Isolement et traitement de rétines entières pour l’immunomarquage de cellules ganglionnaires rétiniennes de souris

Après avoir euthanasié la souris à l’aide d’une luxation cervicale pour l’énucléation et le traitement du globe oculaire, marquez le bord de la cornée sur la face dorsale du globe oculaire à l’aide d’un marqueur bleu pour assurer l’orientation pendant la dissection. À l’aide de ciseaux, retirez les tissus musculaires résiduels attachés au globe oculaire. Transférez ensuite le globe oculaire énucléé dans un microtube à centrifuger à fond rond de deux millilitres rempli de PBS.

Maintenant, placez le globe oculaire dans un autre tube de deux millilitres contenant du paraformaldéhyde à 4% fraîchement préparé pour une fixation à quatre degrés Celsius pendant 10 minutes. À l’aide d’un microscope à dissection, faites une petite incision sur la cornée à l’aide d’une pince fine. Remettez le globe oculaire dans le fixateur et incubez à quatre degrés Celsius pendant trois heures pour préserver la morphologie des tissus.

Pour enlever la cornée et le cristallin, à l’aide de ciseaux chirurgicaux fins, faites une petite incision d’environ un millimètre autour du limbe cornéen, la frontière entre la cornée et la sclérotique. Coupez soigneusement autour de la circonférence de la cornée, en l’excisant entièrement pour exposer les structures sous-jacentes. Ensuite, à l’aide d’une pince fine, saisissez doucement et soulevez soigneusement le cristallin des tissus environnants pour éviter d’endommager la rétine.

Pour l’incision sclérale, découpez une fente précise dans la sclérotique avec des ciseaux ophtalmiques fins pour faciliter la dissection ultérieure. Ensuite, pour la séparation de la rétine, insérez une pince dentée dans l’incision entre la sclérotique et la rétine. Saisissez doucement le bord de la sclère, en évitant une force excessive pour éviter de déchirer les tissus.

Élargissez progressivement l’incision en déplaçant la pince le long de la limite entre la sclérotique et la rétine. Utilisez la partie dentaire de la pince pour séparer soigneusement la sclérotique de la rétine sans l’endommager. Maintenant, à l’aide de ciseaux tranchants, divisez la rétine en quatre rabats de taille à peu près égale.

Dépliez doucement la rétine disséquée à l’aide d’une brosse à poils doux et retirez méticuleusement les débris de sa surface.