l’éthanol et du PBS avant les infections, en prélevant et en jetant la capacité maximale.
Ensuite, vortex l’inoculum d’infection remis en suspension et aspirez un maximum de 100 microlitres dans la seringue Hamilton, suffisant pour injecter 10 microlitres par larve. Ensuite, injectez à chaque larve de Galleria mellonella 10 microlitres d’inoculum dans la patte arrière droite. Incuber les larves infectées entre 20 et 42 degrés Celsius, ce qui est une fourchette appropriée pour la survie de Galleria mellonella.
Préparer une large gamme de doses dépassant la gamme thérapeutique attendue de l’agent antimicrobien en s’appuyant sur des données de toxicité in vitro. Injectez des Galleria mellonella sains et stériles dans des groupes de tailles appropriées avec les différentes concentrations de véhicules antimicrobiens et PBS. Afin d’optimiser le traitement de l’infection bactérienne chez Galleria mellonella, préparez une gamme appropriée de doses d’agent antimicrobien sur la base d’essais de toxicité préliminaires.
Infecter des groupes de larves avec des bactéries comme décrit précédemment deux heures après l’infection. Traitez les larves avec l’agent antimicrobien préparé ou la solution de contrôle du véhicule. Surveiller la survie de Galleria mellonella à des intervalles de 30 minutes ou plus fréquemment à partir du moment où la mortalité est habituellement observée pour la première fois.
Retirez toutes les larves mortes et notez l’heure de leur mort. Pour comparer l’impact du moment du traitement sur la mortalité, traitez les larves 2, 4, 6, 9 ou 12 heures après l’infection et surveillez leur survie à 30 minutes d’intervalle. La dose efficace de tobramycine variait selon la souche.
Cinq milligrammes par kilogramme étaient optimaux pour le PAO1 et le PA14.2.5 milligrammes par kilogramme pour le PAK et 10 milligrammes par kilogramme pour le mucoïde IST27. Aucune dose n’a été efficace pour LESB58. Le traitement avec cinq milligrammes par kilogramme de tobramycine deux, quatre et six heures après l’infection a entraîné une survie de plus de 50 % des larves de Galleria mellonella infectées par Plasmodium aeruginosa.
