JoVE Logo
Authors
Contact Us

Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • תוצאות
  • Discussion
  • Disclosures
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

אנו מציגים שיטה פשוטה למדי ורגיש לקוונפיקציה מדויקת של צפיפות צינור המרה בכבד העכבר. שיטה זו יכולה לסייע בקביעת ההשפעות של מכפילי גנטי וסביבתי ואת האפקטיביות של טיפולים פוטנציאליים מודלים העכבר של מחלות המרה.

Abstract

העכבר משמש באופן נרחב כאורגניזם מודל ללמוד מחלות המרה. כדי להעריך את התפתחות ותפקוד של מערכת המרה, טכניקות שונות משמשות, כולל סרום כימיה, ניתוח היסטולוגית, וכתמים חיסוני עבור סמנים ספציפיים. למרות טכניקות אלה יכול לספק מידע חשוב על מערכת המרה, הם לעתים קרובות לא מציגים תמונה מלאה של צינור המרה (BD) מומים התפתחותיים על פני הכבד כולו. זה חלק בשל היכולת האיתנה של כבד העכבר כדי לנקז את המרה אפילו בבעלי חיים עם ליקוי משמעותי בפיתוח המרה. כאן אנו מציגים שיטה פשוטה כדי לחשב את המספר הממוצע של BDs המשויכים כל וריד הפורטל (PV) בסעיפים המכסים את כל האונות של עכברים מוטציה/טרנסגניים. בשיטה זו, כבדים מורכבים ומנות בצורה סטריאוטימית כדי להקל על השוואה בין גנוטיפים שונים ותנאים ניסיוניים. BDs מזוהים באמצעות מיקרוסקופ קל של מיקרוקרטין ויטראז ', ולאחר מכן נספר ומחולק על ידי המספר הכולל של PVs להציג באזור הכבד. לדוגמה, אנו מראים כיצד שיטה זו יכולה להבחין בבירור בין עכברים מסוג פראי לבין מודל עכבר של תסמונת אלאלאין. השיטה המוצגת כאן אינה יכולה להיות מחליפה לטכניקות המבראות את המבנה התלת-מימדי של עץ המרה. עם זאת, הוא מציע דרך קלה וישירה כדי לאמוד את פיתוח BD להעריך את מידת היווצרות התגובה ductular בעכברים.

Introduction

עץ המרה הוא חלק מכריע בכבד היונקים, ומאפשר למעבר המרה מהפטציטים לבטן. תעלות המרה בתוך הכבד (BDs) נוצרות על ידי המרה, אשר מבדילים בין הפוטנציאל הפוטנציאלי באמצעות חריץ וTGFβ איתות1,2. המפרט הנכון והמחויבות של המרה וההרכבה שלהם לתוך BDs בוגרת הם קריטיים לפיתוח עץ המרה הפנימי של הדלקת הכבד. כמו הכבד גדל במהלך הפיתוח או על התחדשות איברים, מערכת המרה צריך להתפתח לאורך הכבד כדי להבטיח ניקוז המרה תקין. יתר על כן, מספר מחלות syndromic ושאינם סינכדרומית התוצאה בפאולסיטי של BDs3. בנוסף, מספר מחלות הכבד חריפה וכרוניות להצמיח תגובות ductular כביכול בכבד, אשר מוגדרים כנוכחות של מספר משמעותי של תאים המבטאים סמנים המרה אך לא בהכרח נובעים תאי המרה או טופס פטנט BDs4. בתסמונת הפרעת המערכת הולטיסיסטים (algs), הפלוייתת של החריץ ליגjagged1 (JAG1) התוצאות במערך BD עני וכולאוסטזיס5,6. המעבדה שלנו הוכיחה לאחרונה כי שנוצר בעבר Jag1 heterozygous קו7 הוא מודל חיה של BD דלות ב algs8. במודל העכבר הזה של ALGS, האלאנגיוציטים עדיין נוכחים. עם זאת, הם נכשלים להתחייב להתאגדות לתוך בוגרת, פטנט BDs8. לכן, ניתוח של הכבד במודל של BD דלות דורש יותר מאשר נוכחות לכאורה או העדר המרה. חשוב להעריך במדויק את המידה שבה BDs בוגרים נמצאים בכבד.

בפתולוגיה אנאטומית, ישנן שיטות כמותיים מקובלות להערכת האם ה-BD דלות קיים9. לדוגמה, מחקרים על algs בחולים אנושיים לעתים קרובות לכמת את BD כדי וריד הפורטל (PV) יחס על ידי ניתוח לפחות 10 כלי הפורטל לכל כבד ביופסיה9,10. ניתוח של הצורה ואת הנוכחות הכללית או העדר פטנטים BDs, בשילוב עם כימיה סרום, יכול לספק מידע רב ערך על התפתחות BD בעכברים11,12,13. עם זאת, עכברים יכולים לאבד מספר משמעותי של BDs עם עלייה צנועה רק סרום בילירובין רמה8. לפיכך, שיטה כמותית המוערכת את מספר BDs הנוכחי לכל PV יכול לספק מידה ישירה יותר של המידה של BD דלות בעכברים. בדו ח האחרונות, אנו ככמת את מספר BDs לכל PV בכל האונות בכבד ודיווח ירידה משמעותית ביחס BD ל-PV ב Jag1 +/– בעלי חיים8. במהלך הניתוח שלנו, הבחנו כי למרות וריאציה משמעותית בדרגת תגובה דלקתית ותגובות ductular, BD ליחס PV לא להראות ההבדלים הרבה8. יתר על כן, הקוונפיקציה של BD ליחס PV מותר לנו להדגים כי הסרת עותק אחד של הגליסישיאז גן Poglut1 ב Jag1 +/– בעלי חיים יכולים לשפר באופן משמעותי את שלהם BD דלות8. ברקע Jag1 +/+ , אובדן מותנה של Poglut1 בתאי שריר וסקולריים החלקה תוצאות עלייה מתקדמת במספרי BD, אשר צנוע (20-30%) ב-P7 אבל הופך להיות בולט במבוגרים8. שוב, טכניקה זו אפשרה לנו להראות כי אפילו ב P7, הגידול בצפיפות BD בבעלי חיים אלה הוא משמעותי מבחינה סטטיסטית. של הערה, את צפיפות ה-BD מוגברת ב-גנוטיפ זה בגיל ארבעה חודשים היה מאומת באמצעות ניתוח שחקנים שרף גם. 8 תצפיות אלה ודוחות אחרים שנמדדו צפיפות BD במודלים algs עכבר שונים14,15 בקשה לנו לשלב את השיטה הזו לתוך האסטרטגיה הכוללת שלנו לנתח פגמים במרה במוטציות שונות ועכברים טרנסגניים.

כאן, אנו פירוט טכניקה פשוטה אשר ניתן להשתמש בה כדי לבחון את מידת ה-BD דלות בדגמי העכבר של מחלת הכבד (איור 1). בשיטה זו, שיתוף בשילוב עם סמנים הכולאנציט (CK) 8 ו CK19 (להלן הספקטרום הרחב CK, wsCK) משמש כדי להמחיש BDs ו המרה משולבת בכבד העכבר. נוגדן נגד אקטין שריר החלקה אלפא (αSMA) מתווסף לצביעת כלי התוויות. ניתוח שיטתי של BD ל-PV יחס בסעיף המכסה את כל האונות בכבד מבטיח כי מספר גדול של PVs מנותח עבור כל גנוטיפ. מאז השיטה שלנו מסתמך על ככמת BDs ו PVs ב-2D תמונות, זה לא מתאים ללמוד את ההשפעות של מוטציה נתונה על המבנה התלת-ממדי של עץ המרה או שלמות של תעלות המרה הקטן. עם זאת, הוא מספק אסטרטגיה פשוטה ואובייקטיבית עבור חוקרים להעריך את פיתוח המרה בעכבר.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

כל בעלי החיים שוכנו במתקן לבעלי חיים של המכשול בביילור קולג ' לרפואה לטיפול בבעלי חיים מוסדיים והנחיות וועדות שימוש בפרוטוקולים בעלי חיים מאושרים.

1. אוסף של רקמת הכבד של העכבר

  1. הכנת העכבר לקציר הכבד
    1. המתת החסד של העכבר באמצעות isofלוריאן.
    2. לבצע נקע בצוואר הרחם של העכבר כדי להבטיח מוות.
    3. לעשות חתך רוחבי בערך סנטימטר אחד מתחת לכלוב הצלעות.
    4. לחשוף את כל המשטח. הגחוני של הכבד
  2. אוסף של כבד העכבר
    1. בזהירות, עם מספריים קטנים, חותכים את הרצועות חיבור הכבד לאיברים אחרים בבטן.
    2. חותכים דרך BD המשותף כדי לנתק את הכבד מן המעי.
    3. בזהירות להסיר את הכבד על ידי החזקת על כיס המרה ומקום מיד בצינור 50 mL ממולא שלושה רבעים על-ידי 4% פאראפורמלדהיד (בתחתית).

2. קיבוע והטבעה של הכבד בפרפין

  1. קיבעון
    1. תקן את רקמת הכבד עבור 48 h ב 4% בכיוון הכלפי מע ב -4 ° c.
    2. שטוף את הרקמה עם 70% אטוח בשעה 4 ° c.
    3. רוחצים את הרקמה פעמיים עם 95% אטוח עבור 1 כל אחד ב -4 ° c.
    4. רוחצים את הרקמה פעמיים עם 100% אטוח עבור 1 כל אחד ב -4 ° c.
  2. ניקוי
    1. לשטוף את רקמת הכבד עם ניקוי הסוכן (טבלת חומרים) שלוש פעמים עבור 30 דקות כל אחד בטמפרטורת החדר.
      הערה: הכבד צריך להרגיש נוקשה. לאחר השטיפה השלישית
  3. הטבעה של פרפין
    1. מניחים את הקלטת רקמה בתבנית רקמה בשעווה פרפין עבור 3 שוטף, 30 דקות כל אחד. יש לחמם את השעווה עד 60 ° c.
    2. ממלאים את עובש הרקמה עם פרפין שעווה לגובה שלושה רבעים ולשמור על בלוק חימום ב 60 ° c.
    3. הניחו את הכבד בעובש עם הצד הגחוני הפונה כלפי מעלה.
    4. הסר בזהירות את העובש מבלוק החימום.
    5. הניחו את החלק העליון של הקסטה על העובש והחלק העליון עם פרפין נוזלי חם.
    6. הניחו לעובש ולחסום להתקרר לטמפרטורת החדר בלילה.
      הערה: בלוקי רקמות ניתן לאחסן כעת בטמפרטורת החדר.

3. רקמת כבד

  1. הכנת בלוק למכירה
    1. מניחים את העובש על הקרח 5 דקות לפני הסרת בלוק מן העובש.
    2. מניחים את הבלוק על הקרח עם נייר רקמת המעבדה הנוכחי בין בלוק וקרח.
    3. לשמור על הבלוק על הקרח כאשר לא לשים את התוצאות לחתוך את הרקמה הטובה ביותר.
  2. מחסומי את גושי הכבד
    1. באמצעות מיקרוטומה, התחילו בכך שאתם מתחילים לעבור דרך הצד השטחית והשטחי של הכבד. סעיפים אמורים להיות 5 μm.
    2. בדקו את החלקים השטוליות שמתחת למיקרוסקופ הניתוח כדי להבטיח שהמקטעים לא יקופאו מקופלים.
    3. קח חלק של הכבד הכולל את האונה מזונבת.
      הערה: עבור בלוקים מסוימים, יהיה לך שמאל, המדיאלי, ימין ו מזונבת האונות על אותה פרוסה רקמה.
    4. עבור אלה בלוקים שבו כל ארבע האונות אינם נמצאים באותה שקופית, להמשיך לחתוך עד האונות השמאלית, המדיאלי והזכות נמצאים באותה שקופית.

4. אימונוהיסטוכימיה עבור wsCK ו αSMA

  1. עיבוד שקופיות עבור אימונוהיסטוכימיה
    1. בחר שקופית אחת לכל סוג גנוזה כדי לעבור ניתוח.
    2. לשטוף את השקופית עבור 15 דקות ב קסילין, 100% אטוח, 95% אטואה ולבסוף 70% אטוח (3 x 5 דקות בכל פתרון).
    3. שטוף את השקופית במשך 5 דקות בשעהשתיים.
    4. לטבול את השקופית בפתרון אחזור אנטיגן (מבוסס טריס, גבוהה pH).
    5. חום תחת לחץ בסיר לחץ עבור 3 דקות ב 10 psi.
    6. אפשר לשקופית להתקרר לטמפרטורת החדר (כ-35 דקות).
  2. חסימת חתכי הרקמה
    1. באמצעות עט פאפ, יש לחלק את המקטעים בשקופית.
    2. החלת מלוחים מאגור פוספט (PBS) + 0.1% יצירת רצף כדי לכסות את המקטע פעמיים, 5 דקות כל אחד.
    3. הפוך את מאגר חסימת ידי ערבוב סרום עז רגיל (NGS) ב 1:50 ב-PBS + 0.3% טריטון. כדי להיות מספיק מאגר עבור חסימת ויישום הנוגדן העיקרי, 100 μL לסעיף מספיק.
    4. החל 100 μL של פתרון חסימה לכל מקטע.
    5. הגנה מפני השקופיות מכוסות בפתרון החסימה ב-4 ° c עבור 1 h.
  3. צביעת עבור wsCK ו αSMA
    1. לדלל נגד CK8 ונגד CK19 נוגדנים16 (מחקרים התפתחותיים יפידים בנק, troma-I ו TROMA-III, בהתאמה) 1:20 במאגר חסימת לכתם עבור wsCK. לדלל את הנוגדן anti-αSMA17 (הטבלה של חומרים) כדי 1:200 באותו מאגר.
    2. החל 100 μL של פתרון הנוגדן מדולל המכיל את כל שלושת הנוגדנים לכל מקטע.
    3. מודיית את השקופיות מכוסה פתרון נוגדן ב 4 ° c לילה.
    4. שטוף את השקופיות עם PBS + 0.1% טריטון שלוש פעמים, 5 דקות כל אחד.
    5. לדלל נוגדנים משניים (אנטי עכברוש-Alexa488 ונגד עכבר-Cy5) 1:200 ב-PBS + 0.3% טריטון.
    6. החל 100 μL של פתרון הנוגדן המשני המכיל את שני הנוגדנים המשניים לשקופיות.
    7. . בטמפרטורת החדר במשך 1 שעות
  4. כתמים והרכבה גרעיניים של DAPI
    1. שטוף את השקופיות 3 פעמים, 5 דקות לכל אחד.
    2. החל 100 μL של DAPI (1:3000) לכל מקטע עבור 10 דקות.
    3. החל מדיום הרכבה Antifade (טבלה של חומרים) לשקופיות ומניחים שמיכות זכוכית על גבי סעיפים הרקמה. השאירו את השקופיות ב -4 ° c בלילה. . תסגור את השקופיות למחרת
    4. אחסן את השקופיות ב-4 ° צ' ותמונה בתוך שבוע אחד של הרכבה.

5. דימות וקוונפיקציה של BDs

  1. מקטעי בכבד הדמיה
    1. לפני הדמיה, לעוור את עצמך את גנוטיפ של המדגם עם עזרה של חבר במעבדה. ודא שכל קבצי ההדמיה אינם מסוג גנוטיפ או מידע מזהה ספציפי אחר, מלבד מספר בעל חיים/דוגמה.
    2. באמצעות מיקרוסקופ פלורסנט, לקחת תמונות 20x בזום 1x של כל מקטע ולהבטיח כי כל PV על פני הכבד הוא התמונה. כלול את האונות השמאלית, המדיאלי, ימין, מזונבת.
      הערה: אנחנו בדרך כלל מוצאים 60-90 הפורטל משתנה לכל חיה בהתאם לגודל של הכבד.
    3. כדי לזהות את PVs, לחפש αSMA ועוד wsCK כתמים. מבנים שהם αSMA חיוביים אך חוסר כתמים wsCK אינם מבני הפורטל.
  2. זיהוי וספירה של BDs
    1. צור גיליון אלקטרוני עם העמודות הבאות: בעלי חיים/מספר לדוגמה, מספר תמונה, מספר PVs ומספר BDs.
    2. מעבר לכל תמונה, מזהה ומקליט את מספר ה-PVs לכל תמונה.
    3. זיהוי BDs פטנטים בכל תמונה על ידי נוכחות של המרה (wsCK +) סביב לומן מהגדרה. מבנים צריכים להיות ברורים ומופרדים על ידי מזנכימה מתאים אחרים wsck +.
    4. הרוזן כל BD מפטנטים ומקום באותה עמודה כמו מספר התמונה.
    5. בצע פעולה זו עבור כל תמונה שצולמה ב-PV.
    6. לחשב את הסכום של כל PVs כל BDs בדגימת הכבד.
    7. חשב את היחס BD ל-PV עבור דגימת הכבד.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

תוצאות

בעבר תועדו פגמים המרה ב Jag1 +/– בעלי חיים, מודל העכבר של algs8. כדי לקבוע את היחס BD ל-PV, שP30 מנות כבדי העכבר ומוכתמות במשותף עבור CK8 ו CK19 (wsCK) יחד עם סמן כלי הדם αSMA. לאחר מכן אנו מ, לאחר מכן את כל PVs כל האונות בכבד. כפי שמוצג באיור 2A, הגדרתי pvs כמו כלי ?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

ניתוח של פיתוח BD ותיקון בעכברים הוא כלי חשוב בלימוד פתוגנזה ומנגנון של הפרעות כיס הולסטטי. בנוסף, התפתחות הטיפולים החדשים תלויה בקביעת הפנוטיפים ובהתאם לתהליך המדידה. פנוטיפ הנוכחי במודלים העכבר כרוך בדרך כלל סרום כימיה, היסטולוגיה בכבד וכתמים חיסוני עבור מסוג תא סמנים ספציפיים. למרות טכ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

למחברים אין ניגוד אינטרסים.

Acknowledgements

המחברים מכירים את התמיכה של המכון הלאומי לבריאות (NIH) (R01 GM084135 ו R01 DK109982), פרס פיילוט/היתכנות ממרכז הרפואי של טקסס מרכז מחלת העיכול תחת NIH P30 DK56338, ופרס מאיץ של תסמונת אלג'אין . הקרן הרפואית

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
Isothesia (Isoflurane)Henry Schein11695-6776-2
DesiccatorBel-Art16-800-552
10% PFAElectron Microscopy Sciences15712
50 mL tubeThermoScientific339653
70% EthanolDecon Laboratories2401
95% EthanolDecon Laboratories2801
100% EthanolDecon Laboratories2701
HistoChoiceVWR Life SciencesH103-4Lclearing agent
Omnisette Tissue CassetteFisher HealthCare15-197-710E
MacrosetteSimportM512
Paraplast X-TRAMcCormick Scientific39503002Parrafin
Tissue MoldFisher Scientific62528-32
MicrotomeMicromHM 325
Superfrost Plus Microscope SlidesFisher Scientific12-550-15
XyleneFisher ScientificC8H10
Tris-Based Antigen RetrievalVector LaboratoriesH-3301
Pressure CookerInstant PotLux Mini
Mini Pap PenLife Technologies8877
Polyoxyethylene 20 Sorbitan Monolaurate (Tween-20)J.T. BakerX251-07
Octyl Phenol Ethoxylate (Triton-X-100)J.T. BakerX198-07
Normal Goat SerumJackson Immunoresearch005-000-121
anti-CK8Developmental Studies Hybridoma BankTROMA-IAntibody Registry ID AB531826
anti-CK19Developmental Studies Hybridoma BankTROMA-IIIAntibody Registry ID AB2133570
anti-αSMASigma AldrichA2547, Clone 1A4
anti-rat-Alexa488ThermoFisherA21208
anti-mouse-Cy5Jackson Immunoresearch715-175-151
DAPIVector LaboratoriesH-1000
22 x 50 mm2 micro cover glassVWR Life Sciences48393 059
Fluorescence MicroscopeLeicaDMI6000 B
KimwipesKimtech Science05511
VECTASHIELDVector LaboratoriesH-1000Antifade Mounting Medium

References

  1. Zong, Y., et al. Notch signaling controls liver development by regulating biliary differentiation. Development. 136 (10), 1727-1739 (2009).
  2. Clotman, F., et al. Control of liver cell fate decision by a gradient of TGFβ signaling modulated by Onecut transcription factors. Genes & Development. 19 (16), 1849-1854 (2005).
  3. Karpen, S. J. Update on the etiologies and management of neonatal cholestasis. Clin Perinatol. 29 (1), 159-180 (2002).
  4. Roskams, T. A., et al. Nomenclature of the finer branches of the biliary tree: canals, ductules, and ductular reactions in human livers. Hepatology. 39 (6), 1739-1745 (2004).
  5. Oda, T., et al. Mutations in the human Jagged1 gene are responsible for Alagille syndrome. Nature Genetics. 16 (3), 235(1997).
  6. Li, L., et al. Alagille syndrome is caused by mutations in human Jagged1, which encodes a ligand for Notch1. Nature Genetics. 16 (3), 243(1997).
  7. Xue, Y., et al. Embryonic lethality and vascular defects in mice lacking the Notch ligand Jagged1. Human Molecular Genetics. 8 (5), 723-730 (1999).
  8. Thakurdas, S. M., et al. Jagged1 heterozygosity in mice results in a congenital cholangiopathy which is reversed by concomitant deletion of one copy of Poglut1 (Rumi). Hepatology. 63 (2), 550-565 (2016).
  9. Hadchouel, M. Paucity of interlobular bile ducts. Seminars in Diagnostic Pathology. 9 (1), 24-30 (1992).
  10. Emerick, K. M., et al. Features of Alagille syndrome in 92 patients: frequency and relation to prognosis. Hepatology. 29 (3), 822-829 (1999).
  11. Poncy, A., et al. Transcription factors SOX4 and SOX9 cooperatively control development of bile ducts. Dev Biol. 404 (2), 136-148 (2015).
  12. Hofmann, J. J., et al. Jagged1 in the portal vein mesenchyme regulates intrahepatic bile duct development: insights into Alagille syndrome. Development. 137 (23), 4061-4072 (2010).
  13. McCright, B., Lozier, J., Gridley, T. A mouse model of Alagille syndrome: Notch2 as a genetic modifier of Jag1 haploinsufficiency. Development. 129 (4), 1075-1082 (2002).
  14. Andersson, E. R., et al. Mouse Model of Alagille Syndrome and Mechanisms of Jagged1 Missense Mutations. Gastroenterology. 154 (4), 1080-1095 (2018).
  15. Loomes, K. M., et al. Bile duct proliferation in liver-specific Jag1 conditional knockout mice: effects of gene dosage. Hepatology. 45 (2), 323-330 (2007).
  16. Brulet, P., Babinet, C., Kemler, R., Jacob, F. Monoclonal antibodies against trophectoderm-specific markers during mouse blastocyst formation. Proc Natl Acad Sci U S A. 77 (7), 4113-4117 (1980).
  17. Skalli, O., et al. A monoclonal antibody against alpha-smooth muscle actin: a new probe for smooth muscle differentiation. J Cell Biol. 103 (6 Pt 2), 2787-2796 (1986).
  18. Kamath, B. M., et al. A longitudinal study to identify laboratory predictors of liver disease outcome in Alagille syndrome. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 50 (5), 526(2010).
  19. Mouzaki, M., et al. Early life predictive markers of liver disease outcome in an International, Multicentre Cohort of children with Alagille syndrome. Liver International. 36 (5), 755-760 (2016).
  20. Shiojiri, N. Development and differentiation of bile ducts in the mammalian liver. Microsc Res Tech. 39 (4), 328-335 (1997).
  21. Crawford, J. M. Development of the intrahepatic biliary tree. Semin Liver Dis. 22 (3), 213-226 (2002).
  22. Kaneko, K., Kamimoto, K., Miyajima, A., Itoh, T. Adaptive remodeling of the biliary architecture underlies liver homeostasis. Hepatology. 61 (6), 2056-2066 (2015).
  23. Schaub, J. R., et al. De novo formation of the biliary system by TGFbeta-mediated hepatocyte transdifferentiation. Nature. 557 (7704), 247-251 (2018).
  24. Sparks, E. E., Huppert, K. A., Brown, M. A., Washington, M. K., Huppert, S. S. Notch signaling regulates formation of the three-dimensional architecture of intrahepatic bile ducts in mice. Hepatology. 51 (4), 1391-1400 (2010).
  25. Tanimizu, N., et al. Intrahepatic bile ducts are developed through formation of homogeneous continuous luminal network and its dynamic rearrangement in mice. Hepatology. 64 (1), 175-188 (2016).
  26. Walter, T. J., Sparks, E. E., Huppert, S. S. 3-dimensional resin casting and imaging of mouse portal vein or intrahepatic bile duct system. J Vis Exp. (68), e4272(2012).
  27. Popper, H., Kent, G., Stein, R. Ductular cell reaction in the liver in hepatic injury. J Mt Sinai Hosp N Y. 24 (5), 551-556 (1957).
  28. Yimlamai, D., et al. Hippo pathway activity influences liver cell fate. Cell. 157 (6), 1324-1338 (2014).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Explore More Articles

146Jag1

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Contact Us

Recommend to library

JoVE NEWSLETTERS

Research

Education

Authors

Librarians

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved