פרוטוקול ליפרתרמיה הארוכה משך כל גוף בעכברים

Summary

מאמר זה מתאר פרוטוקול ליפרתרמיה כל גוף בעכברים שיכולים לעורר חום כמו תנאים עד 12-24 שעות.

Abstract

היפרתרמיה היא מונח כללי המשמש להגדרת העלייה בחום גוף גבוה מרגיל. הוא משמש לעתים קרובות כדי לתאר את חום הגוף המוגבר שנצפה בחום. השימוש בהיפרתרמיה כאדג'ובנט התפתח הליך מבטיח לנסיגה של גידול בתחום הביולוגיה של הסרטן. לצורך כך, הדרישה החשובה ביותר היא שתהיה לי פרוטוקולי חימום אמינים ואחידים. פתחנו פרוטוקול ליפרתרמיה (כל גוף) בעכברים. בפרוטוקול זה, בעלי חיים נחשפים למחזורים של היפרתרמיה ל90 דקות ואחרי תקופת מנוחה של 15 דקות. במהלך תקופה זו עכברים יש גישה קלה למזון ומים. קוצי טמפרטורת גוף גבוהים בעכברים במהלך כמה מחזורי חשיפת היפרתרמיה הראשונים מנעו ידי עצירת בעלי החיים. בנוסף, מי מלח רגיל הוא מנוהל בכמה מחזורים הראשונים כדי למזער את ההשפעות של התייבשות. פרוטוקול זה יכול לדמות חום כמו תנאים בעכברים עד 12-24 שעות. יש לנושימוש 8-12 שבועות עכברים זקנים BALB / Cj נשיים להפגין את הפרוטוקול.

Protocol

1. אתיקה של בעלי חיים

לפני ביצוע היפרתרמיה משך זמן הארוכה על עכברים לוודא שההליך אושר על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדה ושימוש. כל ההליכים שנדונו במאמר זה ושמוצגים בוידאו הנלווה, אושרו על ידי ועדת אתיקת בעלי החיים המוסדית של המכון הלאומי לאימונולוגיה.

2. היפרתרמיה הבנה

היפרתרמיה כל גוף (WBH) מועברת על ידי נחת את החיות בכלובי prewarmed אשר ממוקמים בחממה נשמרה ב39.5 ° C. במהלך סטנדרטיזציה של פרוטוקול, חיישן טמפרטורה שמושתל בעכברים וטמפרטורת הגוף שלהם הייתה פיקוח בתנאי ניסוי שונים. היה נראה כי בעת ביצוע את החיות בסביבה מחוממת, הטמפרטורה שלהם עלו בהדרגה מ 37 מעלות צלזיוס לעד 42 ° C מעל משך 100 דקות (איור 1). הדואר כתוצאה "ספייק" בטמפרטורה הוא מסקרן כמו טמפרטורת הגוף הפנימית נורתה אף גבוהה יותר מטמפרטורת הסביבה החיצונית.

כאשר טמפרטורת הגוף עולה על 40 מעלות צלזיוס, החיה היית להראות סימנים של לחץ והתייבשות כגון הרטבה סביב החוטם. הגדל את טמפרטורת הגוף מעבר ל40 ° C, יוביל להרטבה ומתח בלתי הפיך ואף למוות של בעלי חיים עקב עומס חום. לכן חשוב למנוע את קוצי הטמפרטורה במהלך הקורס של היפרתרמיה.

תופעה זו של קוצים בטמפרטורה גבוה קשורה ליפראקטיביות הפיסית של חיה במהלך חשיפת היפרתרמיה. קוצי טמפרטורה דומים נצפו גם על ידי קבוצות אחרות והיו קשורים עם היפראקטיביות הפיסית של החיה על שהוצג לסביבה שטמפרטורות גבוהות יותר ^10.

בפרוטוקול שלנו, עכברים משותקים במהלך חשיפת היפרתרמיה. כמושמוצג באיור 2, קיבוע של חיה מונע את הקוצים בטמפרטורה.

יש לנו להשתמש 8-12 שבועות עכברים זקנים BALB / Cj להוכחה בפרוטוקול זה. הפרוטוקול אינו מוגבל לסוג מסוים / זן של העכברים.

3. מתכונן לניסוי

3.1 חממה

ניסוי זה יכול להתבצע בCO ₂ חממה רגילה כמו שיש להם שליטה בטמפרטורה טובה. ניתק אספקת גז CO ₂ ולהסיר מגש מחזיק מים של CO ₂ החממה. בחלק מהדגמים של חממות ניתן לכבות את בקר CO _2. סידור מדפים בחממה, כך שכלוב עכברים יכול להיות ממוקם במקום נוח בפנים. הגדר את הטמפרטורה בחממה ב39.5 מעלות צלזיוס

3.2 כלובים

בדרך כלל, הניסוי מתבצע היפרתרמיה על 4 עכברים בכל פעם. שני כלובים נדרשים; עלהדואר ממוקם בתוך החממה והשנייה ממוקם מחוץ בטמפרטורת חדר. מצעים של כלובים הוא נמנע, כמו הכתמים של מצעים רטובים הפכו עם זמן וכתוצאה מכך הטמפרטורה לא אחידה בתוך הכלוב. הכלוב צריך להיות מחוץ כופתות מזון ובקבוקי מים.

3.3 עכברי צינורות Immobilization

במהלך 4 המחזורים הראשונים של עכברי היפרתרמיה הם משותק בצינורות מחוררים. צינורות Immobilization אלה יכולים להיות עשויים מהצינורות 50 'צנטריפוגות' המ"ל על ידי 3 מ"מ חורי פירסינג בכל רחבי יידרשו גופו וארבעה מצינורות כאלה. 50 מיליליטר השפופרת נוחה יכולה לשתק עכברי BALB / Cj שישנים יותר מ 8 שבועות. צינורות בגדלים מתאימים עשויים להידרש לקצת מתח שונה מרגיל של עכברים או לעכברים שהם מאוד צעירים או מבוגרים יותר מ -50 שבועות.

צינורות קיבוע מקום וכלוב בתוך החממה נשמרו ב39.5 ° C. חכה לפחות 2 שעות, כך שכלוב ואניצינורות mmobilization להשיג את הטמפרטורה בחממה.

4. המחזור ראשון של היפרתרמיה

עכברים עלולים לחוות התייבשות במהלך חשיפת היפרתרמיה. לכן לפני תחילת הניסוי, לנהל intraperitoneally המלוח נורמלי מ"ל 0.5 לכל עכבר. השתמש במחט 26 G עם מזרק 1 מ"ל.

מהר להוציא את הכלוב הונח בחממה, מקום בעל חיים אחד בכל צינורות וקיבוע הנח חזרה כלוב בחממה. רשום את הזמן. זה חיוני כדי לשמור על הכלוב באותו המקום בחממה בכל פעם.

לאחר 90 דקות, מוציא את הכלוב מהחממה. לשחרר בעלי חיים מצינורות Immobilization ולמקם אותם בכלוב בטמפרטורה נורמלית עם גישה נוחה למזון ומים. הנח צינורות Immobilization ריקים בחזרה בחממה.

לאחר 15 דקות, המחזור השני של היפרתרמיה מופעל על ידי אספקת 0.intraperitoneally 5 מ"ל מי מלח לכל עכבר.

אז הם משותקים ב50 צינורות מחוררים Immobilization מ"ל והושמו באינקובטור.

5. מחזורי היפרתרמיה הבאים

במשך 4 מחזורים הראשונים, זה חיוני כדי לשתק עכברים במהלך חשיפת היפרתרמיה ולשני המחזורים הראשונים, הזרקה מי מלח ניתן לפני תחילת תקופת היפרתרמיה.

לאחר המחזורים אלה של היפרתרמיה ואחריו שאר סקרים, עכברים לקבל להתאקלם ואינם הופכים להיפראקטיביים במהלך חשיפת היפרתרמיה. ההזרקה של מי מלח intraperitoneal לא יכולה להיות הכרחית אם עכברים בקלות לקחת את מזון ומים בזמן המנוחה.

6. לאחר כל המחזורים הושלמו, השלב הסופי הוא לבחון את בעלי החיים

לא צריך להיות כל מוות במהלך מחזורי היפרתרמיה. לכל בעל חיים יש להיות התבוננו בקפידה ב1כמה מחזורים. מהירות לחפש כל הרטבה סביב החוטם. תופעה זו היא חתימתו של התייבשות. עכברים עם סימפטומים אלה באופן מיידי יש לתת ip 0.5 מ"ל סליין נורמלי ומנוחה בטמפרטורת חדר. רוב העכברים המשותקים לא דורשים כל טיפול נוסף וישא את הלחץ בהצלחה היפרתרמיה.

לאחר שסיים את המחזורים נדרשים, בעלי חיים עשויים להיראות חלשים ומיובשים אבל הם יתאוששו במהירות תוך מספר שעות.

איור 1. וריאציה של טמפרטורת גוף הליבה של עכברים כאשר הכלוב הושם באינקובטור ב39.5 ° C. לאחר 90 דקות הכלוב הוסר מהחממה והניח במהירות של 25 ° C. עיגולים אדומים מצביעים על קוצים בטמפרטורה גבוהה.

איור 2. וריאציה של temperatu גוף הליבהמחדש של עכברים חסרי יכולת תנועה במהלך מחזורי היפרתרמיה. לאחר לשתק את החיה, קוצי טמפרטורות גבוהים לא להתבונן בי הכלוב הונח ב39.5 מעלות צלזיוס

Discussion

כבר ב 5000 לפנה"ס, רופאים מצריים לטפל גידולים עם חום. היוונים הכירו בערכו של חום בחלק מהטיפולים רפואיים. את הטקסטים העתיקים ביותר של תורת משה אזכור מעיינות חמות (בראשית 36:24) כדי להעלות את טמפרטורת גוף טיפולי.

הטכניקות הקודמות ה?...

Materials

Thermistor	RS רכיבים	528-8558
CO 2 חממה	Heraeus	B5060 EK-CO2
כלובי עכברים	אזרח תעשיות בע"מ.		הסוג B 365X207X190 סנטימטר
מזון לבעלי חיים	Provimi הודו
בקבוק מים לכלוב	ספק מקומי		בקבוק זכוכית
מלחם	Solderon, הודו
50 צינורות צנטריפוגות מ"ל	BD Biosciences	352070
שעון עצר	ספק מקומי
מזרק 1 מ"ל עם מחט 26G	BD Biosciences	309602
מלוח	ספק מקומי