JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Erratum Notice
  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Erratum
  • Reprints and Permissions

Erratum Notice

Important: There has been an erratum issued for this article. Read More ...

Summary

In this protocol, derivation of cardiac progenitor cells from both mouse and human embryonic stem cells will be illustrated. A major strategy in this protocol is to enrich cardiac progenitor cells with flow cytometry using fluorescent reporters engineered into the embryonic stem cell lines.

Abstract

Cardiac progenitor cells (CPCs) have the capacity to differentiate into cardiomyocytes, smooth muscle cells (SMC), and endothelial cells and hold great promise in cell therapy against heart disease. Among various methods to isolate CPCs, differentiation of embryonic stem cell (ESC) into CPCs attracts great attention in the field since ESCs can provide unlimited cell source. As a result, numerous strategies have been developed to derive CPCs from ESCs. In this protocol, differentiation and purification of embryonic CPCs from both mouse and human ESCs is described. Due to the difficulty of using cell surface markers to isolate embryonic CPCs, ESCs are engineered with fluorescent reporters activated by CPC-specific cre recombinase expression. Thus, CPCs can be enriched by fluorescence-activated cell sorting (FACS). This protocol illustrates procedures to form embryoid bodies (EBs) from ESCs for CPC specification and enrichment. The isolated CPCs can be subsequently cultured for cardiac lineage differentiation and other biological assays. This protocol is optimized for robust and efficient derivation of CPCs from both mouse and human ESCs.

Introduction

מחלת לב נשארת הגורם המוביל בעולם כיום ושיעורי התמותה נותרו כמעט ללא שינוי בשני העשורים האחרונים (American Heart Association). יש צורך קריטי בפיתוח אסטרטגיות טיפוליות חדשניות למניעה או להפוך אי ספיקת לב בצורה יעילה. אסטרטגיה מבטיחה אחת היא טיפול המבוסס על תאים בעקבות ההתפתחות המהירה של תאי גזע ביולוגיה 1. בהקשר זה, עלות לכל קליק multipotent יכול להיות מקור מצוין לתא הטיפול בשל היכולת שלהם להתרבות, אך מחויב רק לבידול שושלת לב. לכן, שיטה יעילה וחזקה כדי ליצור ולבודד עלויות לקליק הוא בעלת חשיבות רבה ללימודי טיפול בתאי לב.

פרוטוקול זה מתמקד בעלויות לקליק העוברית זוהו במהלך עובר ואיך הדור שלהם מESCs המוקדמים. עלות לכל קליק שונים היה מבודד מלב עוברי ובוגר, אפילו מעצם קישואים 2. במהלך התפתחות עובר, morphoge העצםחלבונים מגנטיים (BMPs), חברי כנפיים-סוג משפחת אתר האינטגרציה MMTV (Wnts) ואותות קטרים ​​לגרום המחויבות של Mesp1 + mesoderm multipotent 3. Mesp1 + תאים אז להתמיין המחירים לקליק העובריים 4. עלות לכל קליק אלה מסומנים בדרך כלל על ידי HCN4, homeobox NK2 5 (Nkx2-5), homeobox Isl LIM 1 (Isl1), T-תיבה 5 (Tbx5), ו2C הגורם משפר myocyte (Mef2c), יוצרים שדות לב ראשוניים והשני, ו לתרום לחלקים הגדולים של לב במהלך cardiogenesis 5-10. עלות לכל קליק שני Nkx2-5 + וIsl1 + / Mef2c + מסוגל להתמיין cardiomyocytes, תאי שריר חלק (SMCs), ותאי האנדותל 5-8. כך העלויות לקליק אלה יהיו להצמיח כלי דם של הלב, כמו גם רקמות לב והם מקור תא אידיאלי לטיפול מבוסס תאי לב. כתוצאה מכך, יצירת מחירים לקליק במבחנה הייתה מוקד מחקר עיקרי במחקרי לב וכלי דם. מאז יש לי ESCs יכולת הרחבה בלתי מוגבלתnd מייצג את תאי ICM בשלב הבלסטוציסט, בידול של ESCs לעלויות לקליק העוברית הבאים העובר הטבעי נחשב גישה הגיונית ויעילה להשגת המחירים לקליק.

אחד גישה מיושמת באופן נרחב כדי להשיג מחירים לקליק מESCs היא כדי לצבור ESCs ל -11 EBS. כדי לשפר את יעילות הבידול, גורמים כימיים וצמיחה מוגדרות המבוססים על הידע של התפתחות לב היו בשימוש 12-14. עם זאת, אין סמנים מובהקים לקליק, במיוחד לא סמנים על פני קרום תא, המקובלים בתחום. כדי לטפל בבעיה זו, ESCs מתוכננים לציון Isl1 + או Mef2c מחירים לקליק + ונגזרים שלהם עם כתבי ניאון באמצעות מערכת / loxP Cre. Recombinase cre הוא דפק בתחת שליטתו של יזם / משפר Isl1 / Mef2c. RFP השתנה ניאון חלבון או גן YFP מונע על ידי אמרגן מכונן יכול להיות מופעל על ידי כריתה של קודון עצירת flox עם recombinase cre(ISL1: cre; pCAG-flox-STOP-flox-GFP או RFP / Isl1-cre; Rosa26YFP / Mef2c-cre; Rosa26YFP) 5,6. ברגע שESCs נבדל לעלויות לקליק שדה הלב השניה, cre מונע אמרגן / משפר Isl1 / Mef2c יפעיל את כתבי ניאון ויכולים להיות מועשר מחירים לקליק על ידי FACS לטיהור. בקצרה, שיטת צבירת EB משמשת ליצירת בידול ESC. כדי לשפר את יעילות בידול, מטופלים התאים המובחנים עם חומצה אסקורבית (AA) וגורמי גדילה כגון BMP4, Activin וVEGF 13,15. פרוטוקול זה מאפשר בידול חזק ויעיל CPC באמצעות עכבר והן ESCs אדם.

Protocol

1. גזירת העכבר עוברי המחירים לקליק מעכבר ESCs

  1. הכן שכבת מזין fibroblasts העוברי (MEFs) עכבר.
    1. מדיום חם MEF (10% FBS בDMEM) עד 37 מעלות צלזיוס.
    2. הכן צלחות מצופים ג'לטין.
      1. הוסף 1 מיליליטר של 0.1% ג'לטין במים לתוך באר של צלחת 6-היטב או 5 מיליליטר לתוך צלחת 10 סנטימטרים.
      2. השאר צלחות או מנות ב 37 מעלות צלזיוס או בטמפרטורת חדר למשך לפחות 30 דקות. לשאוף את הג'לטין לפני השימוש.
    3. הפשרה מוקרן MEFs במהירות באמבט מים 37 מעלות צלזיוס, עם רעד עדין.
    4. להעביר את התאים בעדינות צינור חרוטי 15 מיליליטר או 50 מיליליטר. הוסף 5 מיליליטר של מדיום MEF מחומם מראש. לערבל את התאים לאט וצנטריפוגות ב XG 200 במשך 5 דקות.
    5. Resuspend תאים בינוני MEF ולספור תאי קיימא. השתמש בכרכים הבאים של מדיום MEF: 2 מיליליטר לכל תאים היטב מצלחת 6 היטב ו- 10 מיליליטר לתאים מצלחת 10 סנטימטרים.
    6. תאי צלחת לתוך 6-גם צלחות או 10 מנות סנטימטר ב 1-2x 10 6 לכל צלחת / מנה.
    7. דגירה הצלחות / מנות MEF על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 שעות לפחות 24 לפני שימוש.
      הערה: מחק צלחות / מנות MEF מבוגרות יותר משבוע.
  2. הכן ESCs עכבר
    1. תרבות Isl1-cre; Rosa26YFP / Mef2c-cre; Rosa26YFP עכבר ESCs על MEFs עד מחוברות 90%. מדיום סלולארי השימוש ES מורכב של 410 מיליליטר DMEM, 75 מיליליטר FBS, 0.1 מ"מ MEM NEAA, L-גלוטמין 2 מ"מ, 0.1 מ"מ פירובט, 100 U פן / סטרפטוקוקוס, ו0.1 מ"מ β-mercaptoethanol.
    2. הכן 6-גם צלחות מצופים ג'לטין, כמתואר ב1.1.2.
    3. בינוני לשאוב מצלחות ולשטוף תאים עם DPBS.
      1. לשאוב DPBS ולהוסיף 0.4 מיליליטר 0.25% טריפסין לתוך אחד היטב צלחת 6-היטב. דגירה תאים ב 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 למשך 5 דקות. הוסף 1 מיליליטר בינוני ES מחומם מראש להפסקת תגובת טריפסין.
    4. קציר תאים ותאי צנטריפוגות ב 200 XG בינוני ולשאוב. תאי Resuspend ב 1 מיליליטר מדיום סלולארי ES ולספור את התאים.
    5. ESCs צלחת על צלחות מצופים ג'לטין בצפיפות של 3 x 10 4/2 סנטימטר. לדגור על 37 מעלות צלזיוס, 5% CO 2 על 2 ימים שבם ESCs להגיע מחוברות כ -90%. לשנות את המדיום היומיומי.
    6. כאשר ESCs הם 90% ומחוברות, חזור על פעולות 1.2.2-1.2.5 להסיר את מתקני האכלת MEF לחלוטין.
  3. לגרום לקליק בידול על ידי היווצרות EB
    1. להכין מדיום בידול אחריו כמו: 36 מיליליטר IMDM, 12 מיליליטר F12 של בשר חזיר, L-גלוטמין 2 מ"מ, 0.34 מיליליטר BSA (7.5%), 0.25 מיליליטר N2, 0.5 B27 מיליליטר, AA / מיליליטר 50 מיקרוגרם, ו0.45 מ"מ 1-thioglycerol.
    2. בינוני לשאוב מהתאים ולשטוף עם DPBS. לשאוב DPBS ולהוסיף 0.4 מיליליטר 0.25% טריפסין לתוך אחד היטב צלחת 6-היטב. לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות.
    3. הוסף 1 מיליליטר בינוני בידול להפסיק את התגובה ופיפטה ומטה כדי לפזר אשכולות תאים לתאים בודדים.
    4. צנטריפוגה ESCs ב XG 200 במשך 5 דקות וזורקים את המדיום.
      1. Resuspend 1 x 10 6 </ Sup> ESCs במדיום בידול 1 מיליליטר. ספירת התאים, ותרבות התאים בצלחת פטרי ניתוק הנמוך בריכוז של 1 x 10 5 תאים / מיליליטר במדיום בידול על 37 מעלות צלזיוס במשך צבירת EB ראשונה.
    5. יומיים לאחר היווצרות EB, להעביר EBS ממנות ל -50 מיליליטר צינורות. ספין ב XG 200 דקות 1. הסר בינוני ולשטוף EBS עם 10 מיליליטר DPBS בלי Ca 2 + ו Mg 2 +.
    6. לשאוב DPBS ולהוסיף 1 מיליליטר 0.25% טריפסין. לדגור על 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. להוסיף 4.5 מיליליטר בינוני בידול כדי לעצור את התגובה. Pipet למעלה ולמטה כדי לנתק EBS לתוך תאים בודדים.
    7. צנטריפוגה התאים ב XG 200 במשך 5 דקות. תאים בינוניים וresuspend לשאוב במדיום בידול 1 מיליליטר.
    8. ספירת התאים, ולדלל 2 x 10 6 תאים ל -1 x 10 5 תאים / מיליליטר במדיום בידול. להוסיף VEGF, BMP4 וActivin למדיום בריכוז סופי של 5 ng / ml / מיליליטר, 0.8 ng, ו5 ng / ml, בהתאמה. Cultuמחדש את התאים בצלחת פטרי להיווצרות EB שנייה על 37 מעלות צלזיוס.
    9. 40 שעות לאחר היווצרות EB שנייה, להעביר EBS 50 מיליליטר צינורות. לשטוף עם DPBS פעם, לנתק את EBS עם 1 מיליליטר של 0.25% טריפסין על 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. Pipet למעלה ולמטה כדי לנתק EBS לתוך תאים בודדים.
    10. Resuspend תאי Stempro-34 בינוניים עם 5 ng / ml VEGF, 10 ng / ml bFGF ו -12.5 FGF10 ng / ml. צלחת התאים ב2 x 10 5/2 סנטימטר בצלחות מצופה ג'לטין. תרבות בחממת 37 ° C במשך כ 32 שעות לפני הבידוד לקליק.
  4. לבודד mCPCs
    1. לשאוב בינוני ולשטוף עם DPBS. הוסף 0.5 מיליליטר 0.25% טריפסין לצלחות תרבות על 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות. להוסיף 4.5 מיליליטר בינוני בידול כדי לעצור את התגובה. Pipet למעלה ולמטה כדי לנתק EBS לתוך תאים בודדים. לאסוף את התאים על ידי תאי צנטריפוגה וגלולים ב2% FBS / PBS לFACS-טיהור.
    2. הפעל ESCs מובחן על סדרן כביקורת השלילית. מתח שינוי כדי להתאים גללים קדימהter (FSC) והצד פיזור (SSC) כדי לבחור אוכלוסייה רצויה. השתמש קדימה לפזר לעומת פיזור צד וגובה פיזור קדימה לעומת רוחב להוציא פסולת וכפיל. בתת-האוכלוסייה שנבחרה, על פי ההתפלגות של בקרות ESC, לצייר שער של YFP חיובי על היסטוגרמה לחסל autofluorescence תא. לאסוף YFP + עלות לכל קליק מYFP + gating.
    3. פלייט המחירים לקליק המטוהר (תאי YFP +) ב6-גם צלחות עם מדיום בידול (1.3.1). תרבות 3-5 ימים נוספים על 37 מעלות צלזיוס במשך בידול של העלויות לקליק לשריר לב וSMCs.

2. גזירה של האדם עוברי מחירים לקליק מESCs האדם

  1. הכן האכלה
    1. הכן שכבת מזין fibroblasts העוברי (MEFs) עכבר כפי שתואר לעיל בצפיפות של 2 x 10 4/2 סנטימטר.
  2. לשמור על ESCs אדם
    1. לשמור ISL1 האנושי: cre; pCAG-flox-STOP-flox-GFP או RFP ESCs באופן שגרתי על MEF באמצעות מדיום hESC רגיל (Knockout DMEM / F-12 385 מיליליטר, 100 מיליליטר SR Knockout, L-גלוטמין 2 מ"מ, 0.1 מ"מ NEAA, 0.1 מ"מ β-mercaptoethanol, 10 ng / FGF הבסיסי מיליליטר). לפני בידול לב, להעביר ESCs אדם במצב חופשי מזין לפחות 2 קטעים.
  3. הכן ESCs אדם במצב חופשי מזין
    1. הכן צלחות מצופים לתרבות ESCs אדם.
      1. להפשיר matrigel על 4 מעלות צלזיוס למשך לילה. שים שפופרת 50 מיליליטר על קרח ולהוסיף 30 מיליליטר בינוני / F12 DMEM קר לתוך הצינור.
      2. להוסיף matrigel 1 מיליליטר לתוך המדיום הקר ומערבבים היטב. הוסף 1 מיליליטר matrigel-DMEM הקר / 12 בינוני לתוך באר של צלחת 6-היטב או 5 מיליליטר לתוך צלחת 10 סנטימטרים.
      3. השאר צלחות / טמפרטורת מנות ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה או בחדר לשעה 2. בינוני לשאוב לפני השימוש.
    2. פיצול ESCs אדם לצלחות: תקשורת לשאוב מצלחת MEF ולשטוף ESCs אדם עם DPBS. לאחר מכן להוסיף dispase 1 מיליליטר (1 מ"ג / מיליליטר) לבאר של צלחת 6-היטב. דגירה תאים ב -37 ° Cחממה עד קצוות של מושבות להתחיל לנתק.
    3. הסר פתרון dispase. לשטוף עם DPBS פעמיים, ולאחר מכן להוסיף 2.5 מיליליטר / לכל מדיום גם mTeSR או בינוני מזגן MEF לצלחת.
    4. לגרד תאים באמצעות מגרד תא ובזהירות pipet למעלה ולמטה כדי לשבור מושבות ESC אנושיות לגושים קטנים.
    5. העבר את גושי ESC ולדלל 1: 3 לצלחות מצופים.
    6. הוסף 2 מיליליטר / גם בינוני mTeSR או בינוני מזגן MEF ולשנות בינוני יומי.
    7. ESCs אדם תרבות במדיום mTeSR או בינוני מזגן MEF על צלחות מצופים לפחות 2 קטעים.
  4. להשרות התמיינות CPC מESCs האדם
    1. כאשר תאים ומחוברות ~ 90%, לשאוב את המדיום ולשטוף עם DPBS. אז דגירה hESCs ב 0.5 מ"ג / מיליליטר Dispase על 37 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות.
    2. יש לשטוף את hESCs עם DPBS פעמיים, להסיר תאים מצלחות עם מרים תא, אז resuspend מהדק תא במדיום בידול (DMEM / F12 המכיל 18% FBS, 0.1 מ"מ NEAA, 2 מ"מL-גלוטמין, 0.1 מ"מ β-mercaptoethanol ו -50 מיקרוגרם / מיליליטר אסקורבית חומצה).
    3. העבר את התאים לתוך צלחות מצורפים נמוכות במיוחד 6-גם להיווצרות EB.
    4. שנה בינונית בידול למחרת.
    5. החלף בינוני כל 3 ימים ולשמור על EBS בתרבות השעיה.
  5. לבודד HCPCS
    1. לאסוף EBS לא יאוחר מהיום 9 של בידול לבידוד CPC אנושי.
    2. לשאוב בינוני ולשטוף EBS עם DPBS פעמיים. הוסף 0.5 מיליליטר 0.25% טריפסין היטב בכל תרבות צלחות 6-גם על 37 מעלות צלזיוס למשך 5 דקות.
    3. הוספת נפח שווה של מדיום בידול כדי לעצור את התגובה. Pipet למעלה ולמטה כדי לנתק EBS לתוך תאים בודדים. לאסוף את התאים על ידי צנטריפוגה XG 200 במשך 5 דקות ותאי resuspend ב 2% FBS / DPBS. תאי סינון עם מסננת 40 מיקרומטר תא וטהר-FACS RFP + תאי CPC, כמתואר ב1.4.3.
    4. צלחת מסודרים HCPCS על צלחות מצופים geltin. HCPCS תרבות במדיום בידול ל7ימים -9 להתמיין לתאי שריר החלק וcardiomyocyte. 7 ימים לאחר הציפוי, תרבות מובחנת תאים עם 5% SR Knockout במדיום / F12 DMEM.

תוצאות

הפרוטוקול מראה גזירה של המחירים לקליק מכמה שורות תאי גזע עובריים. ESCs יקובץ ליצירת EBS להתמיין לעלויות לקליק. ESCs נשמרים באופן שגרתי על מתקני האכלת MEF (איור 1 א, ו) ומזינים להסיר לפני ההתמיינות. על הצבירה של ESCs לEBS במדיום בידול (איור 1 ב, ז), מטופלים EBS יצר הש?...

Discussion

This protocol combines a method using growth factors to guide mESCs differentiation and spontaneous differentiation of human ESCs into CPCs. CPC lineage marked with fluorescent reporter is used to efficiently identify and isolate CPCs by FACS. The FACS-purified CPCs retain the capacity to differentiate into cardiomyocytes, smooth muscle, and endothelial cells and have a comparable expression profile to the in vivo cells. Thus, these CPCs can serve as a great resource for cell based heart therapy because of their ability ...

Disclosures

The authors declare no competing financial interests.

Acknowledgements

We thank Dr. Leonid Gnatovskiy for his carefully and critical reading of the paper. This work was supported in part by grants from the National Institutes of Health (HL109054) and the Samuel and Jean Frankel Cardiovascular Center, University of Michigan (Inaugural Fund) to WZ and from the Leon H Charney Division of Cardiology, New York University School of Medicine to BL.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
FBSThermo scentificSH30070.03E
Knockout SRLife technology10828028
Knockout DMEMLife technology10829018
DMEMLife technology11965118
NEAALife technology11140050
GlutaMAXLife technology35050061
N2Life technology17502048
B27Life technology12587010
Ham’s F12Life technology11765062
IMDMLife technology12440061
Pen/StrepLife technology15140122
PyruvateLife technology11360070
DispaseLife technology17105041
Stempro-34Life technology10639011
DMEM/F12Life technology11330032
BSA Life technology15260037
Trypsin Life technology25200056
Ascobic Acid SigmaA5960
1-ThioglycerolSigmaM1753
2-MercaptoethanolSigmaM3148
VEGFR&D293-VE
Bmp4R&D314-BP
ActivinAR&D338-AC
bFgfR&D233-FB
Fgf10R&D345-FG
mTeSRStemcell technologies5850
MatrigelBD Biosciences354277

References

  1. Garbern, J. C., Lee, R. T. Cardiac stem cell therapy and the promise of heart regeneration. Cell Stem Cell. 12 (6), 689-698 (2013).
  2. Passier, R., van Laake, L. W., Mummery, C. L. Stem-cell-based therapy and lessons from the heart. Nature. 453 (7193), 322-329 (2008).
  3. Bondue, A., Blanpain, C. Mesp1: a key regulator of cardiovascular lineage commitment. Circulation Research. 107 (12), 1414-1427 (2010).
  4. Bondue, A., et al. Mesp1 acts as a master regulator of multipotent cardiovascular progenitor specification. Cell Stem Cell. 3 (1), 69-84 (2008).
  5. Bu, L., et al. Human ISL1 heart progenitors generate diverse multipotent cardiovascular cell lineages. Nature. 460 (7251), 113-117 (2009).
  6. Lei, I., Gao, X., Sham, M. H., Wang, Z. SWI/SNF protein component BAF250a regulates cardiac progenitor cell differentiation by modulating chromatin accessibility during second heart field development. The Journal of Biological Chemistry. 287 (29), 24255-24262 (2012).
  7. Lei, I., Liu, L., Sham, M. H., Wang, Z. SWI/SNF in cardiac progenitor cell differentiation. Journal of Cellular Biochemistry. 114 (11), 2437-2445 (2013).
  8. Wu, S. M., et al. Developmental origin of a bipotential myocardial and smooth muscle cell precursor in the mammalian heart. Cell. 127 (6), 1137-1150 (2006).
  9. Spater, D., et al. A HCN4+ cardiomyogenic progenitor derived from the first heart field and human pluripotent stem cells. Nature Cell Biology. 15 (9), 1098-1106 (2013).
  10. Verzi, M. P., McCulley, D. J., De Val, S., Dodou, E., Black, B. L. The right ventricle, outflow tract, and ventricular septum comprise a restricted expression domain within the secondary/anterior heart field. Developmental Biology. 287 (1), 134-145 (2005).
  11. Boheler, K. R., et al. Differentiation of pluripotent embryonic stem cells into cardiomyocytes. Circulation Research. 91 (3), 189-201 (2002).
  12. Wada, R., et al. Induction of human cardiomyocyte-like cells from fibroblasts by defined factors. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 110 (31), 12667-12672 (2013).
  13. Kattman, S. J., et al. Stage-specific optimization of activin/nodal and BMP signaling promotes cardiac differentiation of mouse and human pluripotent stem cell lines. Cell Stem Cell. 8 (2), 228-240 (2011).
  14. Takahashi, T., et al. Ascorbic acid enhances differentiation of embryonic stem cells into cardiac myocytes. Circulation. 107 (14), 1912-1916 (2003).
  15. Wamstad, J. A., et al. Dynamic and coordinated epigenetic regulation of developmental transitions in the cardiac lineage. Cell. 151 (1), 206-220 (2012).
  16. Cong, L., et al. Multiplex genome engineering using CRISPR/Cas systems. Science. 339 (6121), 819-823 (2013).
  17. Ding, Q., et al. Enhanced efficiency of human pluripotent stem cell genome editing through replacing TALENs with CRISPRs. Cell Stem Cell. 12 (4), 393-394 (2013).
  18. Gaj, T., Gersbach, C. S., Barbas, T. A. L. E. N. ZFN, TALEN, CRISPR/Cas-based methods for genome engineering. Trends in Biotechnology. 31 (7), 397-405 (2013).
  19. Joung, J. K., Sander, J. D. TALENs: a widely applicable technology for targeted genome editing. Nature Reviews. Molecular Cell Biology. 14 (1), 49-55 (2013).
  20. Yang, H., et al. One-step generation of mice carrying reporter and conditional alleles by CRISPR/Cas-mediated genome engineering. Cell. 154 (6), 1370-1379 (2013).
  21. Mali, P., et al. RNA-guided human genome engineering via Cas9. Science. 339 (6121), 823-826 (2013).
  22. Laflamme, M. A., et al. Cardiomyocytes derived from human embryonic stem cells in pro-survival factors enhance function of infarcted rat hearts. Nature. biotechnology. 25 (9), 1015-1024 (2007).
  23. Burridge, P. W., et al. A universal system for highly efficient cardiac differentiation of human induced pluripotent stem cells that eliminates interline variability. PloS One. 6 (4), e18293 (2011).
  24. Kouskoff, V., Lacaud, G., Schwantz, S., Fehling, H. J., Keller, G. Sequential development of hematopoietic and cardiac mesoderm during embryonic stem cell differentiation. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102 (37), 13170-13175 (2005).
  25. Xu, X. Q., et al. Chemically defined medium supporting cardiomyocyte differentiation of human embryonic stem cells. Differentiation: Research in Biological Diversity. 76 (9), 958-970 (2008).
  26. Lian, X., et al. Robust cardiomyocyte differentiation from human pluripotent stem cells via temporal modulation of canonical Wnt signaling. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 109 (27), E1848-1857 (2012).
  27. Bizy, A., et al. Myosin light chain 2-based selection of human iPSC-derived early ventricular cardiac myocytes. Stem Cell Research. 11 (3), 1335-1347 (2013).

Erratum


Formal Correction: Erratum: Derivation of Cardiac Progenitor Cells from Embryonic Stem Cells
Posted by JoVE Editors on 8/10/2016. Citeable Link.

A correction to the author list was made to: Derivation of Cardiac Progenitor Cells from Embryonic Stem Cells.

The following author is now listed as a co-corresponding author:

Lei Bu

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

95embryoidFACS

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved