Cette nouvelle technique de cerclage aortique permet d’induction d’une hypertrophie cardiaque par surcharge de pression chez la souris avec moins de variance et une reproductibilité plus élevée. La mise en place d’un anneau en caoutchouc de diamètre fixe autour de l’aorte induit une augmentation constante de la vitesse d’écoulement dans l’aorte transversale, générant ainsi une hypertrophie cardiaque reproductible. Cette procédure doit être effectuée par quelqu’un qui a déjà de l’expérience avec les techniques d’anesthésie et de microchirurgie chez les rongeurs, ou qui a quelqu’un d’expérimenté qui peut guider.
Commencez par effectuer une coupe du joint torique au microscope à l’aide de ciseaux ou d’un scalpel pour permettre le placement autour de l’aorte. Percez chaque côté de l’anneau près de la coupe avec une aiguille reliée à un 8-0 suture non résorbable et tirez le fil. Coupez et laissez deux à trois centimètres d’un côté et deux centimètres de l’autre côté pour fixer le joint torique autour de l’aorte dans la dernière étape.
Avant la chirurgie, prenez l’aide à la ligature et tirez l’extrémité du fil d’un côté de l’anneau à travers le trou de l’aide à la ligature. Mettez l’aide à la ligature avec le joint torique attaché de côté pour le placement. Rasez la fourrure du côté gauche du thorax de la souris anesthésiée.
Replacez ensuite la souris dans la chambre remplie d’isoflurane pour une sédation suffisante avant l’intubation. Allumez le coussin chauffant avant la chirurgie pour maintenir la température corporelle de l’animal à 37 degrés Celsius. Connectez le coussin chauffant à une sonde rectale pour maintenir automatiquement la température corporelle de la souris.
Étirez un élastique autour du coussin chauffant pour fixer la souris avec les dents de devant sur la plaque. Placez la souris anesthésiée sur le coussin chauffant en décubitus dorsal. Placez l’élastique sur les dents de devant de l’animal pour étendre le cou sur la plaque.
Focalisez une source lumineuse sur la gorge pour une bonne visibilité de l’ouverture de la trachée pour l’intubation endotrachéale. Ouvrez doucement la bouche d’une main, en positionnant un auxiliaire d’intubation avec l’autre main et de petites pinces. Déplacez doucement la langue pour dégager l’ouverture de la trachée.
Introduisez le tube endotrachéal dans la trachée et, d’autre part, continuez à tenir l’aide à l’intubation. Connectez la position du tube endotrachéal via un robinet d’arrêt à trois voies à un ventilateur pour les souris afin de confirmer la position correcte du tube endotrachéal. Surveillez la bonne ventilation selon les instructions du fabricant.
Confirmer une profondeur anesthésique suffisante par une vérification du réflexe de pincement des orteils. Appliquez une pommade ophtalmique sur les yeux pour éviter la sécheresse pendant la chirurgie. Désinfectez la zone chirurgicale à l’aide d’une solution désinfectante disponible dans le commerce.
À l’aide de ciseaux, faites une incision cutanée de 0,5 à un centimètre de long au milieu d’une ligne entre le processus xiphoïde et l’aisselle gauche. Utilisez des pinces pour séparer la couche musculaire des côtes sous-jacentes et placez deux rétracteurs de cinq millimètres dans l’incision pour exposer la cage thoracique. Pour commencer la thoracotomie gauche, effectuez une incision d’un à deux millimètres dans les muscles intercostaux entre la deuxième et la troisième côte à l’aide de ciseaux à micro-ressorts.
Ouvrez la cavité thoracique et écartez l’incision avec une pince inclinée à 45 degrés. Placez trois rétracteurs thoraciques dans l’incision pour ouvrir la cavité thoracique afin d’améliorer la visualisation. Pour exposer l’arc aortique, essayez de soulever et de séparer doucement le thymus et le tissu adipeux de l’arc avec une pince inclinée à pointe fine de 45 degrés.
Exposez l’arc aortique avec une pince inclinée de 45 degrés dans une main. D’autre part, positionnez le joint torique relié à l’aide à la ligature via les fils d’un côté fixés précédemment. Passez les fils à l’aide de la ligature sous l’arc aortique de la face caudale au côté crânien de l’aorte transversale entre les artères carotides brachiocéphales et communes gauches.
Prenez soigneusement les deux fils entre l’aide à la ligature et l’arc aortique avec la pince. Retirez l’aide à la ligature et positionnez doucement le joint torique autour de la voûte en tirant les fils de chaque côté. Après un positionnement réussi, fixez le joint torique avec les fils et un nœud chirurgical.
Faites un nœud supplémentaire pour éviter de l’ouvrir de chaque côté. Après la ligature du joint torique, retirez les trois rétracteurs thoraciques de l’incision. Si nécessaire, éliminez l’air résiduel du thorax en le remplissant d’une solution de sel isotonique chaude à 0,9%.
Pour exposer l’incision thoraxique pour la suture, prenez à nouveau deux rétracteurs de cinq millimètres pour maintenir la peau sur le côté. Fermez le thorax avec deux ou trois sutures non résorbables 6-0. Retirez les deux rétracteurs et fermez la peau avec trois à cinq sutures résorbables 4-0.
Ensuite, éteignez l’isoflurane et surveillez. Pincez l’écoulement du ventilateur pendant deux secondes pour regonfler les poumons. Un jour après la chirurgie, vérifier la sténose à l’aide d’une échographie en mesurant la vitesse d’écoulement maximale sur la sténose.
Pour les mesures, utilisez l’échocardiographie avec un système à ultrasons et une sonde transductrice d’une fréquence de 30 mégahertz. Placez l’animal anesthésié sur le coussin chauffant en décubitus dorsal et connectez le coussin chauffant à une sonde rectale pour maintenir la température corporelle à 37 degrés Celsius, et surveillez la fréquence cardiaque avec un ECG à l’aide de quatre capteurs de patte de souris. Un cerclage aortique du joint torique réalisé avec succès entraîne une augmentation de la vitesse d’écoulement sur la sténose mesurée par ultrasons.
Pour cette mesure, positionner la tête du transducteur parasternellement sur le côté droit du thorax pour localiser l’arc aortique par imagerie bidimensionnelle. Utilisez le Doppler de couleur pour visualiser le flux sanguin dans l’aorte et mesurez avec l’onde doppler pulsée la vitesse du flux sanguin sur la sténose. Visualisez les artères carotides communes droite et gauche par imagerie bidimensionnelle.
Placez la tête du transducteur horizontalement sur les côtés gauche et droit du cou à un angle de 45 degrés et utilisez le Doppler à ondes pulsées pour déterminer la vitesse du flux sanguin. L’induction réussie de la sténose aortique a été observée par une augmentation de la vitesse du flux sanguin sur la sténose dans l’aorte mesurée par échographie Doppler à ondes pulsées. De plus, le rapport de vitesse du flux sanguin entre les artères carotides communes droite et gauche a été déterminé comme un marqueur fonctionnel des bandes aortiques du joint torique.
Deux semaines après la chirurgie, une augmentation du diamètre de la paroi postérieure ventriculaire gauche et du septum intraventriculaire dans la diastole a été observée. De plus, une détérioration progressive de la fonction cardiaque a été documentée en mesurant la diminution de la fraction d’éjection ventriculaire gauche. Tout en fixant le joint torique autour de l’arc aortique, il est important de fermer l’anneau des deux côtés avec un nœud pour obtenir un résultat optimal.
