JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

פרוטוקול זה מתאר את הערך של אנרגיה כפול CT ו- PET/CT הדמיה שיטות הערכה הדמיה והיעילות של הגידול. מאמר זה מדגים את שיטות מחקר ותוצאות נרכשה על ידי אנרגיה כפול CT PET/CT כדי להעריך את הכונה וטיפול ממוקד של גרורות סרטן קיבה הצפק.

Abstract

סרטן קיבה נשאר הרביעית שכיחות סרטן ברחבי העולם עם הישרדות חמש שנים של רק 20% - 30%. גרורות הצפק הוא הסוג השכיח ביותר של גרורות מלווה נתיחות סרטן קיבה והיא דטרמיננטה סופית של פרוגנוזה. מניעת ושליטה על התפתחות גרורות הצפק יכולים לשחק תפקיד בסיוע להאריך את ההישרדות של חולי סרטן קיבה. טכניקת דימות בלתי פולשני ויעיל יסייע לנו לזהות את הפלישה ותהליך גרורה של גרורות הצפק, לעקוב אחר השינויים בגושים סרטניים בתגובה לטיפולים. זה יאפשר לנו לקבל תיאור מדויק של תהליך הפיתוח ואת המנגנונים המולקולריים של סרטן קיבה. לאחרונה תארנו הניסוי באמצעות אנרגיה כפול CT (מבית) שחושב/טומוגרפיית פליטת פוזיטרונים טומוגרפיה (PET/CT) פלטפורמות איתור וניטור של גרורות סרטן קיבה בדגמים העכברים עירום. אנחנו הראו כי ניטור רציף שבועי עם מבית ו- PET/CT ניתן לזהות שינויים דינמיים גרורות הצפק. SFRP1-ביטוי במודלים עכברים סרטן קיבה הראתה חיובי ביצועים רדיולוגי ספיגה גבוהה יותר של FDG, שיפור גדל והולך, את רכב שטחמרבי (ערך ספיגת תקנית) של גושים הפגינו מגמה של שינוי ברור ב תגובה לטיפול ממוקד של TGF-β1 מעכב. במאמר זה, תיאר את הליכים מפורטים הדמיה לא פולשנית לערוך מחקר מורכבות יותר על סרטן קיבה גרורות הצפק באמצעות מודלים וסיפק תוצאות הדמיה נציג. השימוש של טכניקות הדמיה לא פולשנית צריך לאפשר לנו להבין את המנגנונים של tumorigenesis יותר, לפקח על הגידול של להעריך את ההשפעה של התערבויות טיפוליות עבור סרטן קיבה.

Introduction

סרטן הקיבה (GC) נשאר הגידול הרביעי הנפוץ ביותר ואת הסיבה המובילה השניה של סרטן התמותה ברחבי העולם1. למרות הדיוק באבחון וטיפול של סרטן קיבה השתבח מאד, גרורות הצפק הוא נקודת המפתח ביותר של סרטן הקיבה פרוגנוזה או החוזר והוא דטרמיננטה סופית של מוות לאחר הניתוח2. זה מקובל כי הפצת הצפק הוא מצב מסכן חיים של גרורות, שבה המחלה הופך בלתי נשלט, הפרוגנוזה של החולה הוא עני לאחר הפצתו הצפק הוא הוקם. לכן, הזיהוי, הערכה האפקט הטיפולי של גרורות סרטן קיבה הצפק הוא קריטי עבור הקלינית.

השכיחות הגוברת ואת התמותה מסרטן קיבה היה התיישר לחוקרים לזהות את המנגנונים המולקולריים. הביטוי גבוהה של גנים כגון חלבון המופרש עלי הקשורות 1 (sFRP1) עלול להוביל ההפעלה של מסלול איתות בשלבים המוקדמים של סרטן קיבה, קידום התהליך של צמיחה, התפשטות, בידול, אפופטוזיס הגידול3 , 4 , 5 , 6 , 7. sFRP1-ביטוי התאים הראה עלייה בביטוי של TGFβ, מטרות במורד הזרם, החובשים בתיווך TGFβ8. מחקרים קודמים הראו כי רמת TGF-β1 הוא מתואם עם גרורות הצפק, השלבים TNM של סרטן קיבה. תארנו את השינויים בהתפשטות תאים סרטן מווסתות על-ידי ביטוי sFRP1 וניגוד TGF-β1, חיה ויצר מודלים עבור גרורות הצפק להציג את הביצועים של הגידול דימות תחת השפעת הכונה.

מודלים בבעלי חיים עבור סרטן קיבה הם כלי הכרחי עבור ניסויים עם אסטרטגיות טיפוליות שונות מבלי להקריב חיות ובכוונתה התפתחות גידולים. מודלים בעלי חיים הוכיחו שימושי ללמוד על מנגנוני היווצרות גידולים ותאים המוצא לקביעת הנוכחות של תאי הגזע הסרטניים, בחינת אסטרטגיות טיפוליות שונות הרומן. לכן, שיטה לא פולשנית בזמן אמת יכול לספק תיאור מדויק של התפתחות גידולים בקיבה, הגידול מענה טיפולי, אשר ניתן לזהות התפתחות גרורות הצפק גושים בעכברים עירום, לעקוב אחר השינויים של גידול בתגובה התערבויות ניסיוני וטיפוליים שונים.

כיום, גלאי ריבוי CT (הכלילית) ממלא תפקיד חשוב ב TNM הזמני של סרטן קיבה והיא שימושית לניבוי הגידול resectability preoperatively9. עם זאת, מחקרים רדיולוגי בחולים עם קרצינומה של הקיבה בהיסטולוגיה מוכח בעיקר התבססו על מורפולוגיה. הדמיה מבית מרחיב את הפרמטרים כדי לשקף מידע פונקציונלי על-ידי מתן תמונות מונוכרומטי, עשוי להיות מועיל לשיפור של N היערכות דיוק עבור סרטן קיבה. יתר על כן, טכניקה זו תאפשר רכישת תמונות חומר-ריקבון, אשר עשוי להיות שימושי כדי להבדיל בין הבדיל, מובחן קרצינומה של הקיבה, ובין גרורתי, ללא גרורות בלוטות לימפה10 . עם כניסתה של מבית, ההיבט הדמיה תפקודית של CT גם נוספה ליישומים קליניים, לתרום הערכות של יעילות טיפולית, נבואה התחזיות החולה11,12,13. PET/CT היא טכניקת הדמיה שימושי עבור זיהוי ו הזמני של סרטן הקיבה והוא יכול להעריך להישנות הגידול ביעילות14. התפשטות תאים סרטניים וגם אנגיוגנזה היו שניהם נחשב הכרחי בפיתוח של הגידול לזיהוי15, גושים סרטניים הראה הופעה חיובית עם גבוה SUVmax על כן בהתבסס על העדפה שלהם אירובי גליקוליזה, 18F-FDG, אנלוגי גלוקוז, נוצלה בתור מכשיר מעקב מבטיח באבחון של מחלות ממאירות, בשילוב עם PET/CT16. שיטה זו מסתמכת על צריכת גלוקוז מהירה של רקמת הגידול ויש רחבה יישומים קליניים, כולל ולקדם הזיהוי הזמני, הערכת הפרוגנוזה של גידולים, כמו גם ניטור בתגובה של הגידולים טיפול17 , 18. כמו שיטות לא פולשנית, מבית ו- PET/CT היה להיות מנוצל כדי לאבחן גידולים ממאירים, ולהעריך את הגידול תגובה לטיפולים שונים.

הקבוצה שלנו השתמשה בשיטה זו הדמיה לא פולשנית עם סורקים מבית ו- PET/CT כדי לזהות ולנטר את תהליך הגידול גרורות חי עכברים19. חרשנו ממצאי ההדמיה המושרה על ידי sFRP1-ביטוי סרטן קיבה תאים ויוו באמצעות עכברים עירום, מבית ו- PET/CT, שתיאר הטיפול שינויים של רכב שטחמקס הערך בעקבות לפלח TGF-β1 המדכא כדי לאשר ההתפתחות של הגידול גושים ב הצפק לאחר אינדוקציה ג'ין, ולמד גם השינויים גושים סרטניים בתגובה ניסיוני טיפולים. בנייר זה, אנו מציגים הליכים מפורטים מידול גרורות סרטן קיבה הצפק בעכברים, זיהוי שלו וניטור מבית, כן

Protocol

עבודה זו בוצעה בהתאמה קפדנית עם הסטנדרטים שנקבעו על-ידי המנחים על טיפוח ועל שימוש של מעבדה חיות של אוניברסיטת ג'יאו טונג שאנגחאי, אושרה על ידי המעבדה אתיקה הוועדה של Ruijin בית חולים לחיות.

1. במודל חיה של הצפק גרורות סרטן קיבה

  1. לחלק קו תא בינוני הבדיל מפקדת הסטארגייט-7901 סרטן קיבה אנושית של מפקדת הסטארגייט-7901/sFRP1 וקבוצת מפקדת הסטארגייט-7901/וקטור. תרבות שתי קבוצות של תאים בנפרד RPMI 1640 בתוספת 10% סרום שור עוברית, 100 יחידות/mL סטרפטומיצין, פניצילין µg/mL 100 ב 37 מעלות צלזיוס באווירה humidified עם 5% CO2.
  2. להשתמש בשבוע 4-6-עירום-עכברים הישן של athymic הנשי BALB/c, עם משקולות הגוף של 25-30 ג מקום חיות תחת תנאים מסוימים ללא הפתוגן במתקן בעלי חיים.
  3. לחלק עכברים באופן אקראי את ביטוי sFPR1 וקבוצת הטעינה ריק sFPR1.
    הערה: בכל קבוצה היו עכברים עירום עשר; עכברים עשרים חולקו באופן אקראי TGF-β1 הטיפול וקבוצת TGF-β1 שליטה, עם עכברים עירום עד 5 לכל חיה בכלוב.
  4. להקים קבוצת מודלים sFPR1-ביטוי xenograft גרורות הצפק על ידי מתן 150 µL (2 x 106 תאים/mL) השעיות של מפקדת הסטארגייט-7901/sFRP1 תאים דרך חלל הבטן; מפקדת הסטארגייט-7901/וקטור תאים מנוהלים להקים קבוצת הטעינה ריק.
    הערה: השתמש hemocytometer של ספירת שיטה לקביעת הריכוז של תאים20.
  5. להקים קבוצת מודלים xenograft גרורות הצפק על ידי מתן µL 150 (2 x 106 תאים/mL) השעיות של מפקדת הסטארגייט-7901 תאים דרך חלל הבטן. לנהל את הטיפול היעד של TGF-β1 מעכב SB431542 לאחר תקופה של שבועיים של צמיחה בזריקה בקרום הבטן במינון של 100 µL/10 גרם של משקל גוף בכל יום לעכברים בקבוצה הטיפול.
    1. לנהל תמיסת במינון אותו לעכברים בקבוצת הביקורת.
  6. לבצע את מבית ו- PET/CT סריקה 1 יום לפני הטיפול ו- 1 יום, 7 ימים, 14 ימים, ו-21 ימים לאחר הטיפול.

2. מבית עבור המודל החייתי גרורות הצפק

הערה: החיה הדמיה ניסוי הושגה על האנרגיה כפול סורק CT (ראה טבלה של חומרים). אנחנו יצרנו את פרוטוקול הדמיה מבית קשורים על פי המחקרים הקודמים.

  1. כיוונון עבור מבית הדמיה פרוטוקול
    1. מסוף מחשב דימות, בחר בסמל "פרוטוקול ניהול" כדי להזין את הממשק הבא ולאחר מכן לחץ על האפשרות "פרוטוקול ניהול" כדי לצפות במסך ניהול פרוטוקול.
    2. הממשק 'פרוטוקול המשתמש', בחר אזור הבטן להיכנס לרשימה פרוטוקולים הבטן.
    3. לחץ על הרווח הריק ברשימות פרוטוקול ובחר בלחצן "חדש" כדי להקליד את השם של פרוטוקול חדש: "סרוק מבית החיות". הקש על מקש "Enter" בלוח המקשים, בחר בלחצן "הצופה" בחלון המוקפץ, לחץ על "אישור" כדי להתקין את הצופים הסדרה (הסדרה הראשונה).
    4. בחר את מצב "XY" עבור "נקודת התייחסות של Anatomical" ו- "ראשה פרקדן תנוחת" עבור 'התמצאות החולה'. לחץ על האפשרות "העברה אוטומטית" ובחר את המיקום של תחנת עבודה איפה הסדרה תמונות ייטען. השם "הצופים שלב" בתיאור הסדרה.
    5. במסך 'עריכת תצוגה', ודא הפרמטרים הרלוונטיים סריקה מוגדרות כפי שמוצג להלן: "מיקום התחלה" ו "מיקום קצה" אפשרויות מוגדרות "S50" ו "I50" בהתאמה, "KV" ב- "100", "אמא'לה" "80", "ב- 90°" לתפקיד"לרוחב הצופים", "0°" לתפקיד"AP צופה ", ונבדוק את" WW/חבצלות מים "-"400/40".
    6. בשלב הבא, צור הסדרה השנייה שאינם משופרת לסריקה. לחץ על "צור סדרה חדשה", בחלון המוקפץ כדי לבחור את הסמלים "צירית" ואחרי "ליצור".
    7. שם הסדרה כמו "-שלב C" תיאור סדרת, התור 'הצג מאתר"ב. הממשק סוג הסריקה, בחר את סוג הסריקה "הסליל" ואת 0.5 s בפעם"סיבוב", לחץ על האפשרות "ספיד עבה" כדי להגדיר את הפרמטרים (גלאי כיסוי-40 מ מ, עובי לוליינית ב 0.625 מ מ, גובה ומהירות -0.516:1/20.62, הפעם סיבוב 0.5 s) בגג נפתח חלון, מרווח 0.625 מ"מ, Gantry ציצי כשהמספר הוא 0, גוף קטן בחר SFOV, kV כשהמספר הוא 100, לחץ"mA"ולאחר מכן הקלד 600 עבור אמא ידנית.
    8. לחץ על הסמל "Recon פרמטרים" ופתח את החלון המוקפץ "Recon אפשרות". בחר "פלוס" במצב סיור; לחץ על הסמל "פרוסה" לבחור "ss50 לחתוך 50%" מצב "במסך הגדרת אסיר". הגדרת הפרמטרים שנותרו כדלקמן: DFOV ב- 25 ס"מ, R/L, A / P במרכז 0 ס"מ, סוג סיור לבחור "Stnd", גודל מטריצה-512.
    9. יצירת הסדרה השלישית סריקה משופרת סריקה חוזרת 2.1.8 תגובה על הצעד, שם זה כמו "+ שלב C QC" להפעיל "הצג מאתר"; הקבוצה הראשונה היא ההגדרה של סדרת בשלב עורקי.
    10. הממשק 'סוג סריקה', לחץ על "GSI (אבן חן דימות ספקטרלי)", בחר סוג הסריקה "הסליל", בחר את הפרוטוקול "GSI-52" בחלון 'הבטן GSI מראש הבחירה'. סט מיקום והסיום מיקום על פי הסריקה שאינם משופרת.
      1. לחץ על הסמל "Recon פרמטרים" ופתח את החלון המוקפץ "Recon אפשרות". במצב Recon, בחר "פלוס" ו 'GSI באפשרות' לחץ על "QC"; הפרמטרים שנותרו יהיו זהים לאלה שלב 2.1.8 תגובה על.
    11. לחץ על הסמל "R2", בחר 'כן' היחידים "Recon מופעלת" בחר "עובי"-0.625 והקלד 0.625 עבור "מרווח זמן". לפתוח את החלון המוקפץ "Recon אפשרות", במצב Recon בחר פלוס"; אפשרויות GSI, לחצו על "מונו" וקבעו את קוו ל-70 קוו; חלון הגדרת אסיר, בחר "GS40 40%" מצב עבור הגדרת אסיר GSI. הפרמטרים שנותרו מוגדרים עם צעד 2.1.8 תגובה על. שם שלב זה כמו "+ C 70keV שלב".
    12. לחץ על הסמל "R3" ובחר "כן" היחידים "Recon מופעלת" הגדר "עובי"-1.25 וסוג 0.625 עבור "מרווח". לפתוח את החלון המוקפץ "Recon אפשרות", במצב Recon בחר "פלוס" ו- "IQ משופרת"; אפשרויות GSI, לחץ על "מונו", הגדר את קוו 70 קוו ולחץ על "קובץ הנתונים GSI"; ודא הגדרת אסיר GSI לפי שלב 13. הפרמטרים שנותרו מוגדרים כמו שלב 2.1.8 תגובה על. שם זה כמו "+ C שלב מונו".
    13. לחץ על "הוסף קבוצה" כדי ליצור שני לסרוק קבוצות לייצג את הפורטל שלב, שלב עיכוב, בהתאמה. ודא כי הטווחים "מיקום התחלה" ו- "מיקום קצה" של כל שלב הסריקה עקביים, הפרמטרים שנותרו זהים השלב עורקי. הקלד את זמן ההשהיה ב "קבוצת הכנה": הקבוצה הראשונה (שלב עורקים) ב 0 s, הקבוצה השנייה (שלב פורטל) ב-8 s, והקבוצה השלישית (שלב עיכוב) בגיל 16 s.
    14. לחץ על האפשרות "מקבל" כדי להציל את הפרוטוקול לאחר כל ההגדרות נעשות.
  2. תהליך ההדמיה מבית
    1. בחרו העכברים עירום באופן אקראי קבוצות טיפול ובקרה לפני כל סריקה. מקום החיות שנבחר בכלובים חדשה ולסמן אותם בנפרד.
    2. מהר העכברים במשך 4 שעות עם מים אך ללא מזון או מצעים.
    3. להסיר את העכברים ניסיוני מהמרכז ניסויים בבעלי חיים h 1 לפני הסריקה, וודא כי העכברים ממוקמים בסביבה חמה חדשה עד הסריקה מתחילה.
    4. עזים ומתנגד כל העכברים ניסיוני עם זריקה בקרום הבטן של סודיום פנטוברביטל 2.5% (1.0 מ"ל/ק"ג משקל גוף) לפני מבית סריקת הדמיה, לאשר את העומק של הרדמה על ידי רפלקס קמצוץ של הבוהן. השתמש משחה על העיניים למניעת יובש תחת הרדמה.
      הערה: ודא כי בראש כל עכבר ערום הוא בעמדה התחתונה כאשר הזרקת הסמים, ובכך להקטין את הנזק לאיברים הפנימיים. שים לב ההזרקה ואת העומק של הזרקה. המקום קצה המזרק בזווית של 45 מעלות לתוך הבטן התחתונה ימינה/שמאלה ולהבטיח כי העומק המחט הוא כזה נמנעת הזרקה לתוך המעיים ואיברים אחרים.
    5. לחץ על הסמל "מטופל חדש", קלט את המידע הבסיסי על העכבר כולל מזהה המטופל שלו שם. בפרוטוקול' משתמש', לחץ על הפרוטוקול"הבטן", בחר את הפרוטוקול "סרוק מבית בעלי חיים" כדי להזין את הממשק מבצע.
    6. לאחר הרדמה מושרה, להזיז את העכבר כל על גבי פלטפורמת מקבע בעלי חיים במצב פרקדן, לתקן את זנבו עם קלטת כדי לוודא שזה לא מתכופף. לחטא את הזנב עם אלכוהול להזרקה הסוכן הבאים ניגוד לווריד-הזנב.
    7. להזיז את המיטה בדיקת ct כך הלייזר קו חיצוני המיקום הוא מכסות את הבטן התחתונה של החיה. לחץ על לחצן "איפוס" מיקום... יושלם.
      הערה: המיקום של קווים מיקום חיצוני מכסות את הבטן התחתונה של החיה מבטיחה כי החיות נמצאים רחוק ככל האפשר על החלק החיצוני של המכשיר עבור חדות קל סוכן הניהול לווריד הזנב.
    8. לחץ על הסמל 'אשר' ובצע את סדר הלחצנים מהבהב בלוח המקשים כדי להשלים את הצופים סריקה. בחר את "הסדרה הבאה" סמל לאחר הצופים סריקה הושלמה והזן את הממשק הלא משופרת לסריקה.
    9. במסך נכון, הגדר את "מיקום התחלה" ואת "מיקום קצה" על הצופים נוף כדי להגדיר את טווח סריקה. לשמור על אותו טווח ב 'לרוחב הסקאוט' ו- 'AP צופה' ולכסות את עוצמת הקול של כל הגוף של בעל החיים.
    10. לחץ על הסמל 'אשר' ובצע את סדר הלחצנים מהבהב בלוח המקשים כדי להשלים את הצופים סריקה.
    11. להזריק כל עכבר iopamidol במינון של 0.2 גרם/100 גרם דרך הווריד של הזנב.
      הערה: בחרנו לנהל המדיום הניגודיות באופן ידני ולשמור את קצב הזרקת יציב כמו ככל האפשר. . זה הטוב ביותר כדי ללכוד את שיפור מוקדם של הגידול במהלך דימות.
    12. לחץ על "הבא בסדרת" כדי לבצע סריקה משופרת. הגדר "מיקום התחלה" ואת "מיקום קצה" לפי הסריקה שאינם משופרת. לחץ על הסמל "מאשרים" ובצע את סדר הלחצנים מהבהב בלוח המקשים כדי להשלים את סריקות משופרת דינמי, includingarterial שלב, שלב פורטל ולאחר שלב מושהית.
      הערה: לחץ על הסמל 'אשר' מיד כדי להתחיל סריקה אחרי הסוכן הניגוד מוזרק. זה חיונית וחשובה עבור סריקה משופרת להבטיח שהתמונה הטובה ביותר של שלב עורקי נלכד. עם זאת, חלק לעכב את זמן מה לאחר לחיצה על הסמל "מאשרים" תוכל להבטיח כי הצוות ניסיוני נסוגה בשלום מן החדר סריקה.
    13. לחץ על "סיום הבחינה" כדי לצאת את ממשק הסריקה לאחר סריקה הושלמה; הסדרה תמונות ייטען אוטומטית לתחנת העבודה.
    14. למקם את החיה לכלוב ריק לאחר השלמת הסריקה עם עכברים כל, ולבחון אותם עד שהם יש להכרתו. אין להשאיר בעל חיים ללא השגחה עד זה שהכרתו מספיק כדי לשמור על recumbency בחזה ובצלעות. ואז להעביר העכברים לתוך חדר נקי בעלי חיים.
  3. פוסט מבית הדמיה ניתוח
    1. לאתר הסדרה עכברים על workstationinterface מבית (ראה טבלה של חומרים) ובחר "+ שלב מונו C" סדרת רשימות. פתח "GSI נפח הצופה" ובחר "GSI VV כללי" פרוטוקול מהממשק ' GSI פרוטוקול מנהל '.
    2. לחץ על "הצג סוג" פעיל הביאור בפינה השמאלית העליונה של viewports התמונה ובחר התמצאות "הילתית" מתוך התפריט הנפתח.
    3. לקבלת תמונה אחת אשנב, לחץ על הביאור פעיל "כרך 1" בפינה השמאלית העליונה ובחר "מונו" כרכים מתוך התפריט הנפתח. באופן דומה, אשנב עוד תמונה, בחר אמצעי אחסון "יוד (מים)". לחץ לחיצה ארוכה על לחצן העכבר השמאלי, גרור את התמונה מ- "יוד (מים)" אשנב "מונו", סמן את התיבה "לערבב את התצוגות" כדי לקבל את התמונות צבע התמזגו.
    4. לחץ וגרור במרכז הסמל "התמונה המגילה" כדי לצפות בתמונות. שמור את התמונות שהראו תוצאות חיוביות כמו תמונות צבע התמזגו.

3. PET/CT עבור המודל החייתי גרורות הצפק

הערה: ראה את הטבלה של חומרים עבור הצלם PET/CT נעשה שימוש. אנחנו יצרנו את PET/CT קשורים הדמיה פרוטוקול לפי זה סעיף21.

  1. הגדרת פרוטוקול מיקרו-PET/CT הדמיה
    1. עבור כל גוף סריקת סי. טי, להגדיר הנוכחית ב- 500 µA, מתח 80 kV, זמן החשיפה ב 200 ms ו 240 שלבים עבור 240 מעלות סיבוב. גלאי רנטגן, בחר רזולוציה בהגדלה"מערכת נמוכים" עם תחום ההדמיה צירית 78 מ מ, מיטת יחיד במצב. השתמש בשיטת "שחזור קונוס-קרן משותפת" ובחר באפשרות "שחזור בזמן אמת", כך המחשב המארח יכול להתחבר עם המחשב שחזור בזמן אמת ייעודי (קוברה) כדי להתחיל את המשימה.
    2. עבור חיית המחמד הרכישה, באפשרות "לרכוש על ידי הזמן" להגדיר "זמן הסריקה קבוע" 600 s (10 דקות). הגדר "ללמוד" איזוטופ"" F-18, "רמת האנרגיה" קוו 350-650.
    3. כדי לייצר ההיסטוגרמה חיית המחמד, הגדר את "מסגרת דינאמית" "שחור" תהליך לנתונים כמו מסגרת אחת למשך כל השהות להשיג סריקה סטטי. הגדרת סוג היסטוגרמה כדי "3D" ובחר באפשרות "אין פיזור correction".
    4. עבור חיית המחמד שיקום, לשחזר תמונות באמצעות אלגוריתם OSEM3D ואחריו מפה או מפה מהר22 שסופקו על-ידי PET/CT workstationsoftware (ראה טבלה של חומרים).
  2. הכנה לפני PET/CT הדמיה
    1. מהר העכברים אשר עברו ניסויים מבית במשך 4 שעות ולהעביר העכברים חדשים בעלי חיים כלובי 30 דקות לפני הדמיה.
    2. שוקל העכברים והקלטה של המשקל שלהם.
    3. בצע את נהלי הבטיחות של המכון לרכוש ולשאת את החבילה המכילים חומרים רדיואקטיביים (RAM). השתמש חומת מגן כדי לבצע את 18F-FDG (5 mCi), ולמדוד את רדיואקטיביות סה כ 18נ-FDG עם מיגון.
    4. לדלל את 18F-FDG עם תמיסת מלח לרדיואקטיביות המתאים של הזרקת עכברים.
      הערה: הפעילות מדוללת של 18F-FDG צריך להיות זמין ב 100-200 µL µCi/100 עבור כל עכבר.
      1. צייר µL 200 18פתרון F-FDG לתוך מזרק 1 מ"ל. למדוד הרדיואקטיביות של המזרק שלם עם מיגון ולהקליט את הזמן 18F-FDG.
    5. להזריק כל עכבר עם 200 µL 18F-FDG פתרון דרך המסלול לעירוי הזרקה הזנב, לרשום את הזמן הזרקת 18F-FDG. אחרי הזריקה של כל העכברים, למדוד את הרדיואקטיביות שיורית של המזרק עם מיגון מיד, לרשום את הזמן שנלקחו המדידות לאחר סיום של הזריקה.
    6. לחשב את הפעילות מוזרק 18F-FDG עבור כל עכבר על-ידי הנוסחה הבאה: מוזרק פעילות (µCi) = פעילות המזרק לפני הזרקת - פעילות במזרק לאחר ההזרקה.
  3. תהליך דימות PET/CT
    1. מכניסים את החיה תא אינדוקציה הרדמה; עזים ומתנגד העכבר באמצעות בשאיפה 3% איזופלוריין חמצן לאחר סיום הזרקה 18F-FDG.
      הערה: בצע את ההנחיות רווחת כל המתאים לפעולה; לחמם העכברים באמצעות כרית החימום. השתמש משחה על העיניים למניעת יובש תחת הרדמה.
    2. לאחר הרדמה מושרה, להזיז את העכבר אל המיטה סריקה מיקרו-CT תוך כדי שמירה על הרדמה רציפה, התחממות כדור הארץ. מקם את הראש של העכבר בתוך מסיכת פנים חרוט המספק ברציפות איזופלוריין (2%) חמצן בספיקה של המקום L לדקה 2 העכבר במצב פרקדן על מנת להבטיח שהיציבה היא עקבית עם זה מבית סריקות.
    3. הזז החיה לכניסה של הסורק PET/CT, לחץ על הסמל "לייזר" מן המתבונן סרגל הכלים, להשתמש בממשק הבקרה משטח המגע כדי להזיז את המיטה כך הבטן של העכבר הינו ממוקם במרכז PET ו- CT השדה-of-view (FOV) במהלך סריקה. בחלון "יישר לייזר", בחר "סרוק קודם סוג" "ct", וכן "לחיות מחמד-רכישת כלולה בזרימת" כאפשרות.
    4. פתח את החלון "נוף הצופים" ולרכוש נוף הצופים radiograph רנטגן. להתאים את המיקום של המיטה בעלי חיים כך בתחום מרכז תצוגה של CT הינו ממוקם במרכז של הגוף העכבר.
    5. בחר את הפרוטוקול שהוקמה קודם לכן (שלב 3.1). קלט מספר עכברים לדימות (במרוכז) בחלון המוקפץ, לחץ על האפשרות "הגדרות" ולאחר מכן הזן את המשקל. לאחר מכן לחץ על האפשרות "הגדרת" שוב, בצע את ההוראות החלון המוקפץ כדי להשלים את ההגדרה.
    6. לחץ על הסמל "הפעל זרימת עבודה" כדי להתחיל סריקה.
    7. הערכת האיכות של תמונות CT ו- PET שנרכשו לאחר השלמת כל הבדיקות. להעביר את המידע דרך הרשת ה-post imaging ניתוח למחקר נוסף.
      הערה: להתאים את רוחב החלון ואת רמת חלון של התמונה כדי להבטיח כי הניגוד בין האיברים מוצגת כראוי. בדוק את הרזולוציה של האברים של תמונות כדי לאשר את איכות הדמיה.
    8. הסר את החיה של הצלם, המתת חסד באופן מיידי על-ידי נקע בצוואר הרחם. השתמש מערכת ההדמייה החיה הבאה במרוכז.
  4. פוסט PET/CT הדמיה ניתוח
    1. פתח את התוכנה תחנת עבודה PET/CT, לייבא נתוני סדרה התמונה CT ו- PET לתוך התוכנה. בחלון "הרשמה", לחץ על האפשרות "ניתוח כללי" לרשום CT ו- PET תמונות ביחד, לבחור את הדגם "שמים" מתחת לחלון "סקירה" להראות יישור מושלם בין תמונות CT ו- PET.
    2. לזהות הגושים הצפק עם הפניות שמספקת תמונות שיתוף רשום בחלון "אזור של הריבית (ROI) כימות".
    3. בחלון "אזור של הריבית (ROI) כימות", צייר רועי עם הכלים פני התמונות מאוחה, לערוך את הגודל והצורה של רועי, שיא הערךהמרבי של רכב שטח, ואז פלט ולשמור התמונות הממוזגות שנבחרו.

תוצאות

מבית, סריקת PET/CT בוצעו על עכברים עירום לאחר שבועיים של תא קו זריקות. תמונות GSI הניבו תוצאות מצוינות עבור הצגת תת עורית גרורות מעבר קו המתאר של הבטן עבור קבוצת ביטוי sFRP1, גרורות עם שיפור היקפיים אושר ע י סרגל צבע התמונה (איור 1ה-ז). תמונות PET/CT מתואר FDG foc...

Discussion

מודלים בעלי חיים היו בשימוש נרחב במחקר של המנגנונים המולקולריים שבבסיס סרטן קיבה, ועל מנת להתנסות עם אסטרטגיות טיפוליות שונות23,24,25. במחקר זה, שתיארנו פרוטוקול מפורט עבור סרטן קיבה גרורות הצפק עירום עכברים מידול, באמצעות מבית, PET/CT כדי גידו...

Disclosures

המחברים יש שאין ניגודי אינטרסים להכריז.

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי NSFC (מס ' U1532107) ופרוייקט שנגחאי ג'יאו טונג אוניברסיטת הנדסה ביו-רפואית (מס ' YG2014MS53). המחברים רוצה להכיר לי ג'יאניינג ושל שן יאן הערות מועילות, תמיכה טכנית מאמצים בפיתוח מבית ו- PET/CT הדמיה שיטה.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
IohexolBEJING BEILU PHARMACEUTICAL CO,LTDNMPN:H20053800non-ionic contrast medium for DECT scan
normal salineHUNAN KELUN PHARMACEUTICAL CO,LTDNMPN:H43020455placebo of control group
BALB/c nude mice SLAC LABORATORY ANIMALBALB/cASlac-nuanimal model
SGC-7901  cellsLibrary of typical culture of Chinese academy of sciencesTCHu 46gastric cancer cell 
SB431542SelleckNo.S1067TGF-β1 inhibitor
GE Discovery CT750 HDGE Healthcaredual-energy spectral CT scanner 
AW Volumeshare5GE Healthcaredual-energy spectral CT workstation
Siemens Inveon micro-PET/CTSiemens Preclinical Solutionpositron emission tomography/
computed tomography scanner 
Inveon Acquisition WorkplaceSiemens Preclinical SolutionPET-CT workstation

References

  1. Ferlay, J., et al. Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012. Int J Cancer. 136 (5), 359-386 (2015).
  2. Kobayashi, D., Kodera, Y. Intraperitoneal chemotherapy for gastric cancer with peritoneal metastasis. Gastric Cancer. 20, 111-121 (2017).
  3. Gu, W., Li, X., Wang, J. miR-139 regulates the proliferation and invasion of hepatocellular carcinoma through the WNT/TCF-4 pathway. Oncol Rep. 31 (1), 397-404 (2014).
  4. Sugai, T., et al. Molecular analysis of gastric differentiated-type intramucosal and submucosal cancers. Int J Cancer. 127 (11), 2500-2509 (2010).
  5. Shi, Y., He, B., You, L., Jablons, D. M. Roles of secreted frizzled-related proteins in cancer. Acta Pharmacol Sin. 28 (9), 1499-1504 (2007).
  6. Amin, N., Vincan, E. The Wnt signaling pathways and cell adhesion. Front Biosci (Landmark Ed). 17, 784-804 (2012).
  7. Jones, S. E., Jomary, C. Secreted Frizzled-related proteins: searching for relationships and patterns. Bioessays. 24 (9), 811-820 (2002).
  8. Qu, Y., et al. High levels of secreted frizzled-related protein 1 correlate with poor prognosis and promote tumourigenesis in gastric cancer. Eur J Cancer. 49 (17), 3718-3728 (2013).
  9. Pan, Z., et al. Determining gastric cancer resectability by dynamic MDCT. Eur Radiol. 20 (3), 613-620 (2010).
  10. Pan, Z., et al. Gastric cancer staging with dual energy spectral CT imaging. PLoS One. 8 (2), 53651 (2013).
  11. Kim, M. J., Hong, J. H., Park, E. S., Byun, J. H. Gastric metastasis from primary lung adenocarcinoma mimicking primary gastric cancer. World J Gastrointest Oncol. 7 (3), 12-16 (2015).
  12. Maeda, H., Kobayashi, M., Sakamoto, J. Evaluation and treatment of malignant ascites secondary to gastric cancer. World J Gastroenterol. 21 (39), 10936-10947 (2015).
  13. Bensinger, S. J., Christofk, H. R. New aspects of the Warburg effect in cancer cell biology. Semin Cell Dev Biol. 23 (4), 352-361 (2012).
  14. Smyth, E., et al. A prospective evaluation of the utility of 2-deoxy-2-[(18) F]fluoro-D-glucose positron emission tomography and computed tomography in staging locally advanced gastric cancer. Cancer. 118 (22), 5481-5488 (2012).
  15. Oka, S., Uramoto, H., Shimokawa, H., Iwanami, T., Tanaka, F. The expression of Ki-67, but not proliferating cell nuclear antigen, predicts poor disease free survival in patients with adenocarcinoma of the lung. Anticancer Res. 31 (12), 4277-4282 (2011).
  16. Zhao, C. H., Bu, X. M., Zhang, N. Hypermethylation and aberrant expression of Wnt antagonist secreted frizzled-related protein 1 in gastric cancer. World J Gastroenterol. 13 (15), 2214-2217 (2007).
  17. Cheson, B. D. Role of functional imaging in the management of lymphoma. J Clin Oncol. 29 (14), 1844-1854 (2011).
  18. Fuster, D., et al. Preoperative staging of large primary breast cancer with [18F]fluorodeoxyglucose positron emission tomography/computed tomography compared with conventional imaging procedures. J Clin Oncol. 26 (29), 4746-4751 (2008).
  19. Lin, H., et al. Secreted frizzled-related protein 1 overexpression in gastric cancer: Relationship with radiological findings of dual-energy spectral CT and PET-CT. Scientific Reports. 7, 42020 (2017).
  20. Cadena-Herrera, D., et al. Validation of three viable-cell counting methods: Manual, semi-automated, andautomated. Biotechnol Rep (Amst). 7, 9-16 (2015).
  21. Wang, X., Minze, L. J., Shi, Z. Z. Functional imaging of brown fat in mice with 18F-FDG micro-PET/CT. J Vis Exp. (69), (2012).
  22. Grootjans, W., et al. Performance of 3DOSEM and MAP algorithms for reconstructing low count SPECT acquisitions. Z Med Phys. 26 (4), 311-322 (2016).
  23. Chang, H. R., et al. Improving gastric cancer preclinical studies using diverse in vitro and in vivo model systems. BMC Cancer. 16, 200 (2016).
  24. Chang, H. R., et al. HNF4alpha is a therapeutic target that links AMPK to WNT signalling in early-stage gastric cancer. Gut. 65 (1), 19-32 (2016).
  25. Zheng, H. C., et al. BTG1 expression correlates with pathogenesis, aggressive behaviors and prognosis of gastric cancer: a potential target for gene therapy. Oncotarget. 6 (23), 19685-19705 (2015).
  26. Yamada, A., Oguchi, K., Fukushima, M., Imai, Y., Kadoya, M. Evaluation of 2-deoxy-2-[18F]fluoro-D-glucose positron emission tomography in gastric carcinoma: relation to histological subtypes depth of tumor invasion, and glucose transporter-1 expression. Ann Nucl Med. 20 (9), 597-604 (2006).
  27. Hirose, Y., et al. Relationship between 2-deoxy-2-[(18)F]-fluoro-d-glucose uptake and clinicopathological factors in patients with diffuse large B-cell lymphoma. Leuk Lymphoma. 55 (3), 520-525 (2014).
  28. Tchou, J., et al. Degree of tumor FDG uptake correlates with proliferation index in triple negative breast cancer. Mol Imaging Biol. 12 (6), 657-662 (2010).
  29. Coleman, R. E., et al. Concurrent PET/CT with an integrated imaging system: intersociety dialogue from the Joint Working Group of the American College of Radiology the Society of Nuclear Medicine, and the Society of Computed Body Tomography and Magnetic Resonance. J Am Coll Radiol. 2 (7), 568-584 (2005).
  30. Brepoels, L., et al. Effect of corticosteroids on 18F-FDG uptake in tumor lesions after chemotherapy. J Nucl Med. 48 (3), 390-397 (2007).
  31. Spaepen, K., et al. [18)F]FDG PET monitoring of tumour response to chemotherapy: does [(18)F]FDG uptake correlate with the viable tumour cell fraction. Eur J Nucl Med Mol Imaging. 30 (5), 682-688 (2003).

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

131CTPET CT

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved