ניטור של פרמטרים מערכתיים והבדיה המודינמית בעכברים

Summary

הסרט הזה מדגים כיצד לרכוש פרמטרים המודינמיים מערכתיים וכבדים בעכברים. כל הניטור כולל רכישה של פרמטרים חיוניים, לחץ מערכתי בדם, לחץ ורידים מרכזיים, קצב זרימת עורק כבד נפוץ, ולחץ וריד שער, כמו גם את קצב זרימת הפורטל בעכברים.

Abstract

השימוש במודלים של עכברים במחקר ניסיוני יש חשיבות עצומה ללימוד פיזיולוגיה של כבד והפרעות pathophysiological. עם זאת, בשל גודלו הקטן של העכבר, פרטים טכניים של הליך הניטור תוך הניתוחי המתאים לעכבר תוארו לעתים רחוקות. בעבר שכבר דווח בנוהל מעקב כדי לקבל פרמטרים המודינמית לחולדות. עכשיו, אנחנו מותאמים ההליך לרכישת פרמטרים המודינמית מערכתיים וכבדים בעכברים, מינים פי עשר קטנים יותר מחולדות. סרט זה מדגים את המכשור של בעלי החיים, כמו גם את תהליך רכישת הנתונים הדרושים כדי להעריך פרמטרים המודינמיים מערכתיים וכבדים בעכברים. פרמטרים חיוניים, כולל טמפרטורת גוף, קצב נשימה וקצב לב נרשמו לאורך כל ההליך. פרמטרים המודינמית מערכתיים מורכבים של לחץ בעורק התרדמה (CAP) ולחץ מרכזי ורידים (CVP). פרמטרים זלוף כבדית כוללים פורטל vלחץ עין (PVP), קצב זרימת פורטל וכן את קצב הזרימה של העורק המשותף בכבד (טבלת 1). מכשור ורכישת נתונים כדי להקליט את הערכים נורמלים הושלמו בתוך 1.5 h. פרמטרים המודינמית מערכתיים וכבדים נשארו בטווח נורמלי במהלך הליך זה.

הליך זה הוא מאתגר אבל אפשרי. יש לנו כבר מיושם בהליך זה כדי להעריך פרמטרים המודינמיים בכבד בעכברים נורמלים, כמו גם במהלך 70% כריתה חלקית ובאונת כבד הידוק ניסויים. אומר PVP לאחר כריתה (n = 20), הייתה 11.41 ± 2.94 CMH ₂ O שהיה גבוה באופן משמעותי (P <0.05) מאשר לפני הכריתה (6.87 ± 2.39 CMH ₂ O). התוצאות של אונת כבד מהדקת ניסוי הצביעו על כך שנוהל מעקב זה הוא רגיש ומתאים לאיתור שינויים קטנים בלחץ פורטל וקצב זרימת פורטל. לסיכום, הליך זה הוא אמין בידיהם של מיקרו מנתח מנוסה אבל צריך להיות מוגבל לexperiments לאן עכברים נחוצים ביותר.

Introduction

המטרה הכללית של הווידאו הזה הייתה להדגים הליך ניטור בזמן אמת לרכישת פרמטרים המודינמית מערכתיים וכבדים. הרציונל לפיתוח הליך זה הוא גדול הערך שלה עבור התערבויות ניסיוניות בעכברים שדורשים קבלת פרמטרים המודינמית מערכתיים וכבדים. ההליך יכול להיות מיושם על בעלי חיים תמימים ובזמן או לאחר התערבות כירורגית ניסיונית hepato-מרה ניתנה, כגון כריתה חלקית, קשירת וריד שער והשתלה כבד.

רכישה של נתונים המודינמית כבד במכרסמים דורשת הליך פולשני המוצע. לא ניתן להשיג זלוף כבד הלא פולשני. עם זאת, יש חלופות לרכישת לחץ הדם המערכתי. טכניקות ניטור כגון טכניקת שרוול זנב ⁸ כבר נוצלו לרכישת לחץ הדם בשני חולדות ועכברים. טכניקת שרוול הזנב יכולה להיות מיושמת בconsciבעלי חיים מפוקפקים. כאשר מודדים את לחץ הדם, את החיה צריכה להיות ממוקמת וקבוע בתנוחה לא נוחה ספציפית. במדריך של מכשיר זנב השרוול, היצרן קובע כי עכברים עלולים להיות עצבניים והדגישו שעשויה להפחית את זרימת הדם בזנב. תחת נסיבות ש, לחץ דם ההיקפי שנרכשו בזנב עשוי להיות נמוך בהרבה מלחץ הדם המרכזי.

נוהל המעקב המלא בוצע עם צג מרובה ערוצים משולב באמצעות שורה של חיישנים לרכישת נתונים. לחץ הדם היה מתקבל על ידי הכנסת קטטר לתוך הכלי המתאים לאחר נתיחה זהירה מייקרו וחשיפה מתחת למיקרוסקופ. קצב הזרימה שנמדד על ידי הצבת זרימת בדיקה transonic מסביב לכל כלי.

אנחנו כבר דיווחו נוהל מעקב במהלך ניתוח דומה לחולדות וכתוצאה מסדרה מקיפה של הנתונים המודינמית פיסיולוגיים דומים לSinglנתוני דואר דיווחו מקבוצות אחרות ^7. לכן אנחנו נחשבים בהליך זה כדי לייצג את בסיס טוב להתאמת לעכבר, מינים פי 10 קטנים יותר מהחולדה. ההבדל העיקרי להליך העכברוש הוא השימוש בצנתרי מילר לרכישת נתונים בלחץ דם ולא מערכת צנתר מבוסס נוזל. נתוני זרימה גם נרכשו עם בדיקות זרימת transonic, רק אלה קטנים בהרבה לכלי עכברוש המקבילים.

בשל גודלו הקטן של בעלי החיים, מכשור של עכברים הוא מאתגר מבחינה טכנית, אבל אפשרי. ברגע המכשור יושלם, רכישת נתונים וניתוח נתונים חיים העיקרי הוא פשוטה, שכן קובץ הגדרה מוגדר מראש יכול לשמש. קובץ ההגדרה יש להגדיר פעם אחת בתחילת סדרה של ניסויים וניתן לאחסן ולהשתמש בהם לכל הניסויים הבאים.

עד עכשיו אנחנו מוחלים בהליך זה כדי להעריך את ההשפעות המודינמית כבד בניסויים חריפים. מדדנו CAP וPVP לפני ומייד לאחר 70% כריתה חלקית (PH) ובהידוק / ​​ניסויים מהדק-de. אנחנו הידקתי את רצועת hepato-התריסריון של האונה הימנית המייצגת 20% מהכבד המוני ואחרי הידוק קצר (5min) של החציון ואונה לרוחב שמאל מייצג לחלוטין 90% מהמסה הכבד. De-ההידוק התחיל עם שחרור המהדק מהאונה הימנית ואחריו לשחרר את החציון ואונה לרוחב עזבה. זמן הידוק מקסימאלי היה מתחת 10 דקות.

Protocol

שיכון וכל ההליכים שבוצעו היו בהתאם לבעלי החיים הגרמנים רווחה חקיקה.

1 חיישני כיול (מלאו אחר הוראות של היצרן עבור חיישני כיול)

1.1) כיול צנתר מילר. טרום להשרות את קצה הצנתר במים או תמיסת מלח סטרילית ל30 דקות לפני לאזן (איפוס) וכיול.

1. חבר את חיישן מילר לערוץ millar1 של מגבר גשר והכנס את קצה חיישן מילר לעמודת מים.
2. הגדר את ערך העמודה מים ל0 CMH ₂ O. בחלון תוכנה לניתוח נתונים, לבחור גשר להגביר ולאפס אותו. ניתן להגדיר 0 CMH O ₂ הערך הבסיסי.
3. הגדר את ערך העמודה מים ל20 CMH ₂ O. הפעל חלון תוכנת התקדמות ניתוח נתונים, ולהפסיק. בחר "יחידות" בחלון של גשר להגביר, להגדיר את נקודת ההתחלה של 0 ו20 CMH ₂ O בהתאם. התאם את "היחידה" לCMH <תת> 2 O.
4. כייל את millar2 למדידת CAP באותה הדרך (להגדיר שורת שתי בסיס 90 ו110 CMH ₂ O).

1.2) כיול זרימת דם בדיקה

1. שים את הבדיקה למים ללא יונים. חבר את הבדיקה עם מערכת זרימת הבדיקה transonic.
2. בחלון תוכנה לניתוח נתונים, לבחור קלט להגביר לאפס את זרימת הבדיקה. התאם את היחידות.
3. לחץ על הכפתור כדי "ערוץ מבחן" כדי לאסוף את האות: אם יש לו את האות 3-4 בארים, זה אומר האות היא טובה. במקרה אות טובה נרכשה, ניתן להמשיך את ההליך.
4. לחץ על הכפתור "אפס ערוץ" וערוץ קנה מידה כדי לראות אם הערך כבר מכויל או לא.
5. לחץ על הכפתור כדי "ערוץ מידה" למדידה מאוחר יותר.

2 הכן את העכבר להליך הכירורגי

1. מניחים את העכבר בתא אינדוקציה ולהרדים את העכבר עם 2% isoflurane ו0.3 מ"ל / חמצן דקות. הפעולה יכולה להתבצע אם רפלקס נסיגת הבוהן הקמצוץ של העכבר הוא נעדר.
2. לגלח את הפרווה של אזורים כירורגית, הכוללים את הצוואר והבטן השמאלי.
3. מניחים את העכבר על שולחן הניתוח ולתקן אותה באמצעות קלטות. השתמש במשחת וטרינר על עיניים כדי למנוע יובש בתקופת המבצע.
4. הנח כרית גזה מתחת לצוואר לחשיפה אופטימלית של שדה הפעולה של צוואר.
5. לחטא את שדה פעולה ואת מקום gauzes מעוקר כדי לכסות את העכבר רק עוזב את שדה הניתוח פתוח.

מדידת .3 פרמטרים ויטל

1. הכנס את מחטי א.ק.ג. מתחת לעור לתוך כפות של עכבר.
2. מניחים את חיישן הנשימה מתחת לחלק האחורי של העכבר.
3. הנח את הבדיקה הטמפרטורה לתוך פי הטבעת של העכבר.
4. רשומה טמפרטורה, א.ק.ג. וקצב נשימה של העכבר בתוכנת ניתוח נתונים.

.4 צוואר מבצע לSניטור לב וכלי דם ystemic

4.1) לנתיחה כלי

1. זהה את הקו האמצעי של הצוואר, הנקודה של עצם הבריח אמצע, את הזווית של לסת תחתונה.
2. לעשות חתך אורכי 2 סנטימטר מהזווית של לסת תחתונה עד לנקודת האמצע של עצם הבריח שהוא 0.5 ס"מ לצד השמאלי של קו האמצע.
3. לנתח את בלוטת submandibular, הפוך אותו ולכסות אותו עם גזה ספוגה מלוחה.
4. זהה את וריד הצוואר, לנתח אותו ולמקם את שלושה 6-0 תפרי משי תחת הווריד לקשירה וקיבוע מאוחר יותר.
5. זהה את שריר sternocleidomastoid, להפריד אותו מהבטן מעולה של בטן omohyoid והאחורית של שריר digastric, ולמשוך אותו עם מפשק לחשיפה קלה של עורק התרדמה.
6. לנתח את העורק הראשי ולמקם את שלושה 6-0 תפרי משי תחת העורק לקשירה וקיבוע מאוחר יותר.

4.2) זרימת דם בעורק תרדמת מדידה

1. הנח את transonicלחקור סביב העורק הראשי, לשמור אותו יציב, ולייעל את הקשר באמצעות ג'ל אולטרסאונד או מלוח.
2. רשומה זרימת דם מהירות של עורק התרדמה כפי שמצוין על המסך הקטן של מכשיר transonic באמצעות תוכנת ניתוח נתונים
3. הסר את הבדיקה לאחר סיום המדידה

4.3) מדידת לחץ בעורק תרדמה (CAP)

1. ולקשור את הקצה הדיסטלי של עורק התרדמה ומהדק קצה הפרוקסימלי שלה.
2. מניחים 2 תפרי קיבוע סביב העורק הראשי. השתמש 10-0 prolene לתפר השהייה.
3. לעשות חתך קטן בקיר הקדמי של כלי השיט.
4. הכנס קטטר מילר ולתקן את זה עם תפרים-הוצב מראש.
5. רשום את CAP בתוכנת ניתוח נתונים.

4.4) זרימת דם מדידת וריד הצוואר

1. הרם את וריד הצוואר ומניח את זרימת הבדיקה transonic כדי למדוד את קצב הזרימה.
2. רשום את קצב הזרימה בתוכנת ניתוח נתונים.

4.5) מדידת לחץ ורידים מרכזי (CVP)

1. הצמד את הקצה הפרוקסימלי של וריד הצוואר ולקשור את הקצה הדיסטלי.
2. חותך חתך קטן באמצעות microscissors על הקיר הקדמי של כלי השיט.
3. הכנס את הקטטר מלא הנוזל ולתקן אותה עם קווי תפר-הוצב מראש.
4. רשום את CVP בתוכנת ניתוח נתונים.

.5 בטן מבצע לרכישת פרמטרים המודינמיים כבדית

5.1) זיהוי כלי

1. לעשות חתך רוחבי בבטן.
2. Eventerate המעיים בצד השמאל ולכסות עם גזה רטובה.
3. זהה את נחות וריד נבוב, וריד השער, עורק כבד הנפוץ ועורק כבד התקין.
4. זרוק כמה מלח חם בבטן ועל פני השטח של המעיים כל 5 דקות במשך כל נוהל המעקב.

5.2 מדידה) של זרימת דם פורטל

1. לנתח את וריד השער.
2. מניחים 6-0 משי תחת וריד השער כדי להקל על הסרת הכלי בעת ביצוע זרימת הבדיקה.
3. הנח את זרימת הבדיקה transonic סביב וריד השער ולמדוד את זרימת דם שיעורה.
4. רשום את קצב הזרימה של וריד שער הדם.

5.3 מדידה) של זרימת עורק כבד נפוצה

1. לנתח את העורק הכבד הנפוץ בזהירות.
2. הנח תפר אחד 6-0 משי סביב הספינה כדי להקל על ההרמה של כלי השיט.
3. הנח את זרימת הבדיקה סביב העורק.
4. למדוד את זרימת הדם שלה ולרכוש את הנתונים.

5.4) מדידת לחץ וריד שער (PVP)

1. בחר סניף אחד של וריד mesenteric עם מעט תופעות סניפים, אשר מנקז ישר לתוך וריד השער.
2. ולקשור את הקצה הדיסטלי של וריד mesenteric נבחר. ודא כי קשירה קרובה לצינור המעיים. ולקשור סניפים הקטנים שלה
3. מניחים 2 fixing תפרים באמצעות 6-0 prolene סביב הווריד. הנקודה של הליך זה המפתח היא להימנע ממגע בעורק mesenteric כאשר ligating הווריד.
4. הצמד את הקצה הפרוקסימלי של וריד השער.
5. מניחים 2 תפרי שהייה באמצעות 10-0 prolene. דימום כמה יתרחש מאז תפר השהייה צריך לחדור את דופן כלי הדם של וריד mesenteric בסדר.
6. לעשות חתך קטן בווריד באמצעות microscissor באלכסון בזווית של 45 מעלות.
7. הכנס קטטר מילר דרך וריד mesenteric לוריד הפורטל ולתקן אותה
8. רשום את לחץ וריד שער. בסופו של ההליך, להקריב את העכברים על ידי exsanguination תחת הרדמה.

תוצאות

פרמטרים חיוניים של העכברים כגון קצב נשימה וקצב לב הם ללא ספק הרבה יותר גבוהים מאשר בחולדה. אומר לחץ דם מערכתי ולחץ וריד הצוואר דומה לערכי חולדה ואפילו דומים לנתונים האנושיים.

נתונים המודינמית בדיה הם ללא ספק שונים. השגנו ערכים נו?...

Discussion

ניטור של פרמטרים המודינמיים בכבד הוא כלי מחקר חשוב בHepatology וניתוח כיס המרה. רכישה של נתונים המודינמית כבד מסייעת לאפיין את ההשפעה של נהלי כיס המרה על מערכת הדם. רכישה של נתונים המודינמית כבד נחוץ גם כדי לחקור את ההשפעה של תרופות המשפיעות לחץ פורטל וזרימת פורטל, למשל,...

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
PowerLab 16/30	ADInstruments	PL3516
Quad Bridge Amp	ADInstruments	FE224	Bridge amplifier
Animal Bio Amp	ADInstruments	FE136
Needle Electrodes for FE136 (3 pk)	ADInstruments	MLA1213
Perivascular Flowmeter Module	Transonic	TS420
Flowprobe MA0.5PSB/MA1PSB	Transonic	MA0.5PSB/MA1PSB
SPR-1000 Mouse Pressure Catheter	Millar instruments	841-0001
fluid filled catheter	Terumo	SR+DU2619PX	26G, 0.64×19mm
micro scissors	F·S·L	No. 14058-09
micro serrefine	F·S·L	No.18055-05
Micro clamps applicator	F·S·L	No. 18057-14
Straight micro forceps	F·S·L	No. 00632-11
Curved micro forceps	F·S·L	No. 00649-11
needle-holder	F·S·L	No. 12061-01
6-0 silk	ethicon
6-0 prolene	ethicon
7-0 prolene	ethicon
10-0 prolene	ethicon
Tail cut-off device	Kent Scientific		www.kentscientific.com
LabChart7	ADInstruments		data  analysis software