הכנת Slices האזור Subventricular החריף להדמית סיד

Summary

שיטה לטעון אזור תאי subventricular (SVZ) עם צבעי סיד חיווי לפעילות הסידן הקלטה מתוארת. SVZ לאחר הלידה מכיל תאים צפופים, כולל תאי אב עצביים וneuroblasts. במקום להשתמש בטעינת אמבטיה אנו מזריקים צבע בלחץ בתוך הרקמה המאפשרת דיפוזיה צבע טובה יותר.

Abstract

אזור subventricular (SVZ) הוא אחד משני האזורים במוח neurogenic לאחר הלידה. SVZ מכיל תאים צפופים, כולל תאי אב עצביים עם תכונות astrocytic (הנקרא האסטרוציטים SVZ), neuroblasts, ותאי ביניים. Neuroblasts נולד בSVZ משיק לנדוד מרחק רב כדי נורת חוש הריח, שבו הם להתמיין interneurons. איתות אינטר באמצעות מולקולות דבקות ואותות diffusible ממלאת תפקידים חשובים בneurogenesis שליטה. רבים מאותות אלו לגרום לפעילות הסידן אינטר שמעבירה מידע בתוך ובין תאים. סידן היא פעילות ובכך משקף את הפעילות של אותות תאיים והיא דרך אופטימלית להבין איתות אינטר פונקציונלית בין תאי SVZ.

פעילות סידן נחקרה באזורים רבים אחרים וסוגי תאים, כוללים תאי גליה ונוירונים בוגרים. עם זאת, השיטה המסורתית לואהתאי D עם סיד מחוון צבע (טעינת אמבטיה כלומר) לא היו יעילים בטעינה כל סוגי תאי SVZ. ואכן, בצפיפות הסלולרית SVZ מונעת התפשטות צבע בתוך הרקמה. בנוסף, הכנת פרוסות sagittal יהיה טוב יותר לשמור על ההסדר תלת הממדי של תאים, במיוחד SVZ זרם הגירת neuroblast על הציר מקורי-הזנב.

כאן, אנו מתארים שיטות להכנת סעיפי sagittal המכילים SVZ, הטעינה של תאי SVZ עם צבע מחוון סידן, ורכישת פעילות סידן עם סרטי זמן לשגות. אנחנו השתמשנו Fluo-04:00 לצבוע לטעינת האסטרוציטים SVZ באמצעות יישום לחץ בתוך הרקמה. פעילות סידן נרשמה באמצעות מיקרוסקופ confocal סריקה המאפשר רזולוציה מדויקת לתאים בודדים מזהים. הגישה שלנו היא ישימה לאזורים אחרים, כולל neurogenic האזור המבוגר היפוקמפוס subgranular ואזורי neurogenic עובריים. בנוסף, סוגים אחרים של צבעים יכוליםלהיות מיושם בשיטה שתוארה.

Protocol

1. הכנה של פתרונות, נתיחה, וvibratome

1. פתרונות צריכים להיות מוכנים באוסמולריות והחומציות הנכונות (טבלה 1). בהשוואה לנוזל השדרתי מלאכותי (ACSF), פתרון נתיחה הוא מוכן עם ריכוזים נמוכים של נתרן וסידן, וריכוזים גבוהים של מגנזיום. זה כדי למזער תופעות excitotoxicity במהלך חיתוך.
2. שני פתרוני הנתיחה וACSF חייבים להיות רוויים עם 95% O _2/5% CO ₂ על ידי מבעבע במשך לפחות 10 דקות כדי להגיע לרמת החומציות הרצויה של 7.3.
3. הכן קרח אמבטיה במגש. מניח צלחת נתיחה באמבט הקרח ולמלא עם פתרון לנתיחה. בועת צלחת הניתוח.
4. הכן vibratome ידי יצירת קרח אמבטיה. הנח את המנה חתכה באמבט הקרח, למלא את הצלחת עם פתרון נתיחה, ובועה.
5. מלא את הפרוסה מחזיקה קאמרי עם ACSF ובועה כדי להבטיח פתרון שאוורר כראוי ללא קשרמשם פרוסות ממוקמות.

2. הסרה של רקמת המוח

פרוסות מוח חריפות נוטות להיות בריאים יותר עם עכברים צעירים. הארכיטקטורה הסלולרית של אחרי לידת SVZ במכרסמים היא בוגרת סביב יום לאחר לידה (P) 20 ^1. לכן, אנחנו מנסים להגביל הניסויים שלנו לגילי עכבר של P20-P30 אבל אנחנו בצענו ניסויים מוצלחים בעכברים מלפני 3 חודשים. במהלך טיפול ברקמות, אחד חייב להיות זהיר כדי למזער את התנועות ולחץ למוח מכאניים, לשמור על תנאי קירור, ולחשוף SVZ לפתרון במהירות אפשרית הקורבן הבא.

1. לאחר ההזרקה של פנטוברביטל, העכבר ערוף במהירות. הפרווה יוסרה וחתכים נעשים באמצעות בסיס הגולגולת. אז הראש ממוקם במגש מלא פתרון נתיחה.
2. בעוד ייצוב הראש עם מלקחיים, הפחתה רציפה נעשית מסביב לגולגולת ולעתים עד קו האמצע עם microscissors. להיות זהיר, כדי להפחית את המגע עם רקמת הגוף. מאז נורת חוש הריח היא היעד הסופי של נוירונים יילוד מSVZ, צריך להיות מודע לשימור אזור זה, בעיקר בהסרת עצם סביב אזור זה. קיצוצי Microscissor נעשו מסביב לגולגולת צריכים להיות בצד הגב, כדי לאפשר הסרה קלה של הגולגולת.
3. הסרה של הגולגולת שמעל המוח עכשיו מופרד מהעצמות שמתחת למוח. אם קיצוץ בשלב הקודם נעשה בצורה נכונה, עצם שמעליה זה ניתן להסיר בקלות עם פינצטה או מלקחיים.
4. ועדיין מחזיק את הראש עם מלקחיים, אפשר להשתמש בסכין כירורגית נקיים כדי להסיר כמה חתיכות של רקמות מוח לפני חיתוך, כגון הבא. קיצוץ עטרה יכול להתבצע ברמה של למבדה. קיצוצי sagittal יכולים להתבצע בשני הצדדים של המוח לרוחב לSVZ. הערכה שמרנית תהיה ~ 2.5 מ"מ מקו האמצע. אם ירצה, המוח יכול להיות גם התפצל לפתע כאן. קיצוצים אלה הם facilitate הרכבה של הרקמות ולאפשר SVZ אליו יש להגיע במהירות רבה יותר כאשר מוח חיתוך. חשוב לזכור להפעיל את הכמות המינימאלית של כוחות מכאניים על המוח (למשל לא דוחף או מושך).

3. הכנה פורסת מוחית חריפה

1. כדי להתכונן לשלבים באים, ודא שהדבק סופר נהג לעלות רקמות הוא ללא כפכפים ומוכן לפנות לצלחת vibratome. חשוב ללכת מהר ככל האפשר מבלי לפגוע במוח.
2. רקמת המוח אז יכולה להיות גרפה מתחת, שמפריד את הרקמה מעצם שמתחת תוך הפרדת עצבים.
3. הרקמה היא רכובה והדביקה על צלחת והניחה על vibratome. בשל האנטומיה מקורית-הזנב של SVZ, אנו מתמקדים בהפיכת פרוסות sagittal כפי שהוא שומר על מסלול הנדידה של neuroblasts, נדן גליה, ומערכת כלי דם שמיושרים במידה רבה בכיוון זה. פחית אחת או מוUNT הרקמה בקו האמצע או על המשטח השטוח שנוצר על ידי ביצוע חתכים רוחביים לSVZ sagittal. שלב אופציונלי הוא להציב 3% בלוק agarose מאחורי הרקמה לשמש משען ללהב כפרוסות יורדות. אנחנו השתמשנו דבק סופר cyanoacrylate מבוסס מועדפים.
4. יש לשטוף את הלהב עם אתנול להסיר שמנים ולשטוף עם מים מזוקקים. מניח את הלהב על מחזיק הלהב. הר מחזיק הלהב לvibratome.
5. התאם את גדרות vibratome לחתוך רקמות בעובי של 250-350 מיקרומטר לפרוסה. חשוב לחתוך באמצעות תנודות בתדירות גבוהות ומהירות נמוכה.
6. סעיף הדרגה דרך הרקמות. המראה של נורת חוש הריח הוא אינדיקטור טוב שאחד הוא קרוב SVZ בפרוסות sagittal כמו הפרוסות הרוחביות ביותר תכלנה גם אזור. ציוני דרך אחרים לחפש כוללים את החדר והעיבוי של כפיס המוח, שמתחתיו SVZ ממוקם. SVZ יהיה ראשון להופיע בשגייה רוחבית יותרפרוסות טל. RMS יציג בפרוסות sagittal המדיאלי.
7. הסר פרוסות המכילות SVZ עם פיפטה פסטרה פלסטיק עם הקצה חתוך. העברה לתא אחזקת הפרוסה. לעתים קרובות אנו משיגים עוד פרוסות ממה שאנחנו יכולים להשתמש ביום עבודה. עם זאת, פרוסות תשתנינה בכמות תאים המכילים SVZ. לעתים יש צורך להסתכל דרך כמה פרוסות למצוא אחד רצוי להדמיה.

4. הכנה של מיקרוסקופ וצבעים

את הפרוסות דורשות זמן דגירת שעה אחת בACSF להתאושש מהנתיחה והחיתוך. ניתן לבצע כמה צעדים במהלך תקופת החלמת פרוסה זה.

1. הכנת pipettes לצבע סיד ו / או יישום תרופה
   1. pipettes זכוכית צריך טיפ של 2-3 מיקרומטר בקוטר ואורך קצה (~ 2 מ"מ) וזווית (~ 16 ° לבעל פיפטה) המונעת מגע עם תא זלוף ומאפשר מקום להשמההאובייקטיבי.
   2. בדרך כלל אחד יכול להכין 6-8 pipettes לחץ עבור כל יום של ניסויים.
2. הכנת צבע סיד
   1. כאשר מתכוננים פתרון עובד (4-5 מיקרומטר על ידי אמבטיה, 250 מיקרומטר ידי יישום לחץ), הדרך טובה ביותר היא לחשוף את הסכום המינימאלי של DMSO לתאים. זו יכולה להיות מושגת על ידי הפיכת מניות מרוכזות מאוד. לדוגמה, עבור Fluo-4, צינור אחד המכיל 50 מיקרוגרם משמש ליום. אפשר להפוך את מניית 10 מ"מימ של aliquot זו על ידי הוספת 4.6 μl של פתרון ה-F-127 20% Pluronic בDMSO.
3. הכנת התקנת מיקרוסקופ (איור 2).
   1. שימוש במשאבת peristaltic לזרימת פתרון סייע למזער את סחיפת תמונה. הפעלת משאבת peristaltic לפני לאפשר ACSF לרוץ דרך קווי זלוף ולוודא שהוא נקי מבועה.
   2. הגדר את כניסת הצינור בתא זלוף ולוודא שאין נזילות.
   3. מקם את קצה הוואקום לensיור שהפתרון הוא להיות aspirated מתא זלוף. לוודא שהוא ברמה נאותה, כך שהמטרה היא שקועה במרחק העבודה הנכון, אבל לא כל כך גבוהה, שהפתרון כזה עשוי לשפוך על התא. רמה נמוכה של פתרון תהיה גם לצמצם עיוותי זרימה. שאיפה מתמדת יכולה גם להיות מאומתת על ידי הקשבה ליציבות.

5. דאה טוען

שיטה זו תוארה בפירוט בכתב יד אחרת ^2. אנא ראה דמויות בו.

1. לצבוע טעינת אמבטיה
   1. הפוך פתרון עובד 1-2 מ"ל של הצבע. לFluo-4 בבוקר, ריכוז מיקרומטר 4-5 הוא נאות לתיוג neuroblasts SVZ.
   2. פרוסות מועברות תחילה לצלחת תרבות 35 מ"מ עם תחתית רשת שכבר מלאה ACSF. החלף את הפתרון באמצעות פיפטה העברת פלסטיק 3 מיליליטר עדינות להסיר ACSF, תוך הוספת גalcium לצבוע עובד פתרון.
   3. לדגור על 37 מעלות צלזיוס במשך 30-60 דקות ב5% ₂ CO גז סביבה מבוקרת.
   4. הנח פרוסה בחזרה לתא מחזיק ACSF המלא כדי לשטוף את הצבע שלא נכנס תאים. לחלופין, אפשר למקם אותו ישירות על תא זלוף מיקרוסקופ שבו פועל ACSF. תקופה זו היא לשטוף 30-45 דקות.
   5. להעביר את הפרוסה לתא זלוף.
2. יישום לחץ של צבע
   1. להעביר את הפרוסה מהתא לתא מחזיק זלוף על התקנת מיקרוסקופ.
   2. מלא כוס טפטפה עם פתרון עובד שהוא 250 מיקרומטר ומניחים על micromanipulator.
   3. מנמיך את הפיפטה לאזור של עניין. פיפטה יכולה להיות ממוקמת באופן שהקצה הוא גם מיקרומטרים אחדים מעל פני השטח הפרוס או נקבר מיקרומטרים אחדים מתחת לפני שטח הפרוסה, אך הרחק מהאזור המוקלט. הזווית של פיפטה לא affect יעילות הטעינה. כאשר הדמיה מתחת לפני שטח הפרוסה, אנו מוצאים כי הצבת קצה פיפטה מתחת למטוס ההדמיה לתייג אזור ההדמיה הרצויה לנו טובה יותר.
   4. כאשר לחץ החלת הצבע, להגדיר Picospritzer כך שהוא <3 psi. יש לנו לא העריך את עוצמת הקול של דיפוזיה צבע, כי זה נתון לשונות של קוטר טיפ פיפטה, לחץ, וצפיפות של רקמה שבי הצבע מוזרק. אנו מיישמים פשוט עד שנשיג הטעינה הרצויה לנו כפי שהוערך על ידי עין. למזער את הניזק לפרוסה במהלך יישום, במיוחד כאשר הקצה ממוקם מתחת לפני שטח הפרוסה. מועמדות 1-2 דקות. יישומים חוזרים ונשנים לפעמים נחוצים בהתאם לתיוג כפי שהוערך על ידי עין. עבור משך זמן ריכוז ויישום זה, אנו מוצאים כי יישום פני שטח של צבע מועדף מתייג neuroblasts בעוד שמתחת לפני שטח היישום מעדיף מתייג האסטרוציטים. עם זאת,> יישום 3 דקות ב 500 מיקרומטר גם לתייג neuroblastsבין אם הקצה הוא מעל או מתחת לפני שטח הפרוסה (JC פלטל, תצפית לא פורסם). הרשה לכביסה והתאוששות פרוסה ל30-45 דקות.

6. הדמית confocal של פעילות סידן

1. מצא את האזור של העניין ראשון עם מטרה בהספקים נמוכים כגון 4x או 10x. הנח במרכז השדה לפני שעבר למטרת כוח עליון. בנקודה זו, ניתן להעריך את הבריאות כללית על ידי ציון פרוסת המראה של תאי SVZ תחת לעומת פער התערבות (DIC). תאים בריאים מופיעים עגולים ושמנמנים. בנוסף, תאים בריאים יציגו-4 Fluo טעינה קלושה כאמורים אין טעינה בכלל או בהיר פלואורסצנטי (תא שמת).
2. מנמיך את מטרת הטבילה במים על האזור של עניין, שהוא עכשיו לצבוע טעון. כך או אובייקטיבי 40X או 60x כבר מספיק לצרכימים שלנו, למרות ש40X מספק שדה רחב יותר של נוף ומאפשר גישת פיפטה גדולה יותר. כאשר הדמיה מתחתפני שטח, לעתים קרובות אנו הולכים לפחות 15 מיקרומטר מתחת לפני שטח הפרוסה שבו הארכיטקטורה 3-dimentional ובריאות תא נשמרים טובה יותר.
3. ודא כי זלוף וואקום עובדים כראוי.
4. התקנת המיקרוסקופ, כך שרזולוצית זמן לשגות ורזולוציה מרחבית מוגדרות לשיעורים רצויים. למיקרוסקופיה confocal, גורמים אלה חייבים להיות מאוזנים כעלייה ברזולוציה של זמן גורם בדרך כלל לאובדן של רזולוציה מרחבית בשל אופי הסריקה של המערכת. לפעילות סידן, שצלמנו בערך כל פריים שני עם רזולוצית 512x512 פיקסלים. אם מספר ערוצים שנרכשו בנפרד נחוצים, זה ישפיע גם על מחירי רכישה. הגדרת משך זמן של סרט (2-10 דקות).
5. ליזום לרוץ. אם ביצוע מחקרים פרמקולוגיים, לשטוף ביריבים או אגוניסטים הלא להקהות רגישויות לפחות 5-10 דקות, ולאחר מכן להפוך את סרט אחר של 5-10 דקות. אגוניסטים שעשויים להפחית רגישות הקולטנים יכולים להיות מיושמים בחריפות, כגון באמצעות יחסי ציבורessure פיפטה שליטת micromanipulator.

7. ניתוח סידן

ניתוח כדלקמן נהלים סטנדרטיים שתוארנו בפרסומים עבירים ^2-4. F ₀ (כלומר בסיס) ו-F הם בהתאמה עוצמות הקרינה הממוצעות שנמדדו לאורך כל האזורים של עניין (Rois) והחזר השקעה בכל אחד,. שינוי בפלואורסצנטי נחשב לCa ^{2 +} עלייה אם זה היה> 15% F / F ₀ עלייה. ² שינויים תאיים ⁺ Ca חושבו באמצעות Calsignal ^5.

8. נציג תוצאות

הצלחנו להשיג טעינה סלקטיבית של תאי SVZ בהתאם לפרוטוקולי טעינת הצבע שתוארו לעיל ובמקומות אחרים ^2-4,6. טעינת אמבטיה או יישום לחץ על משטח פרוסת Fluo-04:00 (4-5 או 250 מיקרומטר, בהתאמה) התוויות בעיקר neuroblasts. בעוד יישום לחץ יכול לטעון neurobנמשך מהר יותר מטעינת אמבטיה בפרוסה אחת, טעינת אמבטיה מאפשרת טעינה בו הזמנית של מספר פרוסות. אנו מאשרים את זהותו של תאים שכותרתו כneuroblasts ידי (1) אם הם מציגים התנהגות נדידה ^4,7, (2) המורפולוגיה שלהם, (3) מכתים שלילי של sulforhodamine 101, צבע astrocyte ספציפי ³ או (4) צביעה החיובית עם ביטוי DCX-DsRed (JC פלטל, תצפית לא פורסם). Neuroblasts להעביר במהירות (ממוצע של 60 מיקרומטר / שעה) בטמפרטורה פיזיולוגית ^4,7-9, אבל התנועה שלהם יכולה להיות בקלות נצפתה גם בטמפרטורת חדר. התנועה של neuroblasts אינה מהווה בעיה בכל קשור להצבת אזורים-של אינטרס (ROI) כדי לעקוב אחר פעילות סיד מאז הסרטים שלנו הם בדרך כלל קצרים בזמן. עם זאת, במשך תקופות ארוכות המתינו, כמו במהלך חילופי פתרון תרופתי, חוקרים צריכים להיות זהירים כדי להתאים Rois בשליטה ותקופות טיפול. אין זה נדיר עבור neuroblasts לנדוד פנימה או החוצה מאני תחום maging או מוקד מטוס.

יישום לחץ של Fluo-04:00 (250 מיקרומטר) עמוקים לתוך הפרוסה ולתקופה מוגבלת (<2 דקות) מעדיף מתייג SVZ האסטרוציטים ^2. תיוג astrocyte אומת על ידי תיוג חיובי עם sulforhodamine 101 והמורפולוגיה שלהם, בעיקר על ידי הנוכחות של תחזיות וendfeet על כלי דם שתארנו ³ לאחרונה. שימוש בשיטות אלה, יש לנו נצפו פעילות ספונטנית בשניהם neuroblast SVZ ואוכלוסיית astrocyte (איור 1). הפעילות בהאסטרוציטים לעתים לובשת צורה של גלים העוסקים ³ כלי דם. יתר על כן, באמצעות הדמית סידן כassay, היישום של אגוניסטים התרופתיים גילה או אשר ביטוי של GABA _A קולטנים על neuroblasts והאסטרוציטים ^6, AMPA וקולטני NMDA על neuroblasts ^4.

דמויות

1 "src =" / files/ftp_upload/4071/4071fig1.jpg "/>
איור 1. הפצת פעילות הסידן בהאסטרוציטים. () נציג ממוצע תמונה מהקלטת הזמן לשגות פעילות הסידן. האסטרוציטים ב SVZ היו עמוסים ביישום לחץ של Fluo-4:00 עמוקים לתוך הפרוסה. סרטים נרכשו ב 0.75 בזמן של צעדים. אזורים של עניין (ROI) מונחים על תאים מציגים פעילות. (ב) עקבות מRois מונחות על תאים מהסרט המצויר ב(). עקבות סוננו עם ממוצע נע ומנורמל. הסולם האנכי מייצג 2 x ΔF / F ₀ כאשר F הוא עוצמת האות וF ₀ הוא האות הבסיסית הממוצעת וΔF = FF _0.

איור 2. התמונה של מערכת זלוף. קצה אחד של צינור שקוע ב95% O _2/5% CO ₂ גז-pפתרון erfused. אז הפתרון הוא perfused דרך הצינור ולחדר האמבטיה על ידי משאבת peristaltic (לא מוצג). הקצה השני מוכנס לתוך מפרצון הפתרון של חדר האמבטיה רכוב על פלטפורמה. אז טיפ השאיפה מחובר לשקע הפתרון של החדר ונקבע ברמה כדי לקבוע את גובה פתרון. מהשקע, קצה השאיפה מחובר לקו הוואקום, שaspirates הפתרון מהחדר למכל אשפה. מערכת זלוף מוצגת מבמת מיקרוסקופ לבהירות חזותית.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

הדמית סיד של תאי SVZ נעשתה שימוש כדי ללמוד את הדפוסים בפעילות ספונטנית בneuroblasts ^10, ערוץ ביטוי הקולטן בשני neuroblasts והאסטרוציטים ^4,6,8 וגלי סיד astrocytic ^3. מאחר ותאים בSVZ הם או לא בוגרים או בעלי תכונות גליה, הם לא יירו פוטנציאלי פעולה ^11,12, כלומר שינויים באלפ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
מומס	חברה	מספר קטלוגים	דיסקציה (מ"מ)
סוכרוז	סיגמא	S0389	נתיחה: 147 מ"מ ACSF: 0 מ"מ
NaCl	סיגמא	S9888	נתיחה: 42 מ"מ ACSF: 126 מ"מ
KCl	סיגמא	P3911	נתיחה: 2.5 מ"מ ACSF: 2.5 מ"מ
MgCl 2 0.6 H 2 O	סיגמא	M9272	נתיחה: 4.33 מ"מ ACSF: 1 mM
Nah 2 PO 4. H 2 O	סיגמא	S8282	נתיחה: 1.25 מ"מ ACSF: 1.25 מ"מ
גלוקוז	סיגמא	G8270	Dissection: 10 מ"מימ ACSF: 10 מ"מימ
3 NaHCO	סיגמא	S6014	נתיחה: 26 מ"מ ACSF: 26 מ"מ
CaCl 2 0.2 H 2 O	סיגמא	C3306	נתיחה: 1.33 מ"מ ACSF: 2 מ"מ

			[כותרת]
שם	חברה	מספר קטלוגים	תגובות
Vibratome	ליקה	VT 1000s
Super Glue	Surehold או 3M	Surehold 3G Super Glue או 3M וטרינר בונד
כלי נתיחה	Roboz או טד פלה
Fluo-04:00 לצבוע בסידן רגיש	Invitrogen	F14201
אורגון גרין BAPTA-01:00 לצבוע בסידן רגיש	Invitrogen	O6807
ה-F-127 20% פתרון Pluronic בDMSO	Invitrogen	P3000MP
confocal מיקרוסקופ הזקוף	אולימפוס	FV300 או FV1000
מטרות מי טבילה	אולימפוס	LUMPlanFl 40 x W / IR (NA 0.80); LUMPlanFl 60 x W / אני (NA 0.90)
Micromanipulators	סאטר	MPC-200/MPC-325/MPC-385
<בקר לחץ/ Td>	פארקר Hannifin	Picospritzer	<3 PSI במהלך יישום
פיפטה חולץ	סאטר או Narshige	סאטר P-97 או Narshige PP-830
pipettes זכוכית	סאטר	BF150-110-10	ID: 1.10, OD: 1.50
משאבת peristaltic	הרווארד Apparatus	דגם 720	קצב זרימה: 1 מ"ל / דקה
אמבטיה קאמרית	וורנר מכשירים	RC-26 GLP	פרופיל נמוך מאפשר לאישור אובייקטיבי
צנור	Tygon
בקר טמפרטורה	וורנר מכשירים	TC-324B/344B