La privation visuelle monoculaire est un excellent protocole expérimental pour induire la plasticité visuelle primaire de réponse corticale. Normalement, les neurones du segment binoculaire du cortex visuel primaire de la souris réagissent environ deux fois plus fortement à la stimulation de l’œil contralatéral qu’à l’œil ipsilateral. Cependant, la suture a fermé l’oeil contralatéral pendant la période critique pour la plasticité oculaire de dominance ont comme conséquence la perte rapide de réactivité par les neurones de V1 à la stimulation contralatérale d’oeil et également suivie d’une augmentation suivante de la réponse à l’oeil ipsilateral.
Ici, nous introduisons le protocole expérimental pour la privation monoculaire et pour suggérer une méthode couramment utilisée pour analyser la tendance dans la dominance oculaire pendant la privation visuelle. Mettez les outils chirurgicaux dans une boîte en aluminium et autoclavez-les sous 120 degrés Centigrade pendant une demi-heure. Préparez la solution 2% agarose dans la bouilloire de bain d’eau et maintenez-la à 75 degrés Centigrade.
Appliquer une fine couche d’onguent pour les deux yeux. Sous le microscope anatomique avec illumination, suture des paupières. Faire environ quatre points de suture.
Faire deux à trois nœuds du fil. Appliquer trois microlitres de colle de séchage instantanée 502 sur la tête du nœud pour augmenter la stabilité du nœud. Ensuite, couper le fil aussi court.
Lorsque la souris est complètement éveillée, placez-la dans une cage de fixation séparée. Avant l’enregistrement électrophysiologique, utiliser l’isoflurane pour anesthésier la souris. Retirer les points de suture et exposer le globe oculaire.
Couper délicatement la paupière. Rincer les yeux avec des solutions de lentilles de contact et vérifier les yeux pour plus de clarté. Seule la souris en bon état des globes oculaires peut être utilisée.
Après anesthésier la souris, placez la souris sur un cadre stéréotaxique. Utilisez un coussin chauffant pour maintenir la température corporelle tout au long de la procédure. Appliquez la pommade oculaire à la surface des yeux pour la garder humide.
Enlever les poils de la souris pour exposer sa peau. Incise une zone de huit millimètres multipliée par huit millimètres de peau entre les deux oreilles pour exposer le crâne et enlever le tissu du cuir chevelu. Retirez ensuite le tissu conjonctif qui s’enjaie avec du peroxyde d’hydrogène.
Percer un trou dans le crâne au-dessus du cervelet. Fixer une petite vis osseuse dans le trou comme référence. Effectuez une petite craniotomie d’un millimètre de diamètre dans la région binoculaire V1.
Retirez soigneusement le fragment de crâne sans blesser le cerveau. Couvrir la surface corticale exposée de 2 % d’agarose pour éviter le séchage. Fixer une électrode de tungstène sur le cadre stéréotaxique.
Placez l’électrode de tungstène verticalement sur la région jumelle V1 pour s’assurer que les cellules enregistrées réagissent aux deux yeux. Le stimulus est séparé par 30 degrés dans un bloc aléatoire. Un total de trois à cinq blocs ont été présentés dans chaque mesure.
Masquez un œil avec une plaque de plastique non transparente. Présentez LCD1 à la position dans 23 centimètres des yeux de la souris. Avancez lentement microélecrode par le micromanipulateur hydraulique d’huile.
Arrêtez l’avancement signal de rapport de bruit élevé lorsque l’électrode est avancée à la couche quatre et commencer la mesure. Nous amplifions les activités de pointe à un facteur de 1000 et le filtrons de 300 à 10 kilohertz, puis nous les échantillonsons à 40 kilohertz. Masquez ensuite l’autre œil et mesurez la réponse de l’œil contralatéral.
Les signaux mesurés par des électrodes simples sont des activités de population. Utilisez un logiciel pour séparer les pointes de différentes cellules. D’abord, filtrer le signal de 500 à 5000 hertz.
Réglez deux curseurs, un pour une déviation positive et un pour les pointes de déflexion négatives. Configurer des modèles de pointes. Définissez la zone des modèles où il affiche la plus grande variation entre les différentes classes de pointes.
Utilisez l’analyse des composants principaux pour les séparer en grappes. Classifiez les pointes d’une limite en utilisant l’algorithme K means. Corréler l’orientation avec le taux de tir de pointe et tracer les courbes de réglage d’orientation pour les yeux ipsilateral et contralatéral.
Calculez ensuite l’indice od pour les cellules individuelles qui représente la réponse contralatérale et ipsilateral Assigner un score od pour chaque cellule selon l’indice OD. Calculez l’indice de biais contralatéral selon la formule. Ce diagramme montre les courbes de réglage d’orientation de l’œil ipsilateral et contralatéral chez la souris monoculaire privée et non privée.
Ce protocole permet la privation visuelle monoculaire réussie et la mesure oculaire de dominance d’une souris privée et non privée à la période critique. Nous venons de vous montrer comment accomplir cette expérience et nous avions analysé le changement de dominance oculaire pendant la privation visuelle. Au cours de l’expérience, il est important d’éviter l’infection dans le processus de suture et d’interaction lors de l’enregistrement électrophysiologique.
Merci d’avoir regardé notre vidé o.
