Pour commencer, préparez l’inoculum pour étudier la cinétique de croissance de Chlorella sorokiniana et d’Haematococcus pluvialis Préparez le volume requis de milieu de culture stérile conformément aux procédures de laboratoire standard. Configurez la source lumineuse du photobioréacteur et du ballon selon le spectre de couleurs souhaité. Couvrez les deux systèmes pour éviter les interférences lumineuses externes.
Après avoir ajusté les paramètres de photopériode, connectez le système de durée de dioxyde de carbone au photobioréacteur pour fournir du dioxyde de carbone pendant 12 heures à la chlorella. Ensuite, inoculez le récipient de culture pour obtenir une densité cellulaire de départ de 300 000 cellules par millilitre ou une densité optique de 0,180 à 550 nanomètres. Prélever des échantillons à intervalles réguliers de 12 heures pour la Chlorella sorokiniana et de huit heures pour l’Haematococcus pluvialis.
Placez 40 millilitres de l’échantillon dans un tube de centrifugation conique en plastique. Centrifugez le tube à 3000 G pendant 20 minutes à 15 degrés Celsius. Décantez le surnageant et ajoutez trois millilitres de solution d’acétone pure à 90 % pour remettre les cellules en suspension, puis transférez les cellules dans un tube de verre recouvert d’une feuille d’aluminium pour éviter l’oxydation et mélangez à l’aide d’un vortex.
Soniquez l’échantillon en suspension dans un bain de glace pendant deux cycles de cinq minutes chacun, et laissez reposer l’échantillon à quatre degrés Celsius pendant 16 heures. Après le repos, sonifiez à nouveau l’échantillon pendant deux cycles de cinq minutes chacun dans les mêmes conditions, et centrifugez l’échantillon à 3000 G pendant 20 minutes à 15 degrés Celsius. Séparez l’extrait pigmentaire à l’aide d’une pipette Pasteur et transférez-le dans un autre tube propre et protégé de la lumière.
Placez ensuite l’extrait de pigment dans une cellule de quartz et lisez-le dans un spectrophotomètre à 600, 647 et 664 nanomètres. Calculez les concentrations de chlorophylle à l’aide de l’équation. La teneur en chlorophylle de Chlorella sorokiniana était la plus élevée dans le quatrième traitement, dans des conditions de forte addition de dioxyde de carbone, de lumière violette et d’intensité lumineuse élevée.
Le graphique des effets principaux a montré que l’intensité lumineuse avait un effet plus faible par rapport aux effets de dioxyde de carbone et de lumière violette. Chez Chlorella sorokiniana, une augmentation constante des chlorophylles A et B a été observée tout au long de l’expérience, la chlorophylle A dépassant la chlorophylle B à 50 heures. Une diminution de la concentration de chlorophylle a été observée chez Haematococcus pluvialis à 50 heures, la chlorophylle B diminuant considérablement tandis que la chlorophylle A restait plus élevée.
