JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

פרוטוקולי נזק קלים מרובים כבר תאר לקולטני אור וכתוצאה מכך לנזק לגרום תגובת התחדשות רשתית בדג זברה מבוגר. פרוטוקול זה מתאר שיטה משופרת, שניתן להשתמש בבעלי החיים פיגמנט ושפוגע ברוב המכריע של מוט וקולטני אור חרוט על פני כל הרשתית.

Abstract

ניוון רשתית הנגרמת אור (LIRD) משמש בדרך כלל בשני מכרסמים ודג זברה לניזק מוט וקולטניים אור חרוט. בדג זברה מבוגר, ניוון photoreceptor מפעיל תאי גלייה מולר להזין מחדש את מחזור התא ולייצר אבות חולפים-הגברה. אבות אלה ממשיכים להתרבות כפי שהם נודדים לאזור הפגוע, שבו הם בסופו להצמיח קולטניים אור חדש. נכון לעכשיו, ישנן שתי פרדיגמות LIRD-בשימוש נרחב, כל אחד מהם התוצאות בדרגות שונות של אובדן photoreceptor והבדלים מקבילים בתגובת ההתחדשות. ככלים יותר גנטיים ותרופתיים זמינים כדי לבדוק את תפקידם של גנים בודדים של ריבית במהלך רגנרציה, יש צורך בפיתוח פרדיגמה LIRD חזקה. כאן אנו מתארים פרוטוקול LIRD שגורם לאובדן נרחב ועקבי של שני קולטניים אור מוט וחרוט שביש לנו שילוב השימוש בשתי טכניקות LIRD הוקמו בעבר. יתר על כן, פרוטוקול זה יכול להיות מורחב לשימוש בבעלי החיים פיגמנט, אשר מבטל את הצורך בשמירה על קווים מהונדסים של עניין על רקע בקן ללימודי LIRD.

Introduction

ניוון רשתית הנגרמת אור (LIRD) משמש בדרך כלל בשני מכרסמים ודג זברה לניזק מוט וקולטניים אור חרוט. בדג זברה מבוגר, ניוון photoreceptor מפעיל תאי גלייה מולר להזין מחדש את מחזור התא ולייצר אבות חולפים-הגברה. אבות אלה ממשיכים להתרבות כפי שהם נודדים לאזור הפגוע, שבו הם בסופו להצמיח קולטניים אור חדש. נכון לעכשיו, ישנן שתי פרדיגמות LIRD-בשימוש נרחב, כל אחד מהם התוצאות בדרגות שונות של אובדן photoreceptor והבדלים מקבילים בתגובת ההתחדשות. ככלים יותר גנטיים ותרופתיים זמינים כדי לבדוק את תפקידם של גנים בודדים של ריבית במהלך רגנרציה, יש צורך בפיתוח פרדיגמה LIRD חזקה. כאן אנו מתארים פרוטוקול LIRD שגורם לאובדן נרחב ועקבי של שני קולטניים אור מוט וחרוט שביש לנו שילוב השימוש בשתי טכניקות LIRD הוקמו בעבר. יתר על כן, פרוטוקול זה יכול להיות מורחב לשימוש בבעלי החיים פיגמנט, אשר מבטל את הצורך בשמירה על קווים מהונדסים של עניין על רקע בקן ללימודי LIRD.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

כל ההליכים המתוארים בפרוטוקול זה אושרו על ידי ועדת השימוש בבעלי החיים בבית הספר לאוניברסיטה ויין סטייט לרפואה.

1. עיבוד אפל

  1. העברה ~ 10 דגים בוגרים בקן או פיגמנט ממערכת הדיור הרגיל למתחם חשוך. אם זמין, השתמש במתחם אפל שבנוי לתוך מודול דיור דג הזברה, אשר מאפשר זרימת מים רגילה באמצעות הטנק. (אם מערכת כזו אינה זמינה, למקם את האקווריום במתחם חשוך לגמרי, והקפד לאוורר את הדגים עם חמצן).
  2. שמור את הדגים בחושך במשך 10 ימים. כשמאכילים את החיות או הוספת דגים חדשים לתיבה הכהה, הקפד להעביר מהר ככל האפשר, כדי למנוע חשיפת הדג לתקופה ארוכה של אור.

2. חשיפה לאור UV

  1. ודא את כוח למקור UV הוא כבוי. הסר את נימה אור UV מstereomicroscope ניאון.
    1. השתמש הפוך15 ס"מ קוטר זכוכית צלחת פטרי (או משהו בגובה 2 ס"מ דומה) כמעמד לנימת UV. קלטת צלחת פטרי לספסל המעבדה.
    2. קלטת חוט להט אור UV לחלק עליון של צלחת פטרי ההפוכה. מסדרים כך ש~ 2 מ"מ של סוף שנתי ה סככות נימה צלחת פטרי.
  2. השג כוס זכוכית 250 מ"ל. לכסות חצי מהחלק התחתון, צדדים, וחלק אחורי של הכוס עם נייר אלומיניום, כדי לוודא שצד "המבריק" של רדיד פרצופים הפנימי של הכוס. אם הכוס הוא סיים את לימודיו, לכסות את המחצית המנוסחת של הכוס בנייר כסף, והשאיר את המחצית ברורה של הכוס חשופה.
  3. מלא את כוס 250 מ"ל עם 100 מיליליטר מים ממערכת מתקן הדגים.
  4. מניחים את כוס 250 מ"ל בכוס ליטר 4. מלא את כוס L 4 עם מים עד למפלס המים הוא גם עם קו המים 100 מ"ל בכוס 250 מ"ל.
  5. הוסף מקסימום של 10 בעלי חיים שטופלו בחושך לכוס 250 מ"ל. לכסות את כוס 250 מ"ל עם חתיכה קטנה של אלומיניוםנייר כסף.
  6. הנח את המנגנון כולו כוס מייד בסמוך לחוט להט UV. החוט צריך להיות נוגע ללב מחוץ לכוס L 4 ומול החלק החשוף של כוס 250 מ"ל. ודא כי כוס 250 מ"ל מרוכזת בחלק התחתון של כוס L 4.
  7. מקם מסך גדול, אטום מאחורי כוס 4L, המאפשר לבעלי החיים שנחשפו, אך למנוע כל אנשי מעבדה מלראות את קצה חוט UV. אזהרה: ודא שהמחסום הזה הוא במקום לפני הפעלת כוח למקור קרינת UV.
  8. הפעל את מקור כוח UV. הגדרת טיימר למשך 30 דקות. הנח כל מה תוויות אזהרה הדרושות כדי להבטיח כי אנשי מעבדה תמימים לא לחשוף את עצמם בטעות לקרינת UV.
  9. לאחר 30 דקות, לכבות את מקור כוח UV. הסר את כוס 250 מ"ל עם הדגים. הערה: אם סבבים רבים של חשיפה לקרינת UV נדרשים, תנו את מקור כוח להתקרר (~ 20 דקות) לפני שחוזר על פרוטוקול החשיפה. הקפד להחליף tהוא 100 מיליליטר מים עם מים טריים למערכת כל חשיפה. המים בכוס L 4 לא צריכים להיות מוחלפים.

3. חשיפה לאור מנורת הלוגן

  1. מעבירים את הדג מכוס 250 מ"ל לתוך האקווריום אקריליק ברור 1.8 ליטר. מלא את המכל לסימן הצפה.
  2. להגדיר את אזור טיפול אור מנורת ההלוגן. השג ארבע 250 מנורות הלוגן W שירות מחנות לחומרי בניין מקומי. , מול שתי מנורות באותו הכיוון לארגן מלבד 29 ס"מ במרכז. מסדרים את שתי מנורות האחרות באופן דומה.
    1. הנח את הסט השני של מנורות, כך שהם עומדים בפני את הסט הראשון של מנורות, והשאירו ~ 73 ס"מ בין שני הסטים של מנורות. זה יוצר אזור טיפול אור בצורת מלבן של 29 ס"מ על 73.
  3. השג מאוורר קטן מחנות לחומרי בניין מקומי. הנח את המאוורר במרחק שווה בין שני הסטים של מנורות, ממש מחוץ לאזור טיפול אור.
  4. הנח שני טנקים 1.8 ליטר מלאים במים במרכזאזור טיפול אור, במרחק שווה בין שני הסטים של מנורות. המרחק בין המנורות והקיר החיצוני של הטנק צריך להיות ~ 29 ס"מ. הערה: גם אם טיפול 10 דגים רק בטנק אחד 1.8 ליטר, השתמש בהסדר זה. שני הטנקים יש צורך לשמור על טמפרטורת המים של כל טנק בטווח המתאים.
  5. הנח aerator חמצן בכל המכל.
  6. כיסוי כל טנק עם מכסי אקריליק ברורים, והשאיר את פער ~ 2 ס"מ בקצה הקרוב ביותר למאוורר. מסדרים את המאוורר כך שהוא יפוצץ את האוויר לתוך הפער הזה. הנח מדחום באחד או שני הטנקים.
  7. הפעל את כוח האורות, המאוורר, וaerators. לשמור על טיפול באור לתקופה של עד 4 ימים. הדגים לא צריכים להיות מוזנים במהלך טיפול האור, כמו זה ישפיע על איכות מים ותוצאה במתח יותר לבעלי החיים.
  8. מעקב אחר רמת טמפרטורה ומים על בסיס יומי. לשמור על הטמפרטורה ב30-33 ° C. במידת צורך, להתאים את המהירות ו / או מרחק בין הטנקים וli אוהדghts.
    1. למעלה את כל המכל עם מים מערכת כנדרש, בדרך כלל מדי יום.
    2. השתמש תמיד בדג זברה מבוגר בריא (בדרך כלל 6-9 חודשים של גיל) כדי לשמור על שיעור הישרדות של כמעט 100%. עם זאת, אם דגים נמצאו מתים במכל, להסיר אותו מייד ולהחליף את המים בכל רחבי הטנק.

4. אוסף רקמות

  1. 48 שעות לאחר תחילת טיפול אור ההלוגן להסיר את הדגים מאזור הטיפול.
    1. הכן מקבע פורמלדהיד האתנולית טרי (1 פורמלדהיד 37% חלק, 9 חלקים 100% אתנול).
    2. להרדים דג הזברה עם מנת יתר של חומר הרדמה של 2-phenoxyethanol (0.4 מ"ג / ליטר).
    3. מעבירים את דג הזברה מורדמים למגבת נייר. Enucleate העין באמצעות מלקחיים מעוקלים.
    4. הנח את עיני enucleated במקבע וחנות O / N ב 4 ° C.
  2. Cryoprotect העיניים.
    1. לשטוף את העיניים ב5% סוכרוז 1x PBS למשך 30 דקות בטמפרטורת חדר, ואז להחליף עם1x 5% סוכרוז PBS טרי במשך שעה 2. בשלב הבא, לשטוף את העיניים ב30% סוכרוז 1x PBS O / N ב 4 ° C. לשטוף את העיניים ב1:1 (חלקים שווים) של מדיום הקפאת רקמות ו30% סוכרוז 1x PBS O / N ב 4 ° C.
  3. הטמע את העיניים ב% מדיום הקפאת רקמה 100 ולאחסן ב -80 ° C. אוריינט את העיניים כדי שcryosectioning של הרקמה מתבצע על ציר הגב / הגחון.
  4. Cryosection רקמות ומניחים על שקופיות זכוכית. שקופיות חמות לשעה 2 ב 55 ° C. שקופיות חנות ב -80 ° C או לבצע אימונוהיסטוכימיה סטנדרטית באופן מיידי.
  5. בצע אימונוהיסטוכימיה סטנדרטית על רקמה מחולק ותמונה עם מיקרוסקופ פלואורסצנטי 40,51.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

פרוטוקול טיפול האור עד כה תאר היה בהשוואה לכל שיטה פרטנית של LIRD. בבעלי חיים לבקנים מבוגרים חשוכים שטופלו (איורים 3-5), בטיפולים באור הבודדים שהסתיימה באובדן משמעותי של מוט (איור 3) וקונוס (איור 4) קולטני אור. עם זאת, שני הטיפולים בודדים נפג?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

כאן אנו מראים כי שילוב של חשיפה לקרינת UV קצרה עם תוצאות חשיפה לאור בהירות מתמשכות באובדן photoreceptor נרחב ותגובת התחדשות חזקה. בהשוואה לשיטות LIRD הבודדות, בשילוב שיטה זו גם בפרוטוקול היעיל ביותר לפגוע בשתי מוטות קונוסים בשני החצאים של הרשתית. חשוב מכך, טיפול זה הוא יעיל בב?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgements

המחברים מבקשים להודות לXixia ואו לגידול דגים מעולים ותמיכה טכנית. עבודה זו מומנה על ידי המכונים הלאומי לבריאות מענקי R21EY019401 (RT) וP30EY04068 (RT), והזנק כספים לRT, כולל מענק בלתי מוגבל של מחקר כדי למנוע עיוורון לאוניברסיטה ויין סטייט, מחלקת העיניים. JT נתמכה על ידי תומס ג ראמבל מסופקת על ידי בית הספר למוסמכים ויין סטייט מלגה.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
UV light sourceLeicaEL600
Glass Petri dish (150 x 20 mm)Sigma-Aldrich/PyrexCLS3160152BO
250 ml glass beakerSigma-Aldrich/PyrexCLS1000250
4 L glass beakerSigma-Aldrich/PyrexCLS10004L
Aluminum foilFisher01-213-105
250 W halogen lampsWorkforce265-669
1.8 L clear acrylic tanksAquaneeringZT180T
1.8 L clear acrylic tank lidsAquaneeringZT180LCL
FanHoneywellHT-900
AeratorTetra77853-900
ThermometerCole-ParmerYO-08008-58
Bent forceps (5/45)World Precision Instruments504155

References

  1. Bernardos, R. L., Barthel, L. K., Meyers, J. R., Raymond, P. A. Late-stage neuronal progenitors in the retina are radial Muller glia that function as retinal stem cells. J. Neurosci. 27, 7028-7040 (2007).
  2. Fausett, B. V., Goldman, D. A role for alpha1 tubulin-expressing Muller glia in regeneration of the injured zebrafish retina. J. Neurosci. 26, 6303-6313 (2006).
  3. Fimbel, S. M., Montgomery, J. E., Burket, C. T., Hyde, D. R. Regeneration of inner retinal neurons after intravitreal injection of ouabain in zebrafish. J. Neurosci. 27, 1712-1724 (2007).
  4. Sherpa, T., et al. Ganglion cell regeneration following whole-retina destruction in zebrafish. Dev. Neurobiol. 68, 166-181 (2008).
  5. Thummel, R., et al. Pax6a and Pax6b are required at different points in neuronal progenitor cell proliferation during zebrafish photoreceptor regeneration. Exp. Eye Res. 90, 572-582 (2010).
  6. Vihtelic, T. S., Hyde, D. R. Light-induced rod and cone cell death and regeneration in the adult albino zebrafish (Danio rerio) retina. J. Neurobiol. 44, 289-307 (2000).
  7. Vihtelic, T. S., Soverly, J. E., Kassen, S. C., Hyde, D. R. Retinal regional differences in photoreceptor cell death and regeneration in light-lesioned albino zebrafish. Exp. Eye Res. 82, 558-575 (2006).
  8. Yurco, P., Cameron, D. A. Responses of Muller glia to retinal injury in adult zebrafish. Vision Res. 45, 991-1002 (2005).
  9. Kassen, S. C., et al. Time course analysis of gene expression during light-induced photoreceptor cell death and regeneration in albino zebrafish. Dev. Neurobiol. 67, 1009-1031 (2007).
  10. Raymond, P. A., Barthel, L. K., Bernardos, R. L., Perkowski, J. J. Molecular characterization of retinal stem cells and their niches in adult zebrafish. BMC Dev. Biol. 6, 36(2006).
  11. Thummel, R., et al. Characterization of Muller glia and neuronal progenitors during adult zebrafish retinal regeneration. Exp. Eye Res. 87, 433-444 (2008).
  12. Thummel, R., Kassen, S. C., Montgomery, J. E., Enright, J. M., Hyde, D. R. Inhibition of Muller glial cell division blocks regeneration of the light-damaged zebrafish retina. Dev. Neurobiol. 68, 392-408 (2008).
  13. Montgomery, J. E., Parsons, M. J., Hyde, D. R. A novel model of retinal ablation demonstrates that the extent of rod cell death regulates the origin of the regenerated zebrafish rod photoreceptors. J. Comp. Neurol. 518, 800-814 (2010).
  14. Morris, A. C., Scholz, T. L., Brockerhoff, S. E., Fadool, J. M. Genetic dissection reveals two separate pathways for rod and cone regeneration in the teleost retina. Dev. Neurobiol. 68, 605-619 (2008).
  15. Bignami, A., Dahl, D. The radial glia of Muller in the rat retina and their response to injury. An immunofluorescence study with antibodies to the glial fibrillary acidic (GFA) protein. Exp. Eye Res. 28, 63-69 (1979).
  16. Bringmann, A., et al. Muller cells in the healthy and diseased retina. Prog. Retin. Eye Res. 25, 397-424 (2006).
  17. Bringmann, A., Wiedemann, P. Muller glial cells in retinal disease. Ophthalmologica. 227, 1-19 (2012).
  18. Eisenfeld, A. J., Bunt-Milam, A. H., Sarthy, P. V. Muller cell expression of glial fibrillary acidic protein after genetic and experimental photoreceptor degeneration in the rat retina. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 25, 1321-1328 (1984).
  19. Anderson, D. H., Guerin, C. J., Erickson, P. A., Stern, W. H., Fisher, S. K. Morphological recovery in the reattached retina. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 27, 168-183 (1986).
  20. Bruce, A. E., Oates, A. C., Prince, V. E., Ho, R. K. Additional hox clusters in the zebrafish: divergent expression patterns belie equivalent activities of duplicate hoxB5 genes. Evol. Dev. 3, 127-144 (2001).
  21. Fawcett, J. W., Asher, R. A. The glial scar and central nervous system repair. Brain Res. Bull. 49, 377-391 (1999).
  22. Lewis, G. P., Fisher, S. K. Muller cell outgrowth after retinal detachment: association with cone photoreceptors. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 41, 1542-1545 (2000).
  23. Fischer, A. J., Bongini, R. Turning Muller glia into neural progenitors in the retina. Mol. Neurobiol. 42, 199-209 (2010).
  24. Karl, M. O., Reh, T. A. Regenerative medicine for retinal diseases: activating endogenous repair mechanisms. Trends Mol. Med. 16, 193-202 (2010).
  25. Close, J. L., Liu, J., Gumuscu, B., Reh, T. A. Epidermal growth factor receptor expression regulates proliferation in the postnatal rat retina. Glia. 54, 94-104 (2006).
  26. Das, A. V., et al. Neural stem cell properties of Muller glia in the mammalian retina: regulation by Notch and Wnt signaling. Dev. Biol. 299, 283-302 (2006).
  27. Ikeda, T., Puro, D. G. Regulation of retinal glial cell proliferation by antiproliferative molecules. Exp. Eye Res. 60, 435-443 (1995).
  28. Liu, B., et al. Wnt signaling promotes muller cell proliferation and survival after injury. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 54, 444-453 (2013).
  29. Osakada, F., et al. Wnt signaling promotes regeneration in the retina of adult mammals. J. Neurosci. 27, 4210-4219 (2007).
  30. Wan, J., et al. Preferential regeneration of photoreceptor from Muller glia after retinal degeneration in adult rat. Vision Res. 48, 223-234 (2008).
  31. Wan, J., Zheng, H., Xiao, H. L., She, Z. J., Zhou, G. M. Sonic hedgehog promotes stem-cell potential of Muller glia in the mammalian retina. Biochem. Biophys. Res. Commun. 363, 347-354 (2007).
  32. Roesch, K., et al. The transcriptome of retinal Muller glial cells. J. Comp. Neurol. 509, 225-238 (1002).
  33. Chang, G. Q., Hao, Y., Wong, F. Apoptosis: final common pathway of photoreceptor death in rd, rds, and rhodopsin mutant mice. Neuron. 11, 595-605 (1993).
  34. Marc, R. E., et al. Extreme retinal remodeling triggered by light damage: implications for age related macular degeneration. Mol. Vis. 14, 782-806 (2008).
  35. Portera-Cailliau, C., Sung, C. H., Nathans, J., Adler, R. Apoptotic photoreceptor cell death in mouse models of retinitis pigmentosa. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91, 974-978 (1994).
  36. Noell, W. K., Walker, V. S., Kang, B. S., Berman, S. Retinal damage by light in rats. Invest. Ophthalmol. 5, 450-473 (1966).
  37. Wenzel, A., Grimm, C., Samardzija, M., Reme, C. E. Molecular mechanisms of light-induced photoreceptor apoptosis and neuroprotection for retinal degeneration. Prog. Retin. Eye Res. 24, 275-306 (2005).
  38. Cicerone, C. M. Cones survive rods in the light-damaged eye of the albino rat. Science. 194, 1183-1185 (1976).
  39. La Vail, M. M. Survival of some photoreceptor cells in albino rats following long-term exposure to continuous light. Invest. Ophthalmol. 15, 64-70 (1976).
  40. Thomas, J. L., Nelson, C. M., Luo, X., Hyde, D. R., Thummel, R. Characterization of multiple light damage paradigms reveals regional differences in photoreceptor loss. Exp. Eye Res. 97, 105-116 (2012).
  41. Qin, Z., et al. FGF signaling regulates rod photoreceptor cell maintenance and regeneration in zebrafish. Exp. Eye Res. 93, 726-734 (2011).
  42. Craig, S. E., et al. The zebrafish galectin Drgal1-l2 is expressed by proliferating Muller glia and photoreceptor progenitors and regulates the regeneration of rod photoreceptors. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 51, 3244-3252 (2010).
  43. Morris, A. C., Schroeter, E. H., Bilotta, J., Wong, R. O., Fadool, J. M. Cone survival despite rod degeneration in XOPS-mCFP transgenic zebrafish. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 46, 4762-4771 (2005).
  44. Nelson, C. M., Hyde, D. R. Muller glia as a source of neuronal progenitor cells to regenerate the damaged zebrafish retina. Adv. Exp. Med. Biol. 723, 425-430 (2012).
  45. Powell, C., Elsaeidi, F., Goldman, D. Injury-dependent Muller glia and ganglion cell reprogramming during tissue regeneration requires Apobec2a and Apobec2b. J. Neurosci. 32, 1096-1109 (2012).
  46. Ramachandran, R., Reifler, A., Wan, J., Goldman, D. Application of Cre-loxP recombination for lineage tracing of adult zebrafish retinal stem cells. Methods Mol. Biol. 884, 129-140 (2012).
  47. Ramachandran, R., Zhao, X. F., Goldman, D. Ascl1a/Dkk/beta-catenin signaling pathway is necessary and glycogen synthase kinase-3beta inhibition is sufficient for zebrafish retina regeneration. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 15858-15863 (2011).
  48. Ramachandran, R., Zhao, X. F., Goldman, D. Insm1a-mediated gene repression is essential for the formation and differentiation of Muller glia-derived progenitors in the injured retina. Nat. Cell Biol. 14, 1013-1023 (2012).
  49. Wan, J., Ramachandran, R., Goldman, D. HB-EGF is necessary and sufficient for Muller glia dedifferentiation and retina regeneration. Dev. Cell. 22, 334-347 (2012).
  50. Morris, A. C., Forbes-Osborne, M. A., Pillai, L. S., Fadool, J. M. Microarray analysis of XOPS-mCFP zebrafish retina identifies genes associated with rod photoreceptor degeneration and regeneration. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 2255-2266 (2011).
  51. Thummel, R., Bailey, T. J., Hyde, D. R. In vivo electroporation of morpholinos into the adult zebrafish retina. J. Vis. Exp. (58), e3603(2011).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

Neuroscience80

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved