A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Method Article
כאן אנו מתארים פרוטוקול בסיסי תיוג הניאון של אלמנטים שונים של צינורות הלב של הזחל והמבוגר תסיסנית melanogaster. דגימות אלו הן היטב מתאים דימות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי או confocal. טכניקה זו מאפשרת ניתוח מבני מפורט של התכונות של לבבות מן אורגניזם מודל עוצמה.
לפני שתתחיל
פלורסנט מכתים
הרכבה של לבבות למבוגרים
ילדה = "jove_title"> הרכבה עבור לבבות הזחל
נציג תוצאות
כאשר מבוצע כראוי, את כל המרכיבים והרקמות הקשורים כלי הגבי צריך להישאר שלם להיות דמיינו בקלות. הקרינה רקע צריך להיות מינימלי. למבוגרים, הגחון האורך שכבת השריר כתמים היטב מייצר אות ממשי (איור 1 ואיור 2). Cardiomyocytes מעגלי הבסיסית לעומת זאת, נוטים שלא להפיק אות אינטנסיבי כמו זה של השכבה שמעליה הגחון. Myocytes של "תא חרוטי" הקדמי של הלב למבוגרים מכילים כמות משמעותית של חומר כויץ, וכתוצאה מכך, האזור הזה מופיע ביחס החזקה ביותר שארית הצינור לב. הלב הזחל מראה ההסדר מתפתלת myofibrillar דומה לזה של cardiomyocytes כויץ מבוגר (איור 3).
איור 1: למעלה. מיקרוסקופ פלואורסצנטי מראה את הצינור כולו לב של מבוגר תסיסנית melanogaster המבטא שרירן-GFP. התמונה צולמה עם מיקרוסקופ Imager Z1 Zeiss פלורסנט מצויד מודול הזזה Apotome. שרירן-GFP מוצג בירוק, אקטין הוא מוכתם AlexaFluor ® 594 phalloidin (אדום) α-actinin מתויג עם נוגדן אנטי-α actinin (כחול). הערה הליך preparative היתרי התאוששות של דגימות לב עם המבנים השתמרו היטב. CC = חרוטי קאמרית: AM = שריר כנפי: V = שסתום פנימי; VLL = שריר הגחון שכבת האורך. בוטום. באזור של הצינור לב מבוגר מ CC דרך קטע הבטן 3 הלב פשוט מתחת לשכבת אורך הגחון מראה את ההסדר מתפתלת myofibril של cardiomyocytes התכווצות. אנא לחץ כאן עבור גרסה גדולה יותר של איור 1a ו כאן עבור גרסה גדולה יותר של דמות 1b
איור 2: ערימות confocal נציג החלק הקדמי של הלב המבוגר מוכתם AlexaFluor ® 594 phalloidin (אדום) אנטי Pericardin (קולגן מסוג IV) (ירוק) נוגדן. Pericardin קשורה בלב פני השטח הגחון, סביר להניח שמקורו myofibrils אוריינטציה longitudinally של שכבת השריר הגחון. אנא לחץ כאן עבור גרסה גדולה יותר של הדמות 2.
איור 3: מיקרוסקופ פלואורסצנטי של קטע A7 הלב התקין של הזחל שלושה שלבים תסיסנית. התמונה צולמה עם מיקרוסקופ Imager Z1 Zeiss פלורסנט מצויד מודול הזזה Apotome. אקטין התווית AlexaFluor ® 594 phalloidin (ירוק) ו α-actinin הוא מוכתם נוגדן אנטי-α actinin (אדום). אנא לחץ כאן עבור גרסה גדולה יותר של הדמות 3.
כאן אנו מציגים פרוטוקול שימושי עבור הכנת מכתים את כלי melanogaster תסיסנית הגב ורקמות הקשורים עבור דימות באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי או confocal. אנו מספקים דיווח תמציתי על הפעולות מעודן על ידי והעסיק נפוץ מכתים יעיל המאפשר היטב נפתרה הדמיה באתרו של הזחל והמ?...
המחברים מודים SI ברנשטיין (סן דייגו סטייט) לקריאה ביקורתית הצעות מועילות לגבי הכנת כתב היד הזה. עבודה זו נתמכה על ידי NIH מענקים SI ברנשטיין, SDSU, וכן ר בודמר, BIMR, ועל ידי אחווה פוסט דוקטורט מ שותפים המערבי הברית של איגוד הלב האמריקני אל G. Vogler ו א Cammarato.
Name | Company | Catalog Number | Comments | |
Ethylene glycol-bis (2-amino-ethylether) -N,N,N’,N’-tetra-acetic acid (EGTA) | Reagent | Sigma-Aldrich | E4378 | |
Formaldehyde, 10%, methanol free, Ultra Pure | Reagent | Polysciences, Inc. | 50-00-0 | |
Triton-X-100 | Reagent | Sigma-Aldrich | 9002-93-1 | |
Alexa Fluor® 594 phalloidin | Reagent | Invitrogen | A12381 | |
Vectashield® Mounting Medium for Fluorescence with DAPI | Reagent | Vector Laboratories | H-1200 | |
Tungsten pins | Reagent | Fine Science Tools | 26002-10 | |
Pin holder | Reagent | Fine Science Tools | 26018-17 |
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request PermissionThis article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved