הערכת התפקוד הסנסורית בעכברי מודל של מחלת פרקינסון

Summary

בהפרעות ומחל פרקינסון תנועה באופן כללי, מבחני התנהגות רגישים ואמינים הם חיוניים לבדיקה הרפוי פוטנציאלי חדשה. כאן, אנו מתארים לניהול סוללה של בדיקות הסנסורית לעכברים שרגישים לדרגות שונות של פגיעה במערכת nigrostriatal ושימושית למחקרים פרה.

Abstract

מדדי תוצאת התנהגות רגישות ואמינים הם חיוניים להערכה של טיפולים טיפוליים פוטנציאליים בניסויים פרה למחלות ניווניות רבות. במחלת פרקינסון, הסנסורית בדיקות רגישות לדרגות שונות של בעיות בתפקוד nigrostriatal הן יסוד לבדיקת היעילות של תרופות פוטנציאליות. צעדים הסנסורית אמינים ואלגנטיים למדי קיימים לחולדות, אולם רבים מהם הבדיקות הסנסורית מידת סימטריה בתוך החולדה ואינם מתאימים לחלוטין לדגמים החדשים יותר של העכבר הגנטיים פ"ד. יש לנו להרכיב סדרת בדיקות הסנסורית בהשראת את הבדיקות הרגישות בחולדות ומותאמות לעכברים. הסוללה המבחן הדגישה במחקר זה נבחר ל) את הרגישות שלו במגוון רחב של מודלים עכבר של פ"ד, ב) קלות ביישום למחקר, וג) ההוצאות נמוכות שלה. בדיקות אלו הוכיחו שימושיות באפיון מודלים עכבר גנטי רומן של פ"ד, כמו גם בבדיקת סירential מחלה שינוי-טיפולים.

Introduction

מחלת הפרקינסון (PD) היא הפרעת ניווניות מתישה בעיקר מאופיינת באובדן ההדרגתי של נוירונים בדופאמין nigra substantia ופיתוח של תכלילים גוף לוי במערכות מרכזיות והיקפיות. חולים סובלים מליקויים הסנסורית, כולל bradykinesia, רעד, נוקשות, חוסר יציבות ויציבה שלהחמיר על פני זמן. למרות צורות נדירות, משפחתיות של המחלה התגלתה ב -15 השנים האחרונות, הובילו לזיהוי של מטרות רומן חשובות לרפויים מחלה משנות-פוטנציאליות. מוטציות בגנים מקודדי synuclein אלפא, פרקין, DJ-1, LRRK2, וATP13A2 בין יתר לסמן את הפיתוח של "דור" חדש של מודלים של בעלי חיים של מחלת הפרקינסון, מודלים עכבר גנטיים.

מדדי התנהגותיים שאינם המושרה סמים מצוינים קיימים למודל החולדה 6 hydroxydopamine (6-OHDA) חד צדדי נחקר רב של מחלת פרקינסון. אלה כוללים מבחנים לאיבר השימוש אסימטריה, תנועהייזום, הזנחה החושית, יכולות להגיע, ולאחרונה קולות קוליים ^1-6. בדיקות אלה רגישות לדרגות שונות של אובדן תא עצב דופמין nigrostriatal והיו בשימוש נרחב כדי להעריך את היעילות של סוגים שונים של תרופות פוטנציאליות ^7-11. עם זאת, עם מודלים העכבר הגנטיים שאין הסכמה ברורה על הבדיקות הסנסורית הטובות ביותר לשימוש או כמה לשימוש. זה בעייתי כאשר אפיון מודל עכבר גנטי רומן, במחקרים פרה, וכאשר מנסים לערוך השוואות בין דגמים. בעשור האחרון יש לנו עבדנו כדי להרכיב סוללה של בדיקות הסנסורית לעכברים דומים למה ששמש בהצלחה בחולדות. הבדיקות המתוארות במאמר זה היו בשימוש כדי לעזור לאפיין מודלים עכבר גנטיים רבים של פ"ד ומשמשות כיום במחקרים פרה בדיקת פוטנציאל רומן ¹² הרפוי.

הבדיקות הנפוצות ביותר להשתמשד להעריך את התפקוד מוטורי בעכברים הם פעילות בשדה הפתוח ומבחן rotarod של תיאום ^13. למרות שגם במבחנים האלה הם אוטומטיים, קלים יחסי לשימוש, ומספק מידע על תפקוד הסנסורית, הם לעתים קרובות חוסר הרגישות נחוצה כדי לזהות שינויים עדינים במערכת הדופאמין nigrostriatal. לדוגמה, בעכברים חסרי פרקין עם שינויים עדינים בתפקוד דופמין אינם מציגים ליקויים בrotarod אבל לעשות את ליקויי רכב תצוגה במבחן קורה מאתגר ^14. בנוסף, עכברים שטופלו במינונים מתונים של עצבי 1-מתיל-4-פניל-1-,2,3,6 tetrahydropyridine (MPTP) לא מראים על ליקויי rotarod אבל יש לי שינויים משמעותיים בהליכה וליקויים במהופך בדיקת רשת ^15. לכן, מחקרים שהשתמשו רק בrotarod להערכת פנוטיפי עלולים להחמיץ ליקויים עדינים יותר. גישה אופטימלית, לדעתנו, לאפיון התנהגותי היא אחד הכוללת תואר ראשוןttery של בדיקות, כי הם רגישים להיבטים שונים של תפקוד חושי ומוטורי, ושינויים עדינים בתפקוד הגרעינים הבזליים ^13-15. כאן אנו מתארים כיצד למדוד ולנתח את הפונקציה הסנסורית בעכברים באמצעות קרן חציית מבחן מאתגר, בדיקה של פעילות ספונטנית בגליל, ותגובה לגירויים חושי מבחן.

Protocol

בצורה אופטימלית עכברים צריכים להיבדק במהלך המחזור הפעיל שלהם (כהה). העכברים במעבדה שלנו נשמרים על מחזור אור / חושך הפוך המאפשר לנו לבחון בנוחות את העכברים בתקופה הפעילה שלהם (ושלנו). בדיקה אינה מתחילה עד לפחות שעה אחת במחזור הכהה. עם זאת, זה לא תמיד אפשרי עבור חוקר לשמור על חדר עכבר נפרד עם מחזור אור הפוך. במקרה זה, ניתן לבצע את כל שלוש הבדיקות במהלך מחזור האור, אך יש לזכור כי זמן כדי לעבור על הקורה, מספר הצעדים ומרים בגליל, וקשר וזמנים להסרת עשוי להיות ארוך יותר כאשר נבדקו בתקופה זו.

ניתן לבצע את כל שלוש הבדיקות המתוארות להלן על ידי ניסוי אחד, אבל למי שאינם מנוסים בטיפול ובעבודה עם עכברים או שיש לא מעט ניסיון במדידת התנהגות עכברים לאחר מכן הנסיין נוסף עשוי להיות נחוץ. במקרה זה הנסיין השני יכול לסייע עםמבחן הקורה המאתגר על ידי הנחת עכברים על הקורה בזמן הניסוי השני מתעד את המשפט או במבחן הסרת דבק הנסיין השני יכול להפעיל את שעון העצר ואילו במקומות אחרים המדבקה על החוטם ומקומות העכבר בכלוב.

1. נוהל חציית Beam מאתגר

1. הפוך 3 כלובי עכבר נקיים על שולחן או בתחנת עכבר שמשנה את הכלוב. מרפד את הכלובים עד באופן שווה, כך שהם יכולים לתמוך באורך של הקורה (1 מטר).
2. להרכיב את ארבעת חלקים מהקורה הרחב ביותר לקטע צר ומניח על גבי כלובי העכבר ההפוכים.
3. הנח את homecage של העכברים שבכוונתך לבדוק בצד שלה ובסופו של הקרן, כך שהקצה הצר של הקורה מוביל ישר לתוך homecage.
4. להרים את העכבר הראשון על ידי בסיס הזנב שלה ולתמוך hindlimbs עם כף היד שלך. מניחים את העכבר בקצה הרחב של הקרן ולוותר על זנבו ולהסיר האן שלךד.
5. בואו העכבר לרחרח ולהסתובב כדי להיות בכיוון טוב יותר למנגנון, אם העכבר מסתובב בעדינות להפנות אותו לכיוון הרצוי.
6. הרם homecage (גם אם יש לו את זה בcagemates) שמירה על אותה באותה התנוחה על צדו ולהביא אותו קרוב לעכבר המבחן. כעכבר המבחן מתחיל לנסות ולהיכנס לhomecage יזיז אותו בחזרה, כך שהעכבר לא נכנס אבל עושה צעד קדימה. תמשיך לעשות את כל הדרך הזאת את הקורה. בסופו של הדבר לאפשר את העכבר להיכנס homecage. לעשות את אותו תהליך עבור כל עכבר בכלוב. זהו המשפט הראשון "סיוע".
7. הקרן יש לנקות ביסודיות בין כלובים עם חומר חיטוי הניתן על ידי הטיפול בבעלי החיים או צוות וטרינרי. בתוך כלוב חשוב לנקות את כל כדורי צואה או שתן את הקרן לפני העכבר הבא הוא לרוץ, כי זה להסיח את העכבר הבא.
8. ברגע שכל העכברים בכלוב עברו ניסוי בסיוע אחד לאחר מכןלהרים את העכבר הראשון שוב ולמקם אותו בסופו של הדבר הרחב של הקורה. במידת צורך, עם היד שלך בעדינות לכוון את העכבר בכיוון הרצוי וקל לגעת בישבנה כדי לעודד אותו לעבור לאורכו של הקרן לhomecage שלה. אם העכבר מפסיק לרחרח או ללכת את הקרן לתקן את העכבר עם היד שלך או להרים אותו ולהניח אותו על אותו הסעיף שבו הלך משם. יש לך את היד בקרבת מקום כדי להנחות את העכבר לקצה הקורה. אתה רוצה לנסות ולמזער את העכבר לעצור ולחקור בזמן על הקורה. עוד זה נעשה במסגרת הכשרה פחות העכבר נוטה לעשות את זה במהלך בדיקה.
9. המשפט מסתיים כאשר העכבר מציב אחד forelimbs לhomecage. העכבר הבא יכול לאחר מכן לקבל משפטו 2 ^nd. עכברים לקבל סך של 5 משפטים ביום האימונים הראשון, לסירוגין בין עכברים, כך שכל עכבר יש מרווח של intertrial ~ 30 שניות או יותר. בדרך כלל על ידי עכברי הניסויים האחרונים יהיה לעבור לאורכו שלקרן, בכוחות עצמם, ללא צורך בתיקון.
10. 24 שעות מאוחר יותר ביום של אימון 2 יכול להתחיל. ביום 2 העכברים יקבלו 5 ניסויים נוספים באותו קורה הגדרה כמו ביום 1. העכברים לא צריכים צריכים שום סיוע, אך ייתכן שיהיה צורך לתקן או נגעו בצד האחורי כדי למנוע לעצור או לחקור.
11. 24 שעות מאוחר יותר ביום המבחן בפועל יכול להתחיל. ליום הבדיקה, הקרן מוגדרת באופן דומה ל2 ימי האימון הקודמים. עם זאת, כעת רשת רשת שמתאימה לכל רוחב קורה מונחת על החלק העליון של כל מקטע קורה. מצלמת וידאו משמש כדי להקליט את כל ניסויי חציית הקורה ויכולה להתבצע על ידי הנסיינים אחד או מרובים.
12. תווית כרטיס עם המידע החיוני ניסוי (תאריך, עכבר #, בדיקה #, וכו '). הנח כרטיס זה מול המצלמה ולהקליט במשך 2-3 שניות, כך שברור שהעכבר הוא נבדק ומה משפט זה הלאה.
13. העכבר ממוקם על המשטח העליון של הרשת בקטע הרחב ביותר של הקרן ונרשםים שהוא נע לאורך הקורה. ההקלטה צריכה להיות קרוב מספיק כדי שכל אורכו של גופו של העכבר הוא נראה במצלמה. אם זה רחוק מדי אז התלושים קשים לראות ואם הוא קרוב מדי אז תנועות גפיים יכולות לפספס. המצלמה צריכה להיות ממוקמת כך שהרשת נמצאת באמצעו של הצופה.
14. ביום הבדיקה כל העכברים יקבלו 5 משפטים על הקורה לרשת על פני השטח.

2. ניתוח של וידאו Beam

1. ניתן לצפות בקטעי וידאו ישירות מהמצלמה או מחוברים לטלוויזיה או מחשב לתצוגת מסך גדול יותר. קלטות וידאו צריך להיות הבקיע ידי הנסיין עיוור לגנוטיפ ומצב טיפול בניסוי.
2. שגיאות עבור כל ניסוי הם הבקיע הוא שיחק כוידאו בהילוך איטי. התלושים או טעויות נספרים כאשר העכבר עומד בפני ולנוע קדימה. להחליק דרך או מחוץ לרשת נחשב שגיאה כאשר האיבר מחליק מעבר 0.5 ס"מ מתחת לפני שטח הרשת (באמצע הדרך למטה). כל התלושיםעשה אחרי עכבר מפסיק או מכוון את ראשו לצד אינם נחשבים לטעויות. אם העכבר לא זז קדימה ואיבר או איברים מחליק שוב ושוב דרך הרשת זה לא נחשב טעות. בקטע הצר של קרן הבסיס של hindlimbs יכול להיות בחלק העליון של הרשת ואת אצבעות הרגליים תלויות מהצד, זה לא נחשב לשגיאה.
3. צעדים גם נספרים בהילוך איטי. Hindlimb מול המצלמה משמש כדי לעקוב אחר מספר הצעדים. הספירה מתחילה כאשר העכבר הופך את הצעד הראשון שלה קדימה ומסתיים כאשר העכבר מציב forelimb לhomecage.
4. זמן לעבור הוא הבקיע באמצעות שעון עצר, והוא נעשה בזמן אמת. הטיימר התחיל כאשר העכבר מתחיל לנוע קדימה ומסתיים כאשר כפו הראשונה ממוקמת בhomecage.

3. פעילות ספונטנית בנוהל גליל

1. הפוך 3 כלובי עכבר נקיים על שולחן או בתחנת עכבר שמשנה את הכלוב. סדר שני כלובים ליד דואראח אחר ~ 18 ס"מ זה מזה, כך שהחלק הקדמי של הכלובים מתמודדים הנסיין. הכלוב שנותר ממוקם מאחורי שני כלובים האחרים וישמש לתמיכה במראה.
2. מניחים את חתיכת הזכוכית על גבי 2 כלובים ולמקם אותו כך הזכוכית נתמכת על ידי הקצה החיצוני של 2 הכלובים הראשונים.
3. הנח את הגליל על גבי הזכוכית והמראה בזווית מתחת לזכוכית, נשען על כלוב 3 ^rd בגב. הזווית יכולה לנוע בכל מקום בין 30 ° - 45 ° אבל יותר חשוב מהנוף הנשקף מהמראה יש לכלול בקוטר המלא של הגליל.
4. הגדר את מצלמת וידאו במול המראה ולהתאים גם את המראה ומצלמת וידאו עד שתוכל לראות את כל הקוטר של החלק התחתון של הגליל.
5. לכוון את השעון במשך 3 דקות ולתייג את כרטיס עם פרטי הניסוי החשובים (תאריך, עכבר #, וכו '). Videorecord התווית עבור 2-3 שניות.
6. מניחים את העכבר בשיא הגליל ועיתונות ואת הטיימר. RecORD העכבר לשלוש דקות. חשוב שהבדיקה הוא האזור שקט כמו רעשים ושיחה קולניים יכולים להסיח את הדעת בעכבר ובאופן פוטנציאלי לגרום להתנהגות הקפאה.
7. במהלך 3 דקות להשתמש ביד נגדית כדי לספור את המספר של אחורי העכבר עושה אילו בגליל. אחורי מוגדר כתנועה אנכית עם שני forelimbs מהרצפה, כך שהעכבר עומד רק על hindlimbs. בסוף 3 דקות להסיר את העכבר ולמקם אותו בחזרה לתוך homecage שלה.
8. נקה את הגליל והזכוכית עם חומר חיטוי הניתן על ידי הטיפול בבעלי החיים או צוות וטרינרי. אפשר פתרון הניקוי להתייבש לפני ששם את העכבר הבא בגליל.

4. ניתוח של פעילות ספונטנית

1. ניתן לצפות בקטעי וידאו ישירות מהמצלמה או מחוברים לטלוויזיה או מחשב לתצוגת מסך גדול יותר. את קלטות הווידאו יש הבקיע ידי הנסיין עיוור לגנוטיפ ומצב טיפול בניסוי.
2. צעדי forelimb נספרים כהוא שיחק בחזרה את הווידאו בהילוך איטי. צעד forelimb נספר כאשר חיה נעה גם forelimbs ברצף על הרצפה של הגליל בתנועה רצופה אחת. תנועת forelimb לא נספר אם הזמן בין התנועה של forelimb אחד וforelimb האחר הוא יותר מ 5 שניות. צעדי hindlimb נספרים באותו אופן כמו צעדי forelimb.
3. זמן מוקדש לטיפוח נמדד באמצעות שעון עצר ונגינה של וידאו בזמן אמת. התקפי טיפוח על החוטם, vibrissae, והגוף נמדדים.

5. הסרת דבק

1. מקום עכבר בhomecage בחדר הבדיקה או בתחנת עכבר משתנה כלוב.
2. הסר את סל המזין מהכלוב ולהחליף את מכסה הכלוב. לאפשר לעכברים / העכבר כדי להרגיל לחדר הבדיקות והכלוב ללא מזין במשך שעה 1.
3. לבדיקת שימוש בכלוב נקי למקום cagemates כך עכבר המבחן הוא רק אחד בhomecage.הסר ~ 3/4 של המצעים ולמקם אותו בכלוב הנקי עם cagemates.
4. בעורפו homecage עכבר הבדיקה על מנת לרסן אותה ובעזרת זוג מקום תווית דבק קטן אחד מלקחיים על חוטמו של העכבר. לחץ בעדינות את התווית שעל החוטם עם המלקחיים ושחרר את העכבר. מניחים את המכסה על הכלוב ולהתחיל סטופר. כאשר העכבר עושה ניסיון להסיר את התווית עם הרגליים הקדמיות שלה להקליט את הזמן. אם העכבר יוצר קשר, אבל לא להסיר את התווית ולאחר מכן להמשיך את שעון העצר הולך עד שאין להסיר אותו ולהקליט שזמן, כמו גם (ליצירת קשר וזמן ההסרה).
5. אם העכבר לא לפנות או להסיר את המדבקה בתוך 60 שניות ולאחר מכן את המשפט הסתיים והמדבקה מוסרת באופן ידני על ידי הנסיין.
6. מניחים את עכבר המבחן בכלוב הנקי ולהסיר את העכבר לצד ולמקם אותו בhomecage ולהתחיל בבדיקה. כל העכברים לקבל 3 ניסויים. חשוב להחליף בין עכברים ולא עושה את כל שלושת הניסויים בעכבר בפעם אחת. ניסויים שבו התווית נופלת או אינו מאובטחת על החוטם לא נספרים.

תוצאות

הקרן מאתגרת, הפעילות ספונטנית בצילינדר, ובדיקות להסרת דבק כל מבחני השימושיים ביותר של פונקציה הסנסורית בעכברים. מצאנו שינויים בתפקוד הסנסורית באמצעות בדיקות אלה במודלים של עכבר גנטי ורעל רבים של מחלת הפרקינסון, כולל נוקאאוט פרקין, פרקין Q311X, Pitx3-aphakia, synuclein אלפא overexpressing, ועכברי 6 hydroxydopamine חד צדדיים ^{14, 16-19}. כאן אנו מציגים נתונים שנאספו מעכברי overexpressing האנושי wildtype synuclein אלפא תחת אמרגן Thy1 (Thy1-aSyn) ועכברי Pitx3-aphakia ^18,20. על הקורה המאתגר שאופן מהימן לזהות שגיאות מוגברות לכל צעד בThy1-aSyn בהשוואה לעכברים (wildtype איור 1). באותה השורה של עכברינו גם לזהות ירידה חזקה בhindlimb דריכה בגליל שוב ושוב ( איור 2) ^{12, 16, 21}. במבחן הסרת דבק עכברי Pitx3-aphakia עם ירידה עמוקה בנוירונים הדופמין nigrostriatal להראות זמן גדל באופן משמעותי ליצור קשר עם השוואה לקבוצת ביקורת wildtype ( איור 3).

איור 1. שגיאות במאתגרים בwildtype (N = 13) וThy1-aSyn (n = 4) בגיל 4 חודשים.) שגיאות בצעד אומר, של חמישה מחקרים. B) ממוצע שגיאות בכל רוחב קורה. מייצג ** p <0.01 בהשוואה לבהתאמה wildtype עכברים. של תלמיד מבחן t.

איור 2. Hindlimb דריכה בצילינדר בwildtype (N = 13) וThy1-aSyn (n = 4) עכברים בגיל 4 חודשים. * מייצג p <0.05 בהשוואה לwildtype. של תלמיד מבחן t.

איור 3. פנו זמן בwildtype (N = 10) וPitx3-aphakia (n = 12) עכברים ב 4 שבועות של גיל. ** מייצג p <0.01 בהשוואה לwildtype. מאן ויטני U.

בדיקה פרמטרים אפשרויות ניתוח

מאתגר Beam	שגיאות	רוחב קורה (רק שגיאות) ממוצע של 5 ניסויים ניסויים בודדים
	זמן
	צעדים
פעילות ספונטנית	צעדים forelimb	ממוצע forelimb / hindlimb
	צעדים hindlimb
	Rears	ממוצע
	טיפוח זמן	ממוצע
הסרת דבק	זמן מגע	ממוצע חציון הכי טוב / הגרוע ביותר ציון זמן לתקשר עם זמן להסרת
	זמן להסרת

טבלה 1. סוללה הסנסורית פונקצית בדיקה: אפשרויות ניתוח.

Discussion

במחקר הנוכחי אנו מראים כיצד לבצע ולנתח את שלוש בדיקות שימושיות של פונקציה הסנסורית בעכברים. אלה כוללים את הקרן המאתגרת, פעילות ספונטנית בגליל, ותגובה לגירויים חושיים (הסרת דבק). בדיקות אלה נבחרו מהסיבות הבאות 1) אנחנו ואחרים מצאו להם להיות רגישים מאוד לדרגות שונות של בעיות בתפקוד דופאמין nigrostriatal במודלים גנטיים עכבר ^14,16-18, 2) רק כמות אימונים קצרה נדרשת לקרן ולטיפול בתגובה לגירויים חושיים בדיקות וברגע שאמן את מבחני ניתן לבצע בישיבת מבחן אחד, ו 3) את המחיר של כל הציוד הדרוש כדי לבצע את הבדיקות הוא די נמוך בהשוואה לרכישת ציוד אוטומטי יותר כגון rotarod והפתוח תאי שטח.

המבחן המאתגר הקרן הוא לא רק שימושי באיתור ביצועי מנוע וגירעונות בתיאום מודלים עכבר גנטי של מחלת הפרקינסון, אך שימושי גם אניn חשיפת ליקויים בעכברים-1-4-פניל-1 מהתיל שטופלו ,2,3,6 tetrahydropyridine ו6 hydroxydopamine טופלו ונוראפינפרין עכברים חסרים ^{19, 23-25.} בנוסף לכך, אנו מוצאים את הקורה המאתגר להיות פחות מושפע ממשקל גוף בהשוואה לבדיקות אחרות של ביצועי מנוע ותיאום (rotarod ומבחן מוט). זה מועיל במיוחד כאשר עובד עם עכברי זכרים בגיל שיכול לשקול עד 50 + גרם. בדומה לקורה, שינויים בפעילות ספונטנית הם נצפו באופן אמין בנוקאאוט פרקין, PQ311X, Thy1-aSyn, Pitx3-aphakia, וLRRK2 עכברים ^{14, 16-18, 26.} בדיקת הסרת הדבק היא גם רגישה למניפולציה גנטית כולל נוקאאוט פרקין, פרקין Q311X, Thy1-aSyn, וDJ-1 מוטציות נוקאאוט בעכברי ^{14,16, 17, 22.} בעכבר 6 hydroxydopamine טופל חד צדדי במבחן הסרת הדבק מתבצע באופן דומה לאופן בו נעשה בדרך כלל עם חולדות ^1,2. תווית הדבק מונחת על כפו כל שימושמלקחיים והזמן כדי להסיר את התווית נרשם. מצאנו כי עכברים 6 hyrdoxydopamine שטופלו יהיו להסיר את התווית מהאיבר מושפע לפני הסרת התווית על האיבר הפגוע ^19.

סוללה בדיקה זו היא קלה ליישום בהזדקנות מחקרים באמצעות טיפולים כרוניים אבל זה גם קל לשימוש במחקרים פרמקולוגיים. ברגע שהם מאומנים ומוכנים לבדיקת מבחן לתחנה ניתן להגדיר כל assay. בעלי החיים ולאחר מכן להפעיל באותו סדר בכל אחת מבדיקות. התרופה של עניין יכולה להינתן וברגע שיא ריכוז התרופה הרצוי הושג כל עכבר יכול להיבדק על הקורה ולאחר מכן עבר לגליל לשלוש דקות ולאחר מכן לבדיקת הסרת הדבק. מצאנו אסטרטגיה זו כדי לעבוד גם כאשר בודקים דופמין אגוניסטים שונים ^{ב18 עכברים, 21.} גם את הקרן והמבחנים להסרת דבק ניתנות לבדיקות חוזרות ונשנות, אך הפעילות ספונטנית בגליל מושפעת testi החוזרng וכתוצאה מכך הפעילות מופחתת לאורך זמן ^16. תלוי כמה חזק הוא הגירעון בעכבר אתה עדיין עשוי להיות מסוגל לזהות הבדלים בבדיקות חוזרות ונשנות ^ב16 הצילינדר. באופן כללי, התרגלות ופעילות מופחתת הוא ציין בהקדם החשיפה 2 לגליל לעומת זאת, אנו מוצאים כי אנחנו יכולים לקבל את רמות פעילות מספיקות כאשר אנו להפעיל את בדיקת הפעילות הספונטנית מייד לאחר חציית קרן במחקרים פרמקולוגיים ^18,21. מספר מפגשי בדיקת פעילות הספונטניים לכלול במחקר יהיה תלוי בזן עכבר (חלקם בהחלט פעילים יותר מאחרים) ומשך טיפול. במחקרים פרמקולוגיים שלנו בעכברים על C57BL מעורב / 6 X רקע DBA מדדנו פעילות בין 2-4 פעמים והפעלות הבדיקות הופרדו על ידי בשבוע ²¹ אחד.

בדיקות הקורה וגליל דורשות ניתוח שלאחר הבדיקה של התנהגויות videorecorded. להיבט זה של הניתוח זהחשוב במיוחד שיהיו לי מדרגים, כי הם עיוורים לתנאי הניסוי. כאשר אנו מאמנים מדרגים חדשים במעבדה שיש לנו את התנהגות האדם בציון קלטות וידאו שנותחו בעבר על ידי מומחה rater מהמעבדה. הקריטריונים הם הסבירו והראו למדרג חדש ולאחר מכן האדם מתחיל להבקיע את הקלטות נותחו בעבר בעצמם. הציונים הם לאחר מכן בהשוואה לדירוגי המומחה ". האדם אינו רשאי נתונים חדשים שיעור עד שהם נמצאים ברמת דיוק 95-98% מהמומחה. כל הנתונים הוא באופן אקראי ואז ספוט בדק עבור דיוק על ידי מומחה rater.

הסוללה של בדיקות שתוארו במחקר זה נועדה להעריך את התפקוד הסנסורית בעכברים. עם זאת, בכל פעם שאפיין במודל עכבר של מחלת רומן זה תמיד חשוב לעשות בדיקה בסיסית של בעלי החיים גם כן. משקל גוף והטמפרטורה צריך להיות במעקב לאורך כל בדיקות ויש לציין את כל התנהגויות חריגות, כמו הסרת vibrissae או CLasping של hindlimbs כשהרים בזנבו. הערכות נוירולוגיות בסיסיות מתוארות במקום אחר בפירוט ^27-29.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Challenging beam apparatus	Starks Plastics	Segment 1= 3.5 cm Segment 2= 2.5 cm Segment 3= 1.5 cm Segment 4= 0.5 cm	Contact information: 11276 Sebring Dr. Forest Park ,OH 45240 USA Ph +1 (513) 541-4591 Fax +1 (513) 541-6773
Cylinder	Starks Plastics	15.5 cm diameter 12.7 cm height	Contact information: 11276 Sebring Dr. Forest Park ,OH 45240 USA Ph +1 (513) 541-4591 Fax +1 (513) 541-6773
Mesh Grid Wiring	Ace Hardware	1 cm2
Mouse Cages	Ancare	19 x 29 x 12.7 cm
Glass	Ace Hardware	19 cm2
Mirror	Ace Hardware	18 x 13 cm
Camcorder	Sony HDR-HC9
MiniDV Tapes	Sony DVC premium	90 min long play
Labels	AveryColor Coding Labels	6.35 mm diameter (1/4" Round)