פלאש מקפיא Cryosectioning E12.5 מוח עכבר

Summary

הפגינו וידאו זו הן טכניקות פלאש מקפיא חתך ברקמת המוח העובריים של העכבר. טיפים שימושיים לשימוש cryostat מקבלים, כולל שיטות לפתרון בעיות שניתן להשתמש בהם בעת חיתוך על מנת להבטיח כי הסעיפים רקמות כתוצאה חופשיים של סדקים ועיוותים אחרים.

Abstract

Protocol

1. תיקון רקמות paraformaldehyde 4% PBS בפעם הרצוי.
2. להשרות סוכרוז רקמות (cryoprotection)
   1. בצע פתרון סוכרוז 30% PBS w / v בצינור 2059.
   2. יש לשטוף את רקמת 3x ב PBS (~ 5 דקות עם נדנדה).
   3. מקום הרקמה בתמיסה סוכרוז 30%. רקמות לא תטבע.
   4. מניחים את הרקמה 4 ° C במשך הלילה, או עד שהוא שקע.
3. גודל התווית המתאימה cryomold עם מידע והתמצאות.
4. מלאו cryomold עם אוקטובר (למנוע בועות).
5. העברת רקמות אמבטיה אוקטובר ומעיל עם אוקטובר
6. העברת רקמות אוקטובר ב cryomold.
7. המזרח הרקמה תחת מיקרוסקופ.
8. יוצקים חנקן נוזלי לתוך צלחת פטרי מפלסטיק.
9. במהירות ובזהירות להוריד את הרקמה cryomold בחנקן. (לא להטביע את החלק העליון של cryomold).
10. אוקטובר כאשר הוא מוצק לבן, במקום הרקמה הקפואה אל תוך -80 ° C במקפיא לאחסון.
11. לאזן רקמות ~ 20 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות לפחות. לפני חתך.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Tissue-Tek Cryomold	Ted Pella, Inc.	27181
O.C.T.	Ted Pella, Inc.	27050
Sucrose solution			30% sucrose solution in PBS w/v
paraformaldehyde			4% paraformaldehyde in PBS