עכבר דגם orthotopic של סרטן המעי הגס

Summary

שתי טכניקות שניתן להשתמש בהם כדי לבסס את המודל הזה: הזרקה של השעיה תא סרטני בקיר cecal או השתלה של פיסת גידול תת עורי על cecum. מודל זה שימושי לחקר התפתחות טבעית של סרטן המעי הגס בדיקות סוכני טיפולית חדשה נגד סרטן המעי הגס.

Abstract

המודל הגידול המסורתי תת עורי הוא פחות אידיאלי לחקר סרטן המעי הגס. מודלים העכבר orthotopic של סרטן המעי הגס, אשר תכונה תאים סרטניים הגדלים במיקום הטבעי שלהם, לשכפל מחלות אנושיות עם איכות גבוהה. שתי טכניקות שניתן להשתמש בהם כדי לבסס את המודל הזה. טכניקות שניהם דומים דורש הרדמה העכבר laparotomy לחשיפה של cecum. אחת הטכניקות כולל הזרקה של השעיה סרטן המעי הגס התא בקיר cecal. תאים סרטניים גדלים הראשון תרבות, שנקטפו כאשר subconfluent ומוכן כמו השעיה תא בודד. נפח קטן של תאים מוזרק באיטיות, כדי למנוע דליפה. השיטה האחרת כרוכה השתלה של פיסת גידול תת עורי על cecum. עכבר עם גידול הוקמה בעבר המעי הגס תת עורית היא להרדים את הגידול הוסר באמצעות טכניקה סטרילית. היצירה הגידול מחולק לחתיכות קטנות להשתלה עכבר אחר. לפני ההשתלה, הקיר cecal ניזוק קלות כדי להקל על חדירת תאים סרטניים. הזמן לפתח גידולים ראשוניים גרורות בכבד ישתנו בהתאם הטכניקה, שורת תאים, ומינים העכבר בשימוש. זה מודל העכבר orthotopic שימושי לחקר התפתחות טבעית של סרטן המעי הגס בדיקות סוכני טיפולית חדשה נגד סרטן המעי הגס.

Protocol

I. הכנה Cell

1. בתאי סרטן המעי הגס גדלים בתרבות שנקטפו כאשר subconfluent.
2. ההשעיה תא בודד הוא הכין פוספט שנאגרו מלוחים ושמרה על הקרח.

השנייה. גידול הכנה

1. עכבר עם גידול הוקמה בעבר המעי הגס תת עורית היא מורדמים.
2. הגידול הוסר תת עורית באמצעות טכניקה סטרילית מחולק 2-3 חתיכות מ"מ
3. חתיכות הגידול נשמרים פוספט שנאגרו מלוחים על הקרח.

ג. עכבר הכנה

הערה: במעבדה שלנו אנו משתמשים בשאיפה isoflurane להרדים את העכבר, לחילופין, ניתן להשתמש בזריקות הרדמה כדי להשיג את אותו אפקט

1. עומק ההרדמה היא הוערכה באמצעות צביטה הבוהן. לא צריך להיות שום לסגת רפלקס עם קמצוץ הבוהן.
2. אנטיביוטיקה יכולה להינתן בשלב זה.
3. עכבר הרדים, אשר היה מגולח בעבר, ממוקם כראוי.
4. הבטן היא prepped עם פתרון בבטאדין.
5. הבטן אתר כירורגי הם עטופים בצורה סטרילית.

IV. Laparotomy

1. ניק קטן עשוי בעור
2. שרירי הבטן הקיר הוא תפס והרים
3. חלל הבטן הוא נכנס להב יחיד של המספריים משמש לדחוף את התוך בטני תוכן משם
4. החתך מורחב 2-3 ס"מ

V. חשיפה של cecum

1. Cecum עם כיס סיום עיוור שלו מזוהה exteriorized
2. Cecum הוא מבודד משאר של העכבר בעזרת מראש לחתוך, גזה סטרילית
3. מלוחים חם משמש כדי לשמור על לחות cecum

VI. הזרקה של תאים לתוך החומה Cecal

1. G 27 או מחט עדינה משמש להזריק נפח 50 μL של תאים לתוך הקיר cecal
2. המחט מוסרת
3. הזריקה נבדק כדי להבטיח שאין דליפה
4. Cecum הוא חזר אל חלל הבטן

VII. השתלה של גידול על גבי cecum

הערה: בנוסף הזרקת תאים לתוך הקיר cecal, גישה חלופית היא השתלת הגידול אל cecum

1. דמות של תפר 8 מושם על cecum באמצעות 6-0 או 7-0 תפר בגודל
2. הקיר cecal ניזוק קלות
3. לאחר מכן, פיסת הגידול ממוקם
4. תפר הוא כבול
5. Cecum הוא חזר אל חלל הבטן

VIII. דופן הבטן עכבר סגירת ושחזור

1. הקיר עכבר בטן סגור באמצעות שלושה תפרים קטע באמצעות 3-0 או 4-0 תפר בגודל
2. לחלופין, אפשר להשתמש תפר פועל פשוט
3. לאחר הניתוח משככי כאבים וכן בולוס נוזלים יכולה להינתן בשלב זה
4. העכבר הוא מותר להתאושש מן ההרדמה.

הערה: עם הרדמה נשאפים זה בדרך כלל לוקח 30 שניות

IX. תוצאות - הגידול הראשוני ו גרורות בכבד

הגידול הראשוני - הראו באתרו (A) עם עדות neovascularization (ב); על צביעת H & E, גידולים פולשניים מקומי (C)

גרורות בכבד - הראו לשעבר vivo (ד)

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

למרות העכבר מודלים תת עורית גידול קל להקים לפקח, ברור כי מודל זה לא יכול לשכפל את האתר האנטומי המקורי של סרטן המעי הגס. בשל השוני microenvironment, תאים סרטן המעי הגס גדל מתחת לעור הוכחו לשנות הפנוטיפ שלהם כמעט תמיד נכשלים התקדמות גרורות ^1,2. למעשה, תגובת הגידול לטיפול יכולים להשתנות...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cell culture media and components			will vary depending on cell line used
Phosphate Buffered Saline	BioWhittaker	17-512F	also sold by a number of other vendors
15 mL centrifuge tubes, polypropylene	Corning	430790
6 well plates with lid	BD Biosciences	353046
Iris forceps, straight, serrated tips	World Precision Instruments, Inc.	15914	best to have a pair of these instruments
Iris dissecting scissors, straight, sharp	World Precision Instruments, Inc.	14393
Needle Holder (regular)	World Precision Instruments, Inc.	14109
Needle Holder (Castroviejo)	World Precision Instruments, Inc.	14137
Cidex Plus	World Precision Instruments, Inc.	7364	instruments should be autoclaved periodically, but may also be sterilized by soaking in Cidex
6-0 or 7-0 suture			for cecum; courtesy of Department of Surgery, UCSF
3-0 or 4-0 suture			for abd wall; courtesy of Department of Surgery, UCSF
Anesthetic machine / Isoflurane	J.A. Baulch and Associates	3206	also sold by a number of other vendors
Heating Pad, disposable, 6" x 6"	Prism Technologies	20419
Tape, orange, 13 mm x 13 m	Fisher Scientific	15901F	for restraining anesthetized mouse
Pro-Cord/Cordless Trimmer	Oster Professional Products	78997-010	for shaving mouse fur
Betadine	Fisher Scientific	19-027132	may also be purchased at any medical supply store
2 x 2 gauze, 3-ply	Johnson & Johnson	7635	may also be purchased at any medical supply store
Sterile Field, Barrier, 16" x 29"	Johnson & Johnson	0905	may also be purchased at any medical supply store
Cotton tipped applicators, 6"	Fisher Scientific	14-960-3Q	may also be purchased at any medical supply store
Syringe, 10 cc, Luer lock tip	BD Biosciences	309604
Syringe, 1 cc, tuberculin, slip tip	BD Biosciences	309602
27 1/2 G needle	BD Biosciences	305109
30 G needle	BD Biosciences	305106